蛋白质的性质实验(1)ppt课件

1、实验一实验一 蛋白质的性质实验蛋白质的性质实验 王 伟 中国海洋大学医药学院 实验目的实验目的1. 加深了解所学有关的蛋白质性质的实际加深了解所学有关的蛋白质性质的实际知识知识2. 掌握氨基酸和蛋白质常用的定性、定量掌握氨基酸和蛋白质常用的定性、定量分析的方法及原理分析的方法及原理 实验原理v一、蛋白质呈色反响一、蛋白质呈色反响v二、蛋白质沉淀反响二、蛋白质沉淀反响一、蛋白质呈色反响一、蛋白质呈色反响v蛋白质的呈色反响是指蛋白质所含的某些氨基酸及蛋白质的呈色反响是指蛋白质所含的某些氨基酸及其特殊构造，在一定条件下可与某些试剂发生了生其特殊构造，在一定条件下可与某些试剂发生了生成有色物质的反响。

2、不同蛋白质分子所含的氨基酸成有色物质的反响。不同蛋白质分子所含的氨基酸残基不完全一样，因此所发生的成色反响也不完全残基不完全一样，因此所发生的成色反响也不完全一样。一样。v呈色反响并不是蛋白质的专注反响。因此，不能仅呈色反响并不是蛋白质的专注反响。因此，不能仅仅根据呈色反响的结果为阳性就来判别被测物质一仅根据呈色反响的结果为阳性就来判别被测物质一定是蛋白质，至少要用定是蛋白质，至少要用2种以上的方法来鉴别。种以上的方法来鉴别。蛋白质呈色反响蛋白质呈色反响一米伦氏反响一米伦氏反响二双缩脲反响二双缩脲反响三蛋白黄反响三蛋白黄反响四茚三酮反响四茚三酮反响一米伦氏反响一米伦氏反响v蛋白质溶液中参与米伦

3、试剂(亚硝酸汞、硝酸汞及硝酸的混和液)，蛋白质首先沉淀，加热那么变为红色沉淀，此为酪氨酸的酚核所特有的反响，因此含有酪氨酸的蛋白质均呈米伦反响。 二双缩脲反响二双缩脲反响当尿素经加热至180左右时，两分子尿素脱去一分子氨，进而缩合成一分子双缩脲。其在碱性条件下双缩脲与铜离子结合成红紫色络合物，此反响称为双缩脲反响。蛋白质在碱性溶液中与硫酸铜作用呈现紫红色，此类似反响也称蛋白质的双缩脲反响。凡分子中含有两个以上肽键的化合物都呈此反响，故一切蛋白质都能与双缩脲试剂发生反响。 v反响过程如下：v COH2NH2N+COH2NH2N1800CH2NCNHCNH2OO+NH3三蛋白黄反响三蛋白黄反响 在

4、蛋白质分子中，具有芳香环的氨基酸(如酪氨酸，色氨酸等)残基上的苯环经硝酸作用可生成黄色的硝基化合物，在碱性条件下生成物可转变为桔黄色的硝醌衍生物; 此蛋白黄反响以苯酚为例为: OH+HNO3HONO2+H2OHONO2+NaOHONOHOH四茚三酮反响四茚三酮反响 在弱酸条件下pH5-7，蛋白质或氨基酸与茚三酮共热，可生成蓝紫色缩合物。此反响为一切蛋白质和氨基酸所共有(亚氨基酸如脯氨酸和羟脯氨酸产生黄色化合物),含有氨基的其他化合物亦能够发生此反响。v反响第一步:COCOCOHOH+CCOOHHNH2RCOCOCHOH+RCHONH3CO2+复原茚三酮v反响第二步:COCOCHOH+COCOC

5、COCOCO+2NH3NH2COCOCN+2H2O蓝紫色缩合物二、蛋白质沉淀反响二、蛋白质沉淀反响v蛋白质是亲水胶体，正常形状下，蛋白质分子外表具有水化膜和双电层，能坚持其胶体溶液的稳定性，在一定要素的影响下，蛋白质会失去电荷和脱水沉淀。v v蛋白质的变性与沉淀之间没有必然联络蛋白质沉淀反响蛋白质沉淀反响一蛋白质的盐析作用一蛋白质的盐析作用二乙醇沉淀蛋白质二乙醇沉淀蛋白质三重金属盐类沉淀蛋白质三重金属盐类沉淀蛋白质四生物碱试剂沉淀蛋白质四生物碱试剂沉淀蛋白质一蛋白质的盐析作用一蛋白质的盐析作用v加盐类如硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等可以破坏蛋白质胶体周围的水膜，同时又中和了蛋白质分子的电荷，因此使蛋

6、白质产生沉淀，这种加盐使蛋白质沉淀析出的景象称盐析v盐溶景象为低盐浓度可使蛋白质的溶解度添加，实验时要加足够量的盐v蛋白质的盐析作用是可逆过程，用盐析方法沉淀蛋白质时，较少引起蛋白量变性，经透析或用水稀释时又可溶解二乙醇沉淀蛋白质二乙醇沉淀蛋白质v有机溶剂如酒精、丙酮等可使蛋白质产生沉淀，这是由于这些有机溶剂和水有较强的作用，破坏了蛋白质分子周围的水膜，因此发生沉淀作用。假设及时将蛋白质沉淀与丙酮或乙醇分别，蛋白质沉淀那么可重新溶解于水中。三重金属盐类沉淀蛋白质三重金属盐类沉淀蛋白质v溶液pH在蛋白质等电点以上时，重金属盐类(如Pb2+、Cu2+、Hg2+及Ag+等)易与蛋白质结合成不溶性盐而

7、沉淀。v重金属盐类沉淀蛋白质通常比较完全，故常用重金属盐除去液体中的蛋白质。但应留意，在运用某些重金属盐(如硫酸铜或醋酸铅)沉淀蛋白质时，不可过量，否那么将引起沉淀再溶解。此时的溶解为生成憎水胶体的缘故。四生物碱试剂沉淀蛋白质四生物碱试剂沉淀蛋白质v生物碱是植物中具有显著生理作用的类含氮的碱性物质。凡能使生物碱沉淀，或能与生物碱作用产生颜色反响的物质，称为生物碱试剂。如鞣酸、苦味酸和磷钨酸等。v当蛋白质溶液pH值低于其等电点时，蛋白质为阳离子，能与生物碱试剂的阴离子结合成性盐而沉淀。v溶液中的蛋白亦能被有机酸沉淀，其中以三氯醋酸的作用最为灵敏而且特异。因此被用于蛋白质的首选沉淀剂，只能沉淀蛋白

8、质，不能沉淀其水解产物，加热可除去。实验资料一、实验资料： 鸡卵清蛋白液，吸管1mlx4，2mlx4，0.5mlx1，5mlx2，试管1.5x15cmx14，水浴锅，滴管，电炉二、实验试剂： 苯酚0.5%，米伦试剂，茚三酮0.1%，尿素，NaOH10%，硫酸铜1%，硫酸铵固体，95%乙醇，NaCl，醋酸铅，鞣酸，苦味酸，冰醋酸实验操作v颜色反响v沉淀反响颜色反响按以下图操作1、米伦氏反响： Pr + 米伦试剂 白色沉淀 红色2、双缩脲反响： 3、蛋白黄反响：Pr + 34d浓HNO3察看，再加NaOH，再察看4、茚三酮反响：Pr + 茚三酮0.5ml沸水浴 察看颜色变化 加热沉淀反响按以下图操作 1、盐析：、盐析： Pr+ (NH4)2SO4 粉末粉末 沉淀沉淀 察看察看 2、乙醇：、乙醇： Pr+ 95% 乙醇乙醇 沉淀沉淀 3、重金属离子：、重金属离子： Pr+ 醋酸铅或硫酸铜醋酸铅或硫酸铜 沉淀沉淀 4、生物碱试剂：、生物碱试剂： Pr+ 鞣酸或苦味酸鞣酸或苦味酸 沉淀沉淀 加水实验本卷须知(1)