生物材料(卫检)

1、叮叮小文库生物材料检验： 分析检验生物材料中化学物质及其代谢物的含量或因化学物质引起的的生物 效应指标变化。生物材料： 是人体体液（如血液） 、排泄物（如呼吸气、尿液） 、毛发，指甲以及组织脏器等 的总称。生物标志物： 指生物系统接触外源性物质后出现的一种变化。分为三类：接触性生物标志物、 效应性生物标志物，敏感性生物标志物。生物接触限值 （BEL ）：大体相当于健康人吸入接触最高允许浓度的毒物时生物材料中被测物 的水平。尿液 可分为全日尿，晨尿，定时尿和随时尿。生物半减期： 指进入生物体内的化学物质的里量通过各种途径消除一半所需要的时间，又代 谢半减期。一、检验方法的一般要求：1. 方法的一

2、般要求1）灵敏度选择符合生物监测的基本要求2）操作简便 3）试剂易得、价廉 4）效率高 5）符合国情，易推行、推广2选择和建立生物检测方法必须考虑的因素：1）被测成分 溶解性，稳定性 含量水平 高 g/L 水平 低 ug/L二 、方法研制准则的基本内容1取样、运输、保存的原则1）取样： （1）容器工具材质不干扰测定（2）取样的操作要防止污染（ 3）取样时间根据半减期判断决定（ 4）取样的体积 尿液 =50ml 静脉血 =5ml 末梢血500ul2）保存时间：一天，三天，一周，两周一般只要求两周3）运输过程：保证分析物稳定，必要时要冷藏和冷冻运输4）防腐剂（尿）和抗凝剂（血）2. 样品预处理原则

3、1）尿液浓度按比重校正 尿标准比重 1.020，1.030 及 =75%3. 制定分析方法的程序1）分析条件选择、优化2）确定检出限 （1）影响检出限的因素：试剂的纯度，仪器的工作状态，电源稳定性光源的温度 变化、污染等不可控制的因素。（ 2）检出限的确定一般用统计法，一般用空白值的 3倍标准差计算； 色谱法用 3倍噪音水平， 检出限应小于 0.3 倍生物接触限值。 （ 3）检出限的表示方法浓度或绝对量表示，用浓度表示时要说明方法取样体积。3）精密度 ：同一个人用同一方法重复测定同一均匀样品测定结果的符合程度通常 在线性范围内取高、中、低三个浓度水平分别重复测定 35 次。用 RSD 表示或用

4、 变异系数表示 复杂方法 RSD=20 简单方法 =75% 若 105%表明存在明显的系统误差。（3）用标准方法或权威方法比较：两个方法均值相对误差应小于10%t检验 在确定一个置信水平条件，两方法测定无明显差异5）干扰试验 ：如果有干扰，要找出消除干扰的方法6）样品的稳定性实验 ：时间：当天， 3 天，1 周，2 周 温度：室温，普通冰 箱冷藏（4C）,冷冻保存（-8C）,低温冰箱（-20 C）4. 方法的验证1）新方法的验证： 必须是另一单位研制方提供方法所有技术材料验证内容：四项 线性范围，精密度，准确度，样品的稳定性。 2）引进国外标 准方法或权威方法，引进方就是验证方。5. 现场应用

5、 首先要观察检出率 观察检测结果与环境污染的符合程度 同时取非接触样品进行对照三、确定生物监测指标的依据（一）化学物质在体内的动力学过程1吸收1）呼吸道吸收气体物质通过肺泡壁及周围毛细血管吸收固体物质，溶解时吸收的前提2）皮肤 有些有机物很容易被皮肤吸收F=C/152*（0.038-0.153p）exp（-0.016MN） F皮肤吸收量 mg/cm /h C化学物质在水中的饱和度mg/ml P 辛醇-水的分配系数 MN相对分子质量许多农药易被皮肤吸收 如有机磷2. 体内分压和贮存 1 ）起始主要分布于血液中最终分布取决亲和力 2 ）血液侧得 量是反映新近吸收量或机体组织的水平 3 ）血液中毒物

6、或其他被测物并非均匀分 布 4 ）一般脂溶性溶剂及卤代烃会分布在脂肪组织中，乳汁是检测有机氯农药 最好的样品 5 ）体内储存毒物的形式大多为结合状态，测定尿液中的代谢物需 要先水解3. 生物转化 1 ）概念：外源性化合物在体内经过一系列化学变化并形成其衍生物以及分解产物的过程。 2 ）有关生物转化的讨论 是毒物发生质的变化 生物转化的数量关系，个体差异很大是一种动态过程，对时间的了解是确定采样时间的基础，生物半衰期。4. 排出 易挥发性有机溶剂从呼吸气中排出较多。长期蓄积的有机氯农药可从乳汁中 排出及叮咛中排出，易代谢的有机毒物大多以结合态从尿中排出。（二）、个体差异1、毒物在生物体内的动力学

7、过程有种属家族和个体的差异，其中生物转化过程变异极大；2、生物监测的个体差异可用监测结果的变异系数表示；3、个体差异降低了生物监测的精确性，却可帮助检出特殊敏感人群或耐受人群。（三）、接触水平（剂量）效应（反应）关系1、是确定一次生物监测指标的关键依据；2、生物监测结果与空气毒物浓度之间的相关资料，可作为选择生物监测指标的替代依据。四、检验指标的选择与分类（一）、选择的基本要求1 、特异性好； 2、具有良好的剂量效应关系； 3、稳定性好； 4、有准确可靠的检验方法。（二）、生物材料检验指标的分类1、化学物质原形：化学物质在生物体内不进行生物转化或转化速度很慢；缺乏毒物代谢动力学资料；代谢产物在

8、体内没有特异性2、化学物质代谢产物 3、生物效应指标。五、样品的采集与保存 一）、生物材料样品的选择 （一）、种类及特点2）适用性 ：水溶性化尿液 : 最常用的 1）特点： 采集方便、无损伤性、采集量大学物质、代谢产物、金属等3）尿样的种类： （ 1）全日尿（ 24h 尿）收集 24h 内的全部尿液，通常只用于住院病人（ 2）晨尿 起床后、早餐前第一次排出的尿（ 3）定时尿：生物半减期 班前尿：第 2个工作日上班前以内排出的尿班中尿：上班23h以后排出的尿 班末尿：下班前1h内排的尿 班后尿：下班以后 1h以内排出 的尿 周末尿：连续工作第五个工作日的班末尿。血液1）特点： 成分较恒定 个体差

9、异小 取样污染机会小 损伤性采集样品血样贮存条件要求较高；2）种类：血清：不抗凝离心分离出的上层清夜血浆：加抗凝剂离心分离的上层清夜 全血 红细胞。呼出气 1）特点 优点：操作方便、干扰物少，非损伤性缺点：a、被测物的含量比较低b、肺泡气中水分对某些测定有影响c、肺部“死腔”中环境空气对肺泡气稀释不稳定，影响测定结果的解释；2）适用性 监测仅限于挥发性物质 主要用于测定化学物质原形 呼出气监测结果能反映采样期间车间空气的平均浓度；3）呼出气的分类 混合呼出气、终末呼出气（肺泡气） 第一阶段呼出的是空气，第二 阶段混合呼出气，第三阶段肺泡气。（二）、生物材料样品的选择1 、同一毒物或代谢产物在不

10、同生物材料其生物学意义不一样，血镉代表近期接触水平、 尿镉反映长期接触的浓度；2、选择生物材料样品种类的要求： 被测物有特异性与外剂量有相关性 有足够的稳定 测定结果重复性好，个体差异在允许范围内采样能被受试者接受；3、 尿、血、呼出气是目前较理想的生物材料样品，美国BEI55 个尿 58%、血 27%、呼 出气 14%。二）、样品采集、运输及保存（一）、一般要求1 、采样时间：依据生物半减期；2、采样环境：无污染；3、 采样容器：测无机成分、塑料、高压聚合玻璃：硬质、石英不锈钢含Cr、Ni、Mn （不能用于测此三种元素） 使用前要求用酸液 （稀 HNO 3）浸泡 24h 洗涤； 测有机物 玻

11、璃、 塑料（不能用橡胶和添加染料的橡胶） 冷冻保存不能用玻璃仪器；4、样品的运输与保存；5、 采样记录编号检验项目受试者信息采样信息：时间、地点、环境、过程。 采样人及记录人信息（二）样品采集与保存1 、尿样1）尿样的校正： 比重校正法 标准比重1.020 校正公式C校正=（1.020-1.000 ） / （d-1.000）*c=kcd的使用范围1.0101.030 （2） 肌酐校正法.尿中被测物浓度（mg/g肌酐） =实测浓度（ mg/L） /肌酐浓度（ g/L ），肌酐含量2）采样. 采集尿液不少于 50ml, 用顶空分析法测定挥发性物质时 .收集尿样的容器要 充满尿样并知道体积， 记录

12、2 人上次排光膀胱的时间及采集样的终点时间。3）储存.贮存一般 2周. 反腐 加酸.氯仿.冷藏 测尿中汞或挥发性有机物要尽快测定 要保存 5 天以上的，最好冷冻2、血样1 ）采集 （ 1 ）、全血；要抗凝 （ 2）、血清（血浆）或红细胞2） 注意事项 采集过程避免污染 . 毛细管血 防止溶血 . 金属针头（取下）再挤出针管 时不能太快 取末梢血要避免挤压采集部位，自然流出弃去第一滴血有三种情况不宜采集毛细管血a血液量超过5ml.b采集环境有外源性化学物质存在c测定挥发性成分3） 血样的运输与保存 避免振动和温度的改变血样冷冻肯定溶血采集血清或血浆时，应分离再保存临时存放4C过夜，长时间保存要冷

13、冻测酶活性要采集后尽快分析3. 呼出气 .1）采集方法： 先深呼吸 23 次，再恢复正常呼吸时采集呼出气 采集肺泡气只收集末 端呼出气2）注意事项： 受检者必须时肺功能正常者要选择对被测物吸附小的容器要在正常呼吸状态下收集样品呼出过程不能有阻力采样的时机要依被测物代谢速度决定三、生物材料样品的预处理原则（一）无机物分析的样品处理1、稀释法 .1）. 常用的稀释剂 ;1） 稀硝酸液（尿） ， 2） TntonX 100 表面活性剂 3）基体改进剂溶液2） .常用机体改进剂：硝酸盐（NH+ Ni2+ Ca2+）磷酸盐（Na+NH+）3）. 应用实例 : 磷酸铵， 硝酸铵和 TritonX-100

14、可改善血清中铜锌的测定 磷酸氢胺，硝酸铵测定血铅可提高灰化温度至1000 C硝酸镍可使测定砷和 Se的灰化温度到1000 C 磷酸铵可使测定 Cd的灰化温度增至 800 C2、 酸提取法1.硝酸提取，测定血铅 .6mol/L 硝酸离心取上清液。标准物质 被测成分 的含量是已知的 2，盐酸提取 3 ，三氯乙酸（固体） 。铁（有效）提取 +2 价铁3、矿物化法（无机法处理）（二）有机物分析的样品处理（ p11 ）第五节 铅一、接触途径：铅矿，开采，冶炼二、代谢物和生物监测指标（一）动力学过程 .1 、吸收 1 ）呼吸道：铅尘烟蒸汽2） 消化道：铅尘 3 ）皮肤，无机物不吸收有机铅化合物可被吸收（四

15、乙基铅）2、分析：起始分布在血中有 95% 与红细胞结合最终主要以磷酸盐沉积于管中，其次是肝 肾脑等3、生物效应：抑制血红蛋白的合成1） 抑制5氨基乙酰丙酸脱水酶，导致血尿中3-ALA增加2）抑制粪川啉元氧化酶3 ）抑制亚铁螯合酶4、排除：吸收的铅主要经尿排出，尿铅生物半减期较长。（二）铅接触的生物监测指标1 、血铅：直接反映近期接触铅的情况2、尿铅：反应机体中铅的负荷量，是铅中毒的辅助诊断指标3、 生物效应指标：1）尿中b ALA2）血中铅原卟啉三、样品的采集与保存 用于尿铅血铅的测定1尿样采样时间的限定随即采集一次尿样按1%比例加HNO3, 4C可保存两周。2血样.1）末梢血 40卩L 2

16、）静脉血四、尿铅和血铅的测定石墨炉原子吸收法（一）尿铅的测定1、 原理：尿样用基体改进剂液稀释后直接进行测定，基体改进剂液NH4H2PO4+抗坏血酸2、 石墨炉升温程序一一适用涂铜石墨管干燥70 C,40S灰化450 C ,30S原子化2000 C 5S （停气）清除 2200 C 3S3、 石墨管涂钼处理，向石墨管中加20卩L钼酸铵液，石墨炉升温程序 并重复10次 升温，石墨管内壁呈灰白色4、 标准系列液配置铅标准系列液 基体改进剂液 （混合液） 正常人混合尿 ： 没有接触铅的健康人的尿，取 2 份，一份比重小于 1.020，一份比重大于 1.020，混合 成比重为 1.020的尿液5、说明

17、 ：1 ）基体改进剂液的作用 ：本法选用 4%磷酸二氢铵 -6%抗坏血酸作为基体改进剂，能有效地克服基体干扰2 ）背景吸收的扣除背景校正器扣除背景吸收，氘灯背景校正石墨管涂钼可降低背景吸收（二）血铅的测定1、 样品处理：全血用 Trit on X-100液稀释，稀HNO3酸化，进样测定2、 石墨炉升温程序： 干燥：75 C -100 C,10S（斜坡升温）灰化450C -500 C 30S保 持10S （斜坡）原子化 2400 C 7S清除 2500C 3S3、 标准系列液：铅标准液 TritonX-100 液正常人血五、生化指标的测定（）尿中b ALA的测定1、 原理：b ALA可与乙酰乙酸

18、乙酯缩合生成吡咯化合物用乙酸乙酯萃取吡咯化合物显色，加对一二甲氨基苯甲酸生成红色化合物入max=554nm2、 操作要点：两份经稀释尿样加 PH=6 缓冲液 样品管加乙酰乙酸乙酯尿样空白管补充缓冲液各沸水浴 10min 各加 4mL 乙酸乙酯萃取 离心、静置、分层 取清夜显色 10min 后测定（二）全血中游离原卟啉的测定1、原理：用乙酸-乙酸乙酯破坏红细胞盐酸萃取原卟啉，测定荧光强度2、 样品处理：1）样品：20卩L血+0.1mL生理盐水 2）加硅藻土悬浮液，乙酸乙酯一 乙酸液、振摇、破坏红细胞 3）离心，取上清液加盐酸萃取第三节、镉一、接触途径：锌矿的开采及冶炼工业上含镉材料的生产农业上也

19、有镉化合物的应 用二、代谢和生物监测指标（一）代谢 1.吸收、呼吸道和消化道 2.生物效应 急性中毒靶器官：肺 慢性中毒靶器官：肺、肾、骨3.排出少量由尿排出，属于蓄积性元素（二）生物监测指标 1 、尿镉：只反映长期接触情况 2 血镉：只反映近期接触情况三、镉接触指标的测定石墨炉原子吸收法（一）尿镉的测定1 、原理：用磷酸氢二铵液稀释，直接标准曲线法定量2、石墨炉升温顺序 1）干燥0100 C30S （斜坡）2）灰化100200 C20S（斜坡） 400C 10S（阶梯） 3）原子化1800C 5S4）清除2000C 3S3、标准系列液：镉标准液空白尿液基体改进剂液1%NH3（二）血镉测定1、

20、原理：血样加稀 HN03离心，取上清液测定，标准曲线法定量2、 标准系列液镉血标准液：抗凝小牛全血+镉标准液4%HNO3第七节：汞一、接触机会 矿的开采与冶炼 电器和仪表制造 化学工业二、代谢和生物监测指标（一） 动力学过程 1.吸收主要是呼吸道 2.分布 无机汞主要是肾、其次肝、脑 有机汞主要 是脑 其次肝、胃 3.排出 尿汞 生物半减期 23 个月（二） 生物监测指标 1 .血汞：反映近期接触无机汞的量2.尿汞：用于诊断汞中毒观察驱汞疗效三、 样品采集、保存 1尿样：随机取一次尿样加碱NaOH使浓度达到4Og/L, 4 C可保存2周2血样周末血 抗凝4C可以保存数天四、尿汞的测定冷原子吸收

21、法（一）碱性氯化亚锡还原法1原理：在碱性条件及有 Cd+存在条件下，高浓度的 Sn CI2将有机汞及无机汞还原成元素， 用测氯仪测定2标准系列液的配置汞标准液基体尿液正常人混合尿NaOH液DL-半胱氨酸 3测定 将上述标准系列液加 1滴磷酸三酯，加 SnCl2-CdSO4液立即通入空气测定（载气） 4说明：磷酸三酯 消泡Cd2+催化作用DL-半胱氨酸起稳定剂的作用，防止无机汞吸附挥发；还可使有机汞不分解测定读数：读取最大吸光度值（二）酸性 SnCl 2还原法1原理：用KMnO4和浓H2SO4分解尿样，使汞都转化成 Hg2+，用SnCb还原成Hg，吹空 气导入测汞仪2测定：尿液和标准系列液同样用

22、KMnO4和浓H2SO4分解3说明：1） KMnO4和浓H2SO4加入的顺序：先加 KMnO 4液再加浓H2SO4 2）测定前先 对气路系统进行净化；加 SnCl2 （酸性）测定空白水、吹气观察到仪器的响应值为零为止每次测定都使响应值为 0 再测第二份第三章：非金属化合物及其代谢产物第一节： CO一、代谢及生物监测指标1吸收：呼吸道2生物效应：进入机体与血红蛋白结合形成碳氧血红蛋白（HbCO ）形式导致机体组织缺O2 CO Hb HbCO3分布：血液中HbCO形式4排出呼出气约有1%被氧化成CO25生物监测指标 1）血中碳氧血红蛋白 2 ）呼出气中CO三、样品的采集与保存1. 呼出气：1）采集

23、班中（3h后）或班末呼出气2）收集终末呼出气2. 血液：1）采集班中（3h后）或接触最高浓度时的血2）抗凝3）密闭保存4 C 11周 4）最好取静脉血 5）受试者不抽烟四、血中碳氧血红蛋白的测定分光光度法131 原理：1）血中血红蛋白的四种成分：Hb、HbO2、HbCO、HbMet2） HbCO , HbMetNa 2S2O3Hb 3）测定Hb和HbCO吸光度，最大吸收波长分别为432nm 和 420nm2、测定方法：1）摩尔吸光系数的测定：用吸光系数代替（1）过饱和HbO2液的制备，血样用水和 Tris液适量稀释通入 O2 30min（2） 饱和HbO2液的制备：取（1）中2份通入N2（3）

24、饱和HbCO液制备 取（1）中2份，通入 CO 10min（4） HbCO和Hb液制备 在（2）和（3）的溶液中加 Na2&04固体（2）Hb（3）Hb，HbCO（5）分别测定420nm和430nm吸光度作为吸光常数（有四个值）2）血样测定稀释血样Na? S2O4HbHbCO分别测420nm和430nm的吸光度3计算：碳氧血红蛋白（%）430K 2 - A420KA 420（K2 K4） A 430（K1K3）A420：血样在 420nm吸光度 ；A430血样在430nm吸光度K1、K2是HbCO在420nm、430nm的吸光常数K3、K4是Hb在420nm、430nm的吸光常数4. 注意事项

25、：（1） 所用氮气和氧气应为高纯度氮和高纯度氧，不纯氮和氧气中含微量的CO,能干扰测 定结果（2）连二亚硫酸钠遇水易分解，在空气中容易被氧化失效，应以小瓶分装使用，避免接触 空气和水分（3）测定吸光系数必须采用新鲜血液，一次测定值在仪器波长稳定的情况下可以使用一 段时间，但还应定期核检。（4）测试液应尽量避免接触空气，及时测定，否则会造成结果偏低 第二节 CS2、代谢及生物监测指标（一）代谢1、吸收：呼吸道、皮肤 2、生物转化1）吸收后约7090%转化为多种代谢产物2） 目前，接触者中尿中已确认的有 3种：TTCA、2-巯基-2-噻唑啉酮-5,硫脲（其中TTCA 研究较少，生减期为 2h）3）

26、 排出：a.代谢产物随尿排出 b.约2030%以原形从呼吸道排出c.约1%以原形从尿中 排出（二）生物监测指标1、尿中TTCA :班末尿2、呼出气中CS2,目前研究较少三、样品采集与保存四、尿中TTCA 的测定一一HPLC 法1样品的处理：A、取离心后的尿样 B、稀HCL酸化：乙醚提取C、离心分层，去上层醚液于试管中D、40C用N2吹干加20ul甲醇定容2、说明：A、尿样经离心后取上层尿液，易于分离B、此法从国外引进，将原来的梯度洗脱改为等度洗脱。 国外的梯度洗脱是用两种配比的流动相切换洗脱C、 TTCA 纯品需自己纯化五、呼出气中 CS2测定（一）GC 法1、 样品处理：（1）、呼出气中CS

27、2浓度在测定范围内不需要处理，直接进样（2）、呼出气中CS2低于测定浓度范围需富集，用Tenron GC管富集2、 色谱条件：固定相：0V-17 ;检测器：火焰光度检测器3、 说明：（1）采集终末呼出气，最后呼出的 100ml （2） TenronGC管：2,6-二苯基对苯 醚的多孔聚合物，用于捕集 /热解吸 （3）富集测定要求做富集空白测定：用 180ml 气体（冲 洗气）注入空白 Tenron GC 管中，热解吸后测定（二）检气管法：快速检测法1、根据检气管中形成色带长度，粗略估计浓度2、 特点：操作简单、快速、成本低、精度差，相对偏差达20%-30%以上 第四章 芳香烃及其代谢产物第一节

28、 苯一、代谢及生物监测指标1 、吸收：主要是呼吸道，其次是皮肤2、代谢与排泄1）吸入的苯约 50%以上以原形从肺中排出，约 10%以原形储存在有机组织中2） 约 40%进入血液循环，在肝中代谢，代谢产物50%-70%的苯酚， 6%为间苯二酚， 2% 为对苯二酚，还有极少量的粘糖酸等都以结合态从尿中排出3）有极少量的苯以原形从尿中排出3、生物检测指标：1） 尿酚 A、因正常人尿中很有酚且个体差异大B、尿酚不是特异性指标C、仅用于群检2）呼出气中的苯：在测定尿酚以后，测定呼出气中苯作为确认试验3）尿苯： 1993 年有人提出用尿苯作苯接触的生物接触指标，目前，还没纳入生物监测 指标二、呼出气中苯的

29、测定一一GC法（一）原理：用塑料袋或采样管收集呼出气，呼出气用N2吹入活性炭管吸附 （-78C） 280C热解吸，用载气（2）导入色谱仪，FID检验，通过六通阀切换完成（二）苯标准气的配制：注入 20ul 苯于 100ml 玻璃配气瓶中，临用时从中抽取一定体积 注入另一配气瓶中稀释成 20ng/ml 的苯标准气（三）测定：1）取苯标准气（0.5、1.0、2.0ul、和样品分别注入呼吸气的采样管中2）将采集管37摄氏度恒温2h 3、一端与六通阀连接，一端接 N2 4）吹入冷阱（-78C、中 的活性炭管 5）热解吸导入色谱仪三、尿酚的测定一一GC法1、原理：尿样加盐酸加热（90 C水浴）水解，再用

30、乙醚萃取苯酚2、尿样采集与保存：班末尿 50ml 4 C 2周3、 样品处理与测定：1） 5.0ml尿样，1ml浓盐酸于具塞试管中，90C水浴1h 2）、用3.0ml 乙醚振摇萃取3）取上层醚液注入 GC 仪4、 标准曲线：苯酚标准系列液用3ml 乙醚提取4、色谱条件（ 1）液晶柱分离 分离苯酚和邻间对甲酚。（2）FFAP柱，分离苯酚和对甲酚5、说明：（1）3ml乙醚萃取要避免乙醚挥发，分层后不是 3ml，加乙醚补至3ml（ 2）可用内标志法定量四、甲苯、二甲苯（一）代谢及生物监测指标1 ）代谢甲苯约15%25%以原型呼出约1%从尿中排出约80%代谢甲苯一 O 苯甲酸-马尿酸马尿酸排出的半减期

31、为23人。（2）二甲苯 约5%原形从肺中呼出60%80%生物转化主要终产物是甲基 马尿酸2）生物监测指标（1）甲苯尿中马尿酸非特异性对群体判断有一定的定义呼出气体中甲苯作为确认（2）二甲苯 ：尿中马尿酸正常人尿中无甲基马尿酸特异性指标（二）、尿中马尿酸的测定比色法（ 喹啉 苯磺酰氯比色法）（ 1 ）原理（ 2）样品采集 两天后班末尿，按 100+1 体积比加氯仿（ 3）样品处理与测定（ 4）注意事项 ：1 、试剂加入顺序不能颠倒2、日光对显色有破坏作用要避光放置（加入苯磺酰氯后）第四节 乙苯一、代谢及生物监测指标（一）代谢与排泄 1、只有少部分以原形从呼吸道排出。2、 70%以上代谢后随尿排出

32、， 主要代谢产物为扁桃酸 60%苯酰甲酸 25%（二）监测指标： 1、呼出气体中乙苯 2、尿中扁桃酸（非特异性）二、生物监测方法： 1、呼出气体中乙苯的测定 GC 法与呼出气中笨的测定类似2、尿中扁桃酸的测定 HPLC 法 内标法定量 内标物 4-羟基苯甲酸第五章 芳香族硝基和氨基化合物第一节 苯胺一、代谢和生物监测指标1 、吸收：主要通过呼吸道吸收，很容易经皮肤吸收2、代谢主要代谢途径：苯胺一苯基羟胺一对氨基酚接触 24h 后，有 1560%转化为对氨基酚、以结合态随尿排出3、 生物监测指标：尿中对氨基酚正常人尿中含微量对氨基酚平均 3.7mg/L二、尿中对氨基酚的测定（一）盐酸萘乙二胺分光

33、光度法1、原理：尿中对氨基酚经水解。萃取分离重氮化偶合显色。重氮化试剂：亚硝酸盐偶和显色剂：盐酸萘乙二胺2、操作要点（1）样品处理：盐酸酸化沸水浴水解约 1人 萃取先用NaOH调中性， 用乙酸乙酯萃取，再用盐酸溶液反萃取。（2）重氮化偶合反映 重氮化，酸性条件下加过量的亚硝酸盐、反应10min 除过量的NaNO2液加氨基磺酸胺溶液至无色气泡产生止放 10min 偶合反应显色：加盐酸萘乙二胺生成紫红色（3）比色定量 580nm 尿空白管作参比，标准曲线法定量3、说明： （1）尿样应采集班末或班后尿，采样前要询问受检者是否服用药物（2）重氮化反应，NaNO2过量才能完全重氮化 但NaNO2对偶和显

34、色有干扰（3）重氮化反应应在尽量低温条件下进行，而偶合反应在 60为宜，水浴加 热前，偶合剂加入后充分混合（二） HPLC 法1 样品处理：（1）水解，同上法 （2）萃取 先在酸性条件下用乙酸乙酯萃取 再在中 性条件下用乙酸乙酯萃取对氨基酚 （两次萃取除杂质 ）2、说明： P96 用磷酸氢二钾（弱碱）调节 PH 值第二节：硝基苯一、代谢产物和生物监测指标1、吸收：很容易从皮肤吸收，主要从呼吸道吸收。2、 代谢：代谢产物有硝基酚和氨基酚还有少量苯胺，对硝基酚13 16%，对氨基酚 10%。3、排出：代谢产物与葡萄糖醛酸和硫酸结合，随尿排出。少量以原形级微量本案随呼 出气排出。4、生物监测指标 尿

35、中对硝基酚（特异性）二、尿中对硝基苯酚的测定P98（一）、邻甲酚分光光度法1、 原理：尿样经酸水解。苯取先用混合有机溶剂取，再用氢氧化铵溶液反萃取。还原用三氯化钛将其还原成对氨基酚。邻甲酚显色蓝色600nm比色定量。2、 样品处理：1）水解 盐酸酸化沸水浴1h。2）萃取 先用异戊醇一石油醚一乙醚萃取， 再用 3mol/L 氯水反萃取。3、显色测定 先加邻甲酚， 再加三氯化钛溶液。 立即振摇至黄色沉淀变成淡黄色沉淀， 过滤 30min 后 600nm 测定吸光度。（二）HPLC 法1 、样品处理 1）水解同上法。 2）萃取 二氯甲烷萃取 3 次定容至 20ml。2、说明 1）尿液采集后，尽快加盐

36、酸，10o c以下运输。2）流动相配比和流速可根据仪 器性能调整。第三节：三硝基甲苯 TNT 2,4,6三硝基甲苯一.代谢 1）经氧化还原化合等途径代谢。 2）以还原代谢途径为主，主要代谢物 4硝基 2， 6二硝基甲苯。 3）各种代谢产物以结合态随尿排出。二 .生物监测指标 4 A三 .GC 法测定尿中 4 A1、样品处理：1 ）盐酸酸化沸水浴1h。2）萃取代谢 加固体碳酸氢钠调 PH78用甲苯萃 取（尿样1ml，甲苯1ml）2色谱条件：1）检测器ECD 2）固定相：O 17（固定液）3）柱温220C 程序升温效果更好200C（ 0.4min） 10C/min220C5C/min 240C第六章：卤代烃化合物及其代谢产物的测定第一节：氯乙烯一、代谢 1）经呼吸道吸入大部分以原形从呼吸道中排出2） 少部分在肝脏转化先转化成一种致癌活性物环氧氯乙烯在甘光甘肽或半胱氨酸参与下最终代谢物为亚硫基二乙酸（硫代二乙酸）3）少量的氯乙烯以原形随尿液排出二、生物监测指标：尿中硫代氯乙酸，呼出气中氯乙烯很少作为检测指标三、GC法测定尿中硫代氯乙酸