基因工程操作的基本程序

1、1三、将目的基因导入受体细胞三、将目的基因导入受体细胞23转化转化 方法方法将目的基因导入将目的基因导入植物细胞植物细胞将目的基因导入将目的基因导入动物细胞动物细胞将目的基因导入将目的基因导入微生物细胞微生物细胞农杆菌转化法农杆菌转化法基因枪法基因枪法花粉管通道法花粉管通道法显微注射法显微注射法感受态细胞感受态细胞目的基因进入目的基因进入_内，并且在内，并且在 受体细胞内维持受体细胞内维持_和和_的过程的过程受体细胞受体细胞稳定稳定表达表达41、将目的基因导入植物细胞将目的基因导入植物细胞（1）农杆）农杆菌转化法菌转化法特点特点:能感染能感染双子叶植物双子叶植物和和祼子植祼子植物物,对单子叶植

2、物无感染能力对单子叶植物无感染能力Ti质粒质粒的的TDNA可转移至受可转移至受体细胞并整合到其染色体上体细胞并整合到其染色体上转化过程转化过程:Ti质粒质粒目的基因目的基因构建构建表表达达载载体体导入导入植植物物细细胞胞插入插入植物细植物细胞染色胞染色DNA表达表达新新性性状状转入转入农农杆杆菌菌5（2）基因枪法）基因枪法 基因枪法又称微弹轰击法，是利用压缩气体产生基因枪法又称微弹轰击法，是利用压缩气体产生的动力，将包裹在金属颗粒表面的表达载体的动力，将包裹在金属颗粒表面的表达载体DNA打入打入受体细胞中，使目的基因与其整合并表达的方法。受体细胞中，使目的基因与其整合并表达的方法。6（3）花粉

3、通道法）花粉通道法 植物花粉在柱头上萌发后，花粉管要穿过花柱直植物花粉在柱头上萌发后，花粉管要穿过花柱直通胚囊。花粉管通道法就是在植物受粉后，花粉形成通胚囊。花粉管通道法就是在植物受粉后，花粉形成的花粉管还未愈合前，剪去柱头，然后，滴加的花粉管还未愈合前，剪去柱头，然后，滴加DNA（含目的基因），使目的基因借助花粉管通道进入受（含目的基因），使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞。体细胞。72、将目的基因导入动物细胞将目的基因导入动物细胞方法方法: 显微注射技术显微注射技术操作程序操作程序:提纯含目的提纯含目的基因表达载基因表达载体体取受精卵取受精卵显微注射显微注射移植到子宫移植到子宫受精卵发育

4、受精卵发育新性状动物新性状动物83、将目的基因导入微生物细胞将目的基因导入微生物细胞常用法：常用法：Ca2+处理处理常用菌：常用菌：大肠杆菌大肠杆菌微生物作受体细胞原因：微生物作受体细胞原因：繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少过程：过程：Ca2+处处理理大肠杆大肠杆菌菌感受态感受态细胞细胞表达载体表达载体与感受态与感受态细胞混合细胞混合感受态细感受态细胞吸收胞吸收DNA94 4、目的基因的检测与鉴定、目的基因的检测与鉴定检查是否成功检查是否成功检测检测鉴定鉴定检测转基因生物染色体的检测转基因生物染色体的DNA DNA 上是否插入了目的基因上是否插入了目的基因检

5、测目的基因是否转录出了检测目的基因是否转录出了mRNAmRNA检测目的基因是否翻译成蛋白质检测目的基因是否翻译成蛋白质抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等方法方法方法方法方法方法DNADNA分子杂交分子杂交分子杂交分子杂交抗原抗体杂交抗原抗体杂交个体水平的鉴定个体水平的鉴定10DNADNA分子杂交示意图分子杂交示意图 采用一定的技术手段，将两种生物的采用一定的技术手段，将两种生物的DNADNA分分子的单链放在一起，如果这两个单链具有互补子的单链放在一起，如果这两个单链具有互补的碱基序列，那么，互补的碱基序列就会结合的碱基序列，那么，互补的碱基序列就会结合在一起，形成杂合

6、双链区；在没有互补碱基序在一起，形成杂合双链区；在没有互补碱基序列的部位，仍然是两条游离的单链。列的部位，仍然是两条游离的单链。 P P1515思考与探究思考与探究11知识延伸知识延伸DNADNA分子杂交技术分子杂交技术 该方法是根据碱基互补配对原则，把互补的双链该方法是根据碱基互补配对原则，把互补的双链DNA解开，把单股的解开，把单股的DNA小片段用同位素、荧光分子或小片段用同位素、荧光分子或化学发光催化剂等进行标记，之后同被检测的化学发光催化剂等进行标记，之后同被检测的DNA中的中的同源互补序列杂交，从而检出所要查明的同源互补序列杂交，从而检出所要查明的DNA或基因。或基因。12 West

7、ernWestern杂交杂交蛋白质分子（抗原蛋白质分子（抗原抗体）之间的抗体）之间的杂交。它是检测目的基因是否表达出蛋白质的一种方杂交。它是检测目的基因是否表达出蛋白质的一种方法。法。具体做法是：具体做法是：第一步，将目的基因在大肠杆菌中表达出蛋白质；第一步，将目的基因在大肠杆菌中表达出蛋白质；第二步，将表达出的蛋白质注射动物进行免疫，产第二步，将表达出的蛋白质注射动物进行免疫，产生相应的抗体，并提取出抗体（一抗）；生相应的抗体，并提取出抗体（一抗）；第三步，从转基因生物中提取蛋白质，走凝胶电泳；第三步，从转基因生物中提取蛋白质，走凝胶电泳；第四步，将凝胶中的蛋白转移到硝酸纤维素膜上；第四步，

8、将凝胶中的蛋白转移到硝酸纤维素膜上；第五步，将抗体（一抗）与硝酸纤维素膜上的蛋第五步，将抗体（一抗）与硝酸纤维素膜上的蛋白杂交，这时抗体（一抗）与目的基因表达的蛋白白杂交，这时抗体（一抗）与目的基因表达的蛋白（抗原）会特异结合。（抗原）会特异结合。由于这种抗原由于这种抗原抗体的结合显示不出条带，所以抗体的结合显示不出条带，所以加入一种称为二抗的抗体，它可以与一抗结合，二抗加入一种称为二抗的抗体，它可以与一抗结合，二抗抗体上带有特殊的标记。如果目的基因表达出了蛋白抗体上带有特殊的标记。如果目的基因表达出了蛋白质，则结果为阳性。质，则结果为阳性。 131下列关于基因结构的认识中，正确的是下列关于基

9、因结构的认识中，正确的是 （ ）A大豆基因中内含子是能够编码蛋白质的序列大豆基因中内含子是能够编码蛋白质的序列B乳酸菌与酵母菌基因结构中都存在外显子和内含子乳酸菌与酵母菌基因结构中都存在外显子和内含子C大肠杆菌基因与大肠杆菌基因与RNA聚合酶结合位点位于编码区的聚合酶结合位点位于编码区的下游下游D水稻细胞基因的编码区中存在非编码序列水稻细胞基因的编码区中存在非编码序列2（多选）原核细胞与真核细胞基因结构的共同特点（多选）原核细胞与真核细胞基因结构的共同特点是是 （ ）A编码区都有能编码蛋白质的序列编码区都有能编码蛋白质的序列B编码区都是连续的编码区都是连续的C非编码区都能调控遗传信息的表达非编

10、码区都能调控遗传信息的表达D非编码区都有非编码区都有RNA聚合酶结合的位点聚合酶结合的位点DACD143、目的基因可从基因文库中获得，下列有关基因文库、目的基因可从基因文库中获得，下列有关基因文库的描述正确的是的描述正确的是A、某生物的全套基因就是一个基因文库、某生物的全套基因就是一个基因文库B、将含有某种生物不同的许多、将含有某种生物不同的许多DNA片段，导入某个片段，导入某个生物生物 体内，则这个生物就是一个基因文库体内，则这个生物就是一个基因文库C、含有一种生物所有基因的基因文库叫做基因组文、含有一种生物所有基因的基因文库叫做基因组文库库D、含有一种生物的一部分基因的基因文库叫、含有一种

11、生物的一部分基因的基因文库叫cDNA文文库库C154、在遗传工程中，若有一个控制有利性状的、在遗传工程中，若有一个控制有利性状的DNA分子片段为分子片段为ATGTGTACAC，要使其数量增多，可，要使其数量增多，可用用PCR技术进行人工复制，复制时应给予的条件是技术进行人工复制，复制时应给予的条件是 双链双链DNA分子为模板分子为模板 ATGTG或或TACAC模板链模板链 四种脱氧核苷酸四种脱氧核苷酸 四种核苷酸四种核苷酸 热稳定热稳定DNA聚合聚合酶酶引物引物 温度变化温度变化 恒温恒温A BC DD5、在基因工程中，把选出的目的基因（共、在基因工程中，把选出的目的基因（共1000个脱氧个脱

12、氧核苷酸对，其中腺嘌岭脱氧核苷酸是核苷酸对，其中腺嘌岭脱氧核苷酸是460个）放入个）放入DNA扩增仪中扩增扩增仪中扩增4代，那么，在扩增仪中应放入胞嘧啶脱代，那么，在扩增仪中应放入胞嘧啶脱氧核苷酸的个数是氧核苷酸的个数是A.540个个 B.8100个个 C.17280个个D.7560个个B166、在已知序列信息的情况下，获取目的基因的最、在已知序列信息的情况下，获取目的基因的最方便方法是方便方法是A、化学合成法、化学合成法 B、基因组文库法、基因组文库法C、cDNA文库法文库法 D、聚合酶链反应、聚合酶链反应7、下列获取目的基因的方法中需要模板链的是、下列获取目的基因的方法中需要模板链的是从基

13、因文库中获取目的基因从基因文库中获取目的基因 利用利用PCR技术技术扩增目的基因扩增目的基因 反转录法反转录法 通过通过DNA合成仪利合成仪利用化学方法人工合成用化学方法人工合成A B C DAD178、基因工程中科学家常用细菌、酵母菌等微生物作为、基因工程中科学家常用细菌、酵母菌等微生物作为受体细胞，原因是受体细胞，原因是 A结构简单、操作方便结构简单、操作方便 B繁殖速度快繁殖速度快 C遗传物质含量少、简单遗传物质含量少、简单 D性状稳定、变异少性状稳定、变异少2、基因工程常用的受体细胞有、基因工程常用的受体细胞有 大肠杆菌大肠杆菌 枯草杆菌枯草杆菌 支原体支原体 动植物细胞动植物细胞A

14、B C DBD9、基因工程是在、基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的，在分子水平上进行设计施工的，在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是A.人工合成基因人工合成基因 B.目的基因与运载体结合目的基因与运载体结合C.将目的基因导入受体细胞将目的基因导入受体细胞 D.目的基因的检测和表达目的基因的检测和表达C181912.目的基因导入受体细胞后，是否可以稳定维持和表目的基因导入受体细胞后，是否可以稳定维持和表达其遗传特性，只有通过鉴定和检测才能知道。下列属达其遗传特性，只有通过鉴定和检测才能知道。下列属于目的基因检测和鉴定的是于目的

15、基因检测和鉴定的是检测受体细胞中是否有目的基因检测受体细胞中是否有目的基因 检测受体细胞检测受体细胞中是否有致病基因中是否有致病基因 检测目的基因是否转录出检测目的基因是否转录出mRNA 检测目的基因是否翻译出蛋白质检测目的基因是否翻译出蛋白质A B C D20（多选）（多选）13.人们利用基因工程的方法，用大肠杆菌生人们利用基因工程的方法，用大肠杆菌生产人类胰岛素，这一过程涉及到产人类胰岛素，这一过程涉及到A.用适当的酶对胰岛素基因与运载体进行切割并连接用适当的酶对胰岛素基因与运载体进行切割并连接B.把重组后的把重组后的DNA分子导入受体细菌内进行扩增分子导入受体细菌内进行扩增C.检测重组检测重组DNA分子是否导入受体细菌内并表达出性分子是否导入受体细菌内并表达出性状状D.筛选出能产生胰岛素的筛选出能产生胰岛素的“工程菌工程菌” 14.下列哪项不属于基因工程技术的步骤