国产琥乙红霉素组分和有关物质的分析

1、DOC格式论文，方便您的复制修改删减国产琥乙红霉素组分和有关物质的分析（作者：单位：邮编：）作者：杨亚莉王晨王明娟胡昌勤【摘要】目的考察国产琥乙红霉素原料和制剂的组分和有关物质，为修订中国药典2005年版琥乙红霉素质量标准提供依据。方法 采用 美国药典30版收载的HPLC法测定6个厂家的红霉素原料、琥乙红霉 素原料和制剂共16批样品的组分和有关物质，并采用欧洲药典5.0版收载的方法测定琥乙红霉素样品中游离红霉素的含量。结果国产红霉素以红霉素A为主组分，含有少量的红霉素 B、红霉素C和红霉 素E组分，有关物质主要为脱水红霉素 A,其它有关物质含量较少。 以红霉素为原料合成的琥乙红霉素中的主要有关

2、物质为游离红霉素。 结论建议将中国药典2005版琥乙红霉素有关物质的薄层色谱法修 订为高效液相色谱法，便于更好地控制产品质量。【关键词】琥乙红霉素；HPLC;组分和有关物质；游离红霉素ABSTRACTObjective To investigate the related substances profiles of the domestic erythromyc in ethylsucc in ate bulk material and preparati on, and provide data for the mono graph of erythromyc in ethylsucc i

3、n ate in the Chin ese Pharmacopoeia2005. Method The ingredientand the related substances oftotally 16 batches of erythromyc inethylsucc in ate bulkmaterial and preparati on of 6 manu facturers were determ ined using the HPLCmethod of USP30, and the erythromycin free base were determined using the me

4、thod of EP 5.0. Results The major in gredie nt of domestic erythromyc in was erythromyc in A and there were minor amount of erythromyc in B, C and E. The mai n related substa nces was an hydro 扮；erythromyc in A and the content of other impurities were relatively small. The major related substa nces

5、of erythromyc in ethylsucc in atesyn thesized by usingerythromyc in as starti ng materialwas erythromyc in freebase.Con clusi on To en sure better quality con trol for the products, it is recomme nded that the TLC method invo Ived in the Chin ese Pharmacopoeia 2005 to determine the related substance

6、s of erythromyc in ethylsucc in ate to be replaced by the HPLCmethod.KEY WORDS Erythromycinethylsucc in ate;HPLC; Relatedsubsta nces; Erythromyci n free base琥乙红霉素是以红霉素为原料合成的琥珀酸乙酯衍生物，其组分和 有关物质与红霉素原料中的组分和有关物质及厂家的生产工艺密切 相关。琥乙红霉素质量标准在中国药典2005版1、美国药典30版:2和欧洲药典5.0版3均有收载，中国药典2005版系采用薄 层色谱法测定有关物质，对琥乙红霉素各组分及

7、有关物质的定性和定量结果均比较差。USP30版和欧洲药典5.0版则采用HPLC法进行定 量测定。USP30版采用杂质对照品对已知杂质进行定量，控制红霉素 A烯醇醚不得超过3.0%，N)；去甲基红霉素A不得超过3.0%,任意单 个杂质不得超过3.0% ;欧洲药典则采用相对保留时间确定各组分及 已知杂质，控制任意单个杂质不得超过3.0%，总杂质不得超过5.0%， 并对合成工艺和贮藏条件下产生的游离红霉素进行了限度要求。目前国内对琥乙红霉素有关物质的研究较多46，但大多仅限于对单 个游离红霉素的测定或有关物质总量的测定，对琥乙红霉素组分及各 有关物质未作系统研究。本文参考USP3(版和欧洲药典5.0

8、版的标准， 对国内6个厂家的琥乙红霉素原料及其制剂的组分和有关物质及游 离红霉素进行了定性和定量测定，为了解国内琥乙红霉素产品质量和 修订中国药典2005版标准提供依据。1仪器与试药液相色谱仪采用Shimadzu高效液相色谱仪(LC拟20AT泵、SP朝M20A 检测器、SIL拟20AC自动进样系统)，Shimadzu LC Solution 色谱工 作站。红霉素对照品(LOT 24200M)、红霉素B对照品(LOT G1C080)红霉 素C对照品(LOT 24202F3)、N)：去甲基红霉素A对照品(LOT 24202F2) 购自美国药典委员会，叔丁醇、乙腈、甲醇为色谱纯，水为双蒸水。2实验方

9、法2.1溶液的制备(1)有关物质测定对照品溶液 取50mg红霉素对照品，精密称定，置25ml容量瓶中， 加甲醇12.5ml，振摇使溶解，用水解液磷酸氢二钾（2到100），用 磷酸调pH为8.0 稀释至刻度，摇匀。对照品溶液 分别取红霉素B对照品和红霉素C对照品各5mg精 密称定，置50ml容量瓶中，加甲醇25ml，振摇使溶解，加对照品溶 液2.5ml，用水解液稀释至刻度，摇匀。系统适用性溶液 取2mg砂；去甲基红霉素A对照品，加至20ml对 照品溶液，混匀。红霉素A烯醇醚溶液 取红霉素USP对照品10mg力口甲醇2ml溶解， 加pH3.5磷酸盐缓冲液20ml，放置30min后使用。供试品溶液

10、精密称取红霉素约100mg置50ml容量瓶中，加甲 醇至刻度。供试品溶液精密称取琥乙红霉素约115mg（制剂按标示量计算取 相当量细粉），置50ml容量瓶中，加甲醇25ml，振摇使溶解，加水 解液20ml，混匀，在室温放置12h使水解，用水解液稀释至刻度， 立即进样。（2）游离红霉素测定对照品溶液 取红霉素对照品（中国药品生物制品检定所，130307拟200215,红霉素 A92.3% 红霉素 B0.9% 红霉素 C1.2%）约16mg至50ml容量瓶中，加流动相至刻度（立即使用）。样品溶液的制备称取琥乙红霉素约125mg（制剂按标示量计算取相 当量细粉），置25ml容量瓶中，用流动相溶解并稀

11、释至刻度，立即进样。2.2试验条件(1) 有关物质 色谱柱为 Polymer Laboratories 1000A(250mnX 4.6mm 8卩m), S/N: 8M以RPS1似436A以38;流动相为pH8.0缓冲液 50ml,加400ml水，加175ml叔丁醇和30ml乙腈，用水稀释至1000ml, 混匀；检测波长215nm柱温70C ；流速1.0ml/min，进样50卩l。(2) 游离红霉素 色谱柱为 phe no me nexDose: Gemin C18 110A(250mm x 4.6mm 5卩m);流动相为含2.0g/L的乙腈：3.4g/L磷酸二氢钾 (35 : 65)溶液，用

12、磷酸调pH3.0;检测波长195nm柱温为室温；进 样量20卩l。3结果及讨论3.1琥乙红霉素有关物质峰的归属通过对照品可以确定红霉素 A、红霉素B红霉素C、N)；去甲基红 霉素A和红霉素A烯醇醚，并参考欧洲药典以相对于红霉素 A保留时 间确定了水解物(RRT小于0.3)、N)：琥珀酸乙酯红霉素(RRT 1.3)、 脱水红霉素A(RRT 1.4)和假红霉素A烯醇醚(RRT 1.5)，琥乙红霉素 有关物质的典型色谱图见图1。3.2产品有关物质分析结果(1)原料 表1结果显示，国产红霉素以红霉素 A为主组分，红霉素 B和红霉素C的含量较少，与国外红霉素组分不同，国外药典将红霉 素B和红霉素C组分作

13、为活性组分，对其限度较宽，规定红霉素B组 分不得超过12%红霉素C组分不得超过5%企业产品中红霉素B 含量略高于企业产品，其脱水红霉素 A杂质也相对较高，红霉素E 组分两个原料厂家均有，说明不同厂家、不同批次产品，由于菌种不 同、发酵工艺和培养条件变化，产品中各组分的含量也不同。企业 琥乙红霉素中脱水红霉素 A较其原料红霉素略有增加，提示合成工艺 中会引入脱水红霉素A杂质。(2)制剂表2是琥乙红霉素制剂有关物质测定结果。琥乙红霉素制 剂中的有关物质主要为脱水红霉素 A、红霉素A烯醇醚和未知杂质 (RRT0.77)，各企业产品的有关物质含量不同，企业产品中脱水红 霉素A和假红霉素A烯醇醚的含量较

14、高，使有关物质总量(除红霉素 B和红霉素C组分外各有关物质之和)较高。企业琥乙红霉素制剂 与琥乙红霉素原料中的脱水红霉素 A含量相当，提示制剂工艺中不再 产生脱水红霉素A。3.3产品中游离红霉素的测定结果测定游离红霉素要求在琥乙红霉素未水解成红霉素的条件下进行测 定，故欧洲药典5.0版采用两种色谱系统测定琥乙红霉素有关物质， 一是采用聚合柱，将琥乙红霉素水解成红霉素后测定其组分和有关物 质，二是采用C18柱系统将琥乙红霉素样品溶解后直接测定游离红霉 素。国内文献5报道的测定游离红霉素方法中红霉素峰旁有1个较难分开的未知成分峰，影响游离红霉素的准确定量。而欧洲药典 5.0版收载的方法分离效果好(

15、图2)。表3显示采用欧洲药典5.0版 方法测定琥乙红霉素制剂中游离红霉素的结果， 企业产品原料的游 离红霉素含量小于胶囊和片剂，由于游离红霉素易在高温和高湿下产生，提示生产企业在表 2琥乙红霉素制剂有关物质测定结果典型色 谱图生产工艺和储存条件上应加以控制。15批样品中企业的游离红霉素含量超过限度，提示在药品标准中控制游离红霉素含量的必要 性。4小结国产红霉素由于菌种和发酵工艺与国外产品不同，最后产品以红霉 素A为主组分，含有少量的红霉素 B、红霉素C和红霉素E组分，有 关物质主要为脱水红霉素A,其它有关物质含量较少。以红霉素为原 料合成的琥乙红霉素由于生产厂家和工艺不同，所含各组分的量也不同

16、，通过对各有关物质的定性和定量分表3琥乙红霉素中游离红霉素的测定结果剂 型企业和批次游离红霉素（）原料拟.10.62原料拟20.61原 料拟30.49胶囊拟.42.63胶囊拟.52.18胶囊拟61.93片剂 拟72.02片剂拟82.25片剂拟92.56原料拟13.65原料 拟23.36片剂1.67片剂6.59片剂4.22颗粒2.40析，可以判定产品的优劣。同时对产品中游离红霉素的考察，也可以发现不同企业间产品的差异。建议进一步提高中国药典2005版琥乙红霉素质量标准，以更好地控制产品质量。【参考文献】:1国家药典委员会.中华人民共和国药典2005年版（二部） :S.北京：化学工业出版社，2005: