2.2.2细胞融合和单克隆抗体(修改版)(新人教版选修3)

1、知识回顾：植物体细胞杂交的过程知识回顾：植物体细胞杂交的过程用灭活病毒诱导动物细胞融合的过程：用灭活病毒诱导动物细胞融合的过程：用灭活病毒诱导动物细胞融合的原理：用灭活病毒诱导动物细胞融合的原理：P52P52（生物技（生物技术资料卡）术资料卡）总结：比较植物体细胞杂交和动物细胞融合总结：比较植物体细胞杂交和动物细胞融合输入输入浆细胞浆细胞动物体内动物体内 某抗体某抗体 某抗原某抗原 杂交瘤细胞杂交瘤细胞提取提取用特定的用特定的选选择性培养基择性培养基单抗的制备过程要点：单抗的制备过程要点：1.分离分离B淋巴细胞（淋巴细胞（B）；培养骨髓瘤细胞（）；培养骨髓瘤细胞（G）。注意）。注意B淋巴细淋巴

2、细胞是一个系列（胞是一个系列（B1,B2,B3,-Bn）。每）。每一个一个B淋巴细胞只分泌淋巴细胞只分泌一一种种特异性抗体。特异性抗体。2.细胞融合细胞融合三种融合方式三种融合方式:（BB;BG;GG）3.第一次筛选：在第一次筛选：在“特定的特定的选择培养基选择培养基”上培养筛选上培养筛选杂交瘤细胞杂交瘤细胞（只有（只有BG杂交瘤细胞存活。但杂交瘤细胞存活。但BG杂交瘤细胞也是一个系列：杂交瘤细胞也是一个系列：如如B1G,B2G-BnG。而。而BB,GG在此培养基上不能存活。）在此培养基上不能存活。）4.第二次筛选：在第二次筛选：在“多孔培养板上多孔培养板上”培养培养杂交瘤细胞系列杂交瘤细胞系

3、列每每孔只放一个杂交瘤细胞。孔只放一个杂交瘤细胞。“克隆化培养克隆化培养”每个杂交瘤细胞，并每个杂交瘤细胞，并进行进行“单一抗体检测单一抗体检测”，“检测阳性检测阳性”的孔内即是所需要的杂的孔内即是所需要的杂交瘤细胞。交瘤细胞。5.选择所需要的杂交瘤细胞克隆细胞群，选择所需要的杂交瘤细胞克隆细胞群，体外培养体外培养或注射到或注射到小鼠小鼠腹腔内增殖腹腔内增殖。6.提取单克隆抗体。提取单克隆抗体。（3 3）整个制备过程为何要经过两次筛选）整个制备过程为何要经过两次筛选? ?第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种），第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种），第二次需先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤第二次需先

4、在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后再筛选出细胞的情况下开始培养，然后再筛选出能产生特异性能产生特异性抗体的细胞群。抗体的细胞群。 由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所以产生的抗体必然是化学性质单一的，特异性强的单以产生的抗体必然是化学性质单一的，特异性强的单克隆抗体。这里的克隆抗体。这里的单克隆单克隆确有确有单个细胞单个细胞克隆的含义，克隆的含义，只不过克隆的不是只不过克隆的不是B B淋巴细胞，而是淋巴细胞，而是杂交瘤细胞杂交瘤细胞。 1 1、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B B淋巴细胞融合淋巴细胞融合? ?小鼠骨髓瘤细胞可以在体外培养条件下大量增殖，小鼠骨髓瘤细胞可以在体外培养条件下大量增殖，B B淋巴细胞能够产生抗体，细胞的同源性越近，融淋巴细胞能够产生抗体，细胞的同源性越近，融合形成的杂种细胞越易成活。合形成的杂种细胞越易成活。2 2、骨髓瘤细胞是癌细胞吗、骨髓瘤细胞是癌细胞吗? ? 有无限增殖能力的细胞是肿瘤细胞，有无限增殖能力的细胞是肿瘤细胞， 具有转移能力的肿瘤细胞，称为癌细胞，具有转移能力的肿瘤细胞，称为癌细胞， 所以说，瘤细胞不能等于癌细胞。所以说，瘤细胞不能等于癌细胞。一种诱导细胞融合的新方法一种诱导细