微生物学实验s5

1、实验五实验五 培养基的制备、培养基的制备、器具包扎和灭菌器具包扎和灭菌 l了解培养基的配制原理和方法，掌握其了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。配制过程。l了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。l熟悉分离、培养微生物前的有关准备工熟悉分离、培养微生物前的有关准备工作及操作方法。作及操作方法。实验原理培养基培养基据组成成分可分为据组成成分可分为:1.合成培养基：由各种纯化学物质按一定比例配制而成。合成培养基：由各种纯化学物质按一定比例配制而成。 2.半合成培养基：有一部分纯化学物质和另一部分

2、天然物半合成培养基：有一部分纯化学物质和另一部分天然物质配制而成。质配制而成。3.天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成。天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成。剧用途可分为剧用途可分为1.基础培养基：能满足各种微生物的营养需求基础培养基：能满足各种微生物的营养需求加富培养基：加入某种微生物生长繁殖所需的营养物质，加富培养基：加入某种微生物生长繁殖所需的营养物质，使其快速生长，便于分离使其快速生长，便于分离3.选择培养基：加入某种物质抑制其他微生物生长，使目选择培养基：加入某种物质抑制其他微生物生长，使目标微生物得到富集，便于分离标微生物得到富集，便于分离4.鉴别培养基：用来检测微生物的某

3、些代谢特性。鉴别培养基：用来检测微生物的某些代谢特性。l从培养基的物理状态可分为从培养基的物理状态可分为 1.液体培养基：不加凝固剂的液体状态培养基。液体培养基：不加凝固剂的液体状态培养基。 2.固体培养基：在液体培养基中加入固体培养基：在液体培养基中加入2%左右的凝固剂左右的凝固剂的固体状态的培养基或农副产品培养基。的固体状态的培养基或农副产品培养基。3.半固体培养基：在液体培养基中加入半固体培养基：在液体培养基中加入0.20.5%凝固凝固剂而成的半固体状培养基。剂而成的半固体状培养基。常用凝固剂为琼脂（其次为明胶），又叫洋菜、冻粉。常用凝固剂为琼脂（其次为明胶），又叫洋菜、冻粉。l消毒：消

4、毒：使用理化因素方法杀死物体表面绝大多数微生物的使用理化因素方法杀死物体表面绝大多数微生物的方法。方法。l灭菌：灭菌：采用强烈的理化方法杀死物体内外所有微生物的方采用强烈的理化方法杀死物体内外所有微生物的方法。法。l干热灭菌法：电热烘箱作为干热灭菌器干热灭菌法：电热烘箱作为干热灭菌器l加压蒸汽灭菌法其步骤如下：加压蒸汽灭菌法其步骤如下：1.1.灭菌器内加入一定量的水，将包扎好的物品放入其中。灭菌器内加入一定量的水，将包扎好的物品放入其中。2.2.接通电源，进行加热接通电源，进行加热3. 3. 排除高压锅内的冷空气，可将排气阀打开，待排出大排除高压锅内的冷空气，可将排气阀打开，待排出大气后关闭排

5、气阀；或关闭排气阀，待压力上升到气后关闭排气阀；或关闭排气阀，待压力上升到0.5kg/cm0.5kg/cm2 2时再打开排气阀，待压力回复到时再打开排气阀，待压力回复到0 0时再关闭排气时再关闭排气阀。阀。4.4.当压力达当压力达1.05kg/cm1.05kg/cm2 2时，此时灭菌器内的温度为时，此时灭菌器内的温度为1211210 0c c，维持维持30min30min。对热不稳定的培养基如含有葡萄糖、氨基酸。对热不稳定的培养基如含有葡萄糖、氨基酸等物时，应适当降低压力，延长时间。等物时，应适当降低压力，延长时间。5.5.灭菌时间一到，切断电源，待压力降至零时，才能打开灭菌时间一到，切断电源

6、，待压力降至零时，才能打开排气阀，然后打开灭菌器盖，取出物品。排气阀，然后打开灭菌器盖，取出物品。l间歇灭菌法：间歇灭菌法： 待灭菌的物品放在灭菌器或蒸笼里，每天待灭菌的物品放在灭菌器或蒸笼里，每天蒸煮蒸煮1次，每次煮沸次，每次煮沸1h，连续，连续3d重复进行。重复进行。在每两次蒸煮之间，将物品（指培养基）在每两次蒸煮之间，将物品（指培养基）放在放在370c恒温条件下培养过夜，这样可以恒温条件下培养过夜，这样可以使每次蒸煮后未杀死残留的芽孢萌发成营使每次蒸煮后未杀死残留的芽孢萌发成营养体，以便下次蒸煮时杀灭。养体，以便下次蒸煮时杀灭。l过滤除菌法：过滤除菌法： 不能用加热灭菌的液体物质（如维生

7、素、不能用加热灭菌的液体物质（如维生素、血清），一般可用细菌过滤器进行除菌。血清），一般可用细菌过滤器进行除菌。l紫外线灭菌法：紫外线灭菌法： 一般一般30w灯管，灯管，9m3空间，距地面空间，距地面2m每次打开每次打开紫外线照射紫外线照射0.5h，就使室内空气灭菌。若照射，就使室内空气灭菌。若照射紫外线时先喷洒石炭酸等化学消毒剂，可增强紫外线时先喷洒石炭酸等化学消毒剂，可增强灭菌效果。紫外线虽有较强的杀菌力，但穿透灭菌效果。紫外线虽有较强的杀菌力，但穿透力弱，即使一薄层玻璃或水层就能将大部分紫力弱，即使一薄层玻璃或水层就能将大部分紫外线滤除，因此只适用于空气及表面杀菌。外线滤除，因此只适用于

8、空气及表面杀菌。l化学药剂消毒灭菌：化学药剂消毒灭菌： 微生物实验室中常用的化学杀菌剂有升汞、甲微生物实验室中常用的化学杀菌剂有升汞、甲醛、高锰酸钾、酒精、碘酒、龙胆紫、石炭酸、醛、高锰酸钾、酒精、碘酒、龙胆紫、石炭酸、漂白粉、新洁尔灭、煤酚皂溶液，它们有的是漂白粉、新洁尔灭、煤酚皂溶液，它们有的是杀菌剂，有的是抑菌剂。杀菌剂，有的是抑菌剂。l药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、马铃薯、蔗糖；药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、马铃薯、蔗糖；可溶性淀粉、可溶性淀粉、k2hpo4、kno3、mgso47h2o、feso47h2o等等。l高压蒸汽灭菌器、恒温干热灭菌箱、细菌过滤器、紫外线高压蒸汽灭

9、菌器、恒温干热灭菌箱、细菌过滤器、紫外线杀菌灯。杀菌灯。l其它：天平、牛角匙、电炉、其它：天平、牛角匙、电炉、1n hcl、1n naoh、ph试纸、试纸、刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、带玻璃珠的三刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、带玻璃珠的三角瓶、带棉塞的无菌试管、无棉塞的空试管、培养皿、吸角瓶、带棉塞的无菌试管、无棉塞的空试管、培养皿、吸管、各种包装纸、防水纸、绳索、棉花、标签等。管、各种包装纸、防水纸、绳索、棉花、标签等。l培养基的配制培养基的配制l分离培养微生物常用器皿的准备分离培养微生物常用器皿的准备l培养基和玻璃器材的灭菌培养基和玻璃器材的灭菌l称量：按照配方正确称取各

10、种原料放于搪瓷杯中。称量：按照配方正确称取各种原料放于搪瓷杯中。l溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热溶解。热溶解。l调调ph值：用值：用 naoh或或hcl调调ph，用，用ph试纸对照试纸对照。l加琼脂溶化：加热过程中要不断搅拌，可适当补加琼脂溶化：加热过程中要不断搅拌，可适当补水。水。l分装：注意不要污染棉塞。分装：注意不要污染棉塞。l包扎成捆，挂上标签（必须用铅笔写），注明何包扎成捆，挂上标签（必须用铅笔写），注明何种培养基。种培养基。l灭菌备用：培养基灭菌后必须在灭菌备用：培养基灭菌后必须在370c下恒温培养下恒温培养24h，确定无菌生

11、长，方可使用。，确定无菌生长，方可使用。l（用于分离和培养细菌，是一种天（用于分离和培养细菌，是一种天然培养基）配方如下：然培养基）配方如下： 牛肉膏牛肉膏 3g 蛋白胨蛋白胨 5g 氯化钠氯化钠 3g 琼脂琼脂 20g 自来水自来水 1000ml ph 7.07.2 灭菌灭菌 1.05kg/cm2， 2530minl用于分离和培养真菌之用，是一种半合成培养用于分离和培养真菌之用，是一种半合成培养基，其配方如下：基，其配方如下：去皮马铃薯（或鲜豆芽）去皮马铃薯（或鲜豆芽） 200g 蔗糖蔗糖 20g 自来水自来水 1000ml 琼脂琼脂 20gph 自然自然灭菌：（含蔗糖）灭菌：（含蔗糖）1.

12、05kg/cm2 20minl用于分离和培养放线菌，是一种合成培用于分离和培养放线菌，是一种合成培养基。配方如下：养基。配方如下：可溶性淀粉可溶性淀粉 20.0g kno3 1.0g k2hpo4 0.5g mgso4 7h2o 0.5g nacl 0.5g feso4 7h2o 0.01gph 7.47.6 琼脂琼脂 20g 自来水自来水 1000ml 灭菌：灭菌： 1.05kg/cm2 30min l无菌水为下一次微生物分离实验中所需要无菌水为下一次微生物分离实验中所需要的材料。的材料。 250ml三角烧瓶（装有玻璃珠），装自来三角烧瓶（装有玻璃珠），装自来水水45ml，试管中装，试管中装9.0ml自来水，塞上棉自来水，塞上棉塞，包扎、灭菌备用。塞，包扎、灭菌备用。l三角烧瓶、试管、培养皿、吸管三角烧瓶、试管、培养皿、吸管等的包扎准备。等的包扎准备。现场演示现场演示物品的准备l第1组 1号 200mll第2组 4号 200mll第3组 8号 200mll第4组 11号 200ml分装30支试管l第5组 9号 200mll第6组 10号 200ml分装30支试管l第7组 13号 200ml分装30支试管l第8组 12号 200ml分装30支试管l第9组 2号 200mll每组