分析实验基本操作

1、分析实验基本操作分析实验基本操作分析实验的基本过程u称量u溶解u定容u过滤u稀释u测定-容量分析（滴定）、重量分析、仪器分析（UV、HPLC、GC等）称量v根据称量准确度的要求选择合适的天平。一般样品（50mg以上）可用万分之一天平（分度值为0.1mg）称量。对照品等量少而准确度又要求高的样品一般用十万分之一天平（分度值为0.01mg），且称量的量最好不要少于5mg。l电子天平使用前需预热30分钟。可以在准备称量前先去把天平打开，再准备称量所需的物品：药品、药匙、容量瓶or锥形瓶 l称量前，先检查一下天平水平仪是否调平，调平后，不能移动天平，否则要重新调平。 l称量时，要轻拿轻放，避免磕碰天平

2、托盘或其他部位影响天平的准确度。称量l读数时一定要关紧舱门，最好不要打开上盖称量和读数。l避免药粉撒落在天平托盘上或其他部位。（每个天平最好配一个小毛刷，以便刷去不小心撒落的药粉。） 称量溶解l以容量瓶为例，可先加少量溶剂（1/3 1/2），稍加振摇，观察一下溶解情况，如果较易溶解，再加溶剂至满刻度的3/4处，振摇使溶解，（注意没定容注意没定容之前不要塞上瓶塞反复颠倒振摇，之前不要塞上瓶塞反复颠倒振摇，这样会使较浓的溶液附着在刻度线以上和瓶塞上，使定容后浓度不准确.）。如果溶质不易溶解，再加溶剂到至满刻度的3/4处，超声溶解，（注意超声会使瓶内溶液温注意超声会使瓶内溶液温度升高，超声完成后一定

3、要放冷至室温再定容度升高，超声完成后一定要放冷至室温再定容）。l也可将准确称量好的固体溶质放在烧杯中，用少量溶剂溶解。然后把溶液沿玻璃棒转移到容量瓶里。为保证溶质能全部转移到容量瓶中，要用溶剂多次洗涤烧杯，并把洗涤溶液全部转移到容量瓶里(见图a)。 l向容量瓶内加入液体液面离标线1厘米左右时，应改用滴管小心滴加，最后使液体的弯月面与标线正好相切。l塞紧瓶塞，用倒转和摇动的方法使瓶内的液体混合均匀(见图b)。 定容l定容时不能手拿容量瓶瓶体，以防温度升高（尤其尤其是有机溶剂是有机溶剂）影响溶液体积，应用左手的拇指和食指轻捏轻捏瓶颈（刻度线上部分刻度线上部分），提离桌面，（使瓶使瓶体自然悬垂体自然

4、悬垂），眼睛视线与刻度齐平，用滴管沿瓶口缓慢滴加溶剂至凹液面的最低点（实线实线）恰与刻度相切。（注意：观察时不要把瓶子放在桌面上，弯腰或半蹲去看刻度是否平齐，因为一来很难保证视线与刻度同一水平面，二来桌子也不太可能完全水平。） 过滤l过滤时（无论是滤纸过滤或膜过滤），首先都要弃去初滤液弃去初滤液，一般要弃23次（以保证滤纸或滤膜的吸附达到饱和），弃去的同时先润洗一下接滤液的容器（锥形瓶or液相的进样瓶等），以防止容器壁的吸附。 稀释l移液管与刻度吸管的选择：如果取样量为1、2、5、10ml这样的整数体积，一般用校正过的移液管（大肚吸管）吸取，如果是其他体积（3、4、8ml等）也可用刻度吸管吸取

5、。l左手拿洗耳球，右手拿移液管，以右手拇指及中指拿住管颈标线上方l先吸取少量待量取的溶液荡洗荡洗2 2次次移液管，左手拿洗耳球轻轻将溶液吸上，眼睛注意正在上升的液面的位置，当管内液面上升至刻度标线以上时，迅速用右手食指堵住管口，取出移液管，用滤纸擦干移液管外壁用滤纸擦干移液管外壁，并使与地面垂直，稍微松开右手食指，使液面缓缓下降，此时视线应平视标线，直到弯月面与标线相切，立即紧按食指，使液体不再流出，再将移液管移入准备接受溶液的容器中，使管垂直管尖靠着容器使管垂直管尖靠着容器内壁，内壁，放开右手食指，让管内溶液自然地全部沿器壁流下，再等待再等待15s15s后后，取出移液管，切勿把残留在管尖的溶

6、液吹出。v使用同一移液管量取不同浓度溶液时要注意充分荡洗，应先量取较稀的溶液，然后量取较浓的。在吸取第一份溶液时，高于标线的距离最好不超过1cm，然后再往下放至标线，这样吸取第二份不同浓度的溶液时，可以吸得再高一些荡洗内壁，以消除第一份的影响。注意事项l容量仪器最好校正后再使用（刻度吸管例外），以确保测量体积的准确性。l滴定管、容量瓶、移液管及刻度吸管均不可用毛刷或其他粗糙东西擦洗内壁，以免造成内壁划痕，容量不准或损坏。l每次用毕应及时用自来水将内壁冲净，沥干后再用重铬酸钾洗液洗涤，用自来水冲洗干净，再用蒸馏水冲内壁3次，外壁13次，倒挂，自然沥干，不应在烘箱中烘烤。l做分析实验的仪器在洗干净

7、后一定要用蒸馏水荡洗，这一点很重要也是最最基本的。测定l容量分析（滴定）l重量分析l仪器分析（UV、HPLC、GC等）紫外-可见分光光度法测定UV-注意事项l石英吸收池的配对：在吸收池中装入同一溶剂，于规定波长测定各吸收池的透光率，如透光率相差在0.3%以下者可配对使用，否则必须加以校正。 UV-注意事项l取吸收池时，手指拿毛玻璃面的两侧。l装样品溶液的体积以池体积的4/5为度。l使用挥发性溶液时应加盖。l先用滤纸吸干吸收池外壁液体，透光面再用擦镜纸由上而下擦拭干净。l吸收池放入样品室时应注意每次放入方向相同。l使用后用溶剂及水冲洗干净，晾干防尘保存。l吸收池如污染不易洗净时可用硫酸-发烟硝酸

8、（3:1v/v）混合液稍加浸泡后，洗净备用。如用重铬酸钾清洁液清洗时，吸收池不宜在清洁液中长时间浸泡，否则清洁液中的铬酸钾结晶会损坏吸收池的光学表面，并应充分用水冲洗，以防铬酸钾吸附于吸收池表面。 UV-注意事项l测定前应先检查所用的溶剂在测定波长附近是否符合要求，可用1cm石英吸收池盛溶剂以空气为空白（即参比光路中不放置任何物质）测定其吸光度，应符合下表规定，并不得在溶剂的截止使用波长以下测定。以空气为空白测定溶剂在不同波长处的吸光度的规定波长范围(nm)220240241250251300300以上吸光度 0.4 0.2 0.1 0.05UV-注意事项l配制测定溶液时稀释转移次数应尽可能少

9、，转移稀释时所取容积一般应不少于5ml。含量测定时供试品应称取2份，平行操作，每份结果对平均值的偏差应在0.5%以内。如为对照品比较法，对照品一般也应称取2份。作鉴别或检查可取样品1份。l供试品溶液的浓度，应以吸光度在0.30.7之间为宜，吸光度读数在此范围误差较小，并应结合所用仪器吸光度线性范围，配制合适的浓度。UV-注意事项l选用仪器的狭缝谱带宽度应小于供试品吸收带半高宽的10%，否则测得的吸光度值会偏低，或以减小狭缝宽度时供试品溶液的吸光度不再增加为准，对于中国药典紫外测定的大部分品种，可以使用2nm缝宽，但当吸收带的半高宽小于20nm 时，则应使用较窄的狭缝，例如青霉素钾及钠的吸光度检

10、查需用1nm缝宽或更窄，否则其264nm的吸光度会偏低。UV-注意事项l测定时除另有规定外，应在规定的吸收峰2nm处，再测几点的吸光度，以核对供试品的吸收峰位置是否正确，并以吸光度最大的波长作为测定波长，除另有规定外吸光度最大波长应在该品种项下规定的波长2nm以内，否则应考虑试样的同一性、纯度以及仪器波长的准确度。l用于制剂含量测定时，应注意供试液与对照液的pH值是否一致，如pH值对吸收有影响，则应调溶液的pH值一致后再测定吸光度。HPLC测定色谱柱的使用及保存 l使用前注意事项色谱柱的储存液一般均为有机溶剂，反相柱常用甲醇、乙腈或者高比例的甲醇/乙腈-水溶液，正相柱常用脱水处理后的纯正己烷。

11、使用前，一定要注意色谱柱的储存液与待分析样品的流动相之间是否互溶。有些色谱柱（如氨基柱或氰基柱），既可用于正相体系，也可用于反相体系，如色谱柱中的贮存液为正相（环己烷）而使用条件为反相时，必须用异丙醇先置换掉色谱柱内的储存液，然后再用于反相条件，否则将会明显减少色谱柱的使用寿命。在反相色谱中，如果流动相中缓冲盐的浓度较高（0.1mmol/L），必须先用低浓度的甲醇/乙腈-水溶液（10%20%）冲洗20min，否则缓冲盐在高浓度的有机相中很容易析出，从而使色谱柱堵塞，无法恢复。l色谱柱使用方向装色谱柱时应使流动相流路的方向与色谱柱标签上箭头所示方向一致。除另有规定外，不宜反向使用，否则会导致色谱

12、柱柱效明显降低，无法恢复。l流动相流动相中所使用的各种有机溶剂应尽可能使用色谱纯，水最好为超纯水或重蒸馏水。流动相配制好后还应经0.45um或0.22um的滤膜过滤。另外，装流动相的容器和色谱系统的在线过滤器等装置应清洁，否则将影响色谱柱寿命。以硅胶为基质的各种键合相对酸和碱都很敏感，一般pH使用范围为2.57.5，应参阅色谱柱使用说明书，配制好流动相后，必要时测定pH值，防止pH 过酸过碱，以免色谱柱填料不可逆性损坏。l样品样品溶液应经0.45um或0.22um的滤膜过滤，或用固相萃取小柱（SPE）对样品溶液进行预处理；如样品成分复杂，部分组分有可能吸附在色谱柱上，最好使用前置保护柱。在用正

13、相色谱分析样品时，如无特殊要求，所有的溶剂和样品应严格脱水。l反相色谱柱用后的保存如使用缓冲液或含盐溶液作为流动相，每天实验结束后，应用10倍柱体积（对150mm柱长，约15ml）的低浓度的甲醇/乙腈-水溶液（10%20%）冲洗，使色谱柱内的盐完全溶解洗脱出，再用较高浓度的甲醇/乙腈-水溶液（50%）冲洗，最后用高浓度的甲醇/乙腈-水溶液（80%100%）冲洗，使色谱柱中的强吸附物质冲洗出来。色谱柱的保养l反相柱，可以储存于甲醇或乙腈中，正相柱可以储存于经脱水处理后的正己烷中，离子交换柱可以贮存于含5%甲醇或含0.05%叠氮化钠的水中，并将色谱柱两端的堵头堵上，以免干枯，室温保存。色谱柱的长期保存色谱柱的再生l色谱柱使用一段时间后，会发生柱压上升、柱效降低的现象。这主要是柱床上端或过滤片处积累了污染物，可通过再生予以消除。正相柱按极性增大的顺序，依次用2030倍柱体积的正己烷、二氯甲烷和异丙醇冲洗色谱柱，然后，按反顺序冲洗，最后用干燥的正己烷平衡。反相柱首先用蒸馏水冲洗，再分别用2030倍柱体积的甲醇和二氯甲烷冲洗，然后按相反顺序冲洗，最后用流动相平衡。离子交换柱在低离子强度的缓冲液中长期使用会导致色谱柱失活，用稀酸缓冲液冲洗可使阳离子交换柱再生，而用