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文档简介

1、荧光分光光度计测试步骤测试步骤：（一）样品准备1. 液体样品根据用户提供的 技术指标，检查浓度范围是否合适，如果需要稀释，则要考虑 所需溶剂类型和稀释倍数。2固体样品均匀粉末、片状或具有光滑平面的块状样品，均可直接测定。（二）操作步骤1. 开机：接通电源，打开主机开关，点燃（打开）光源后，根据说明书要求启动计算机。2. 检测前准备：参照仪器说明书，在20天内至少进行一次激发校准和发射校准，检测前仪器应预热。3. 工作条件的选择：环境温度应在20 C 5C;相对湿度不大于70%;电源稳定，无磁场、电场干扰。根据样品的特性及荧 光强度，选择合适的仪器工作条件 （如狭缝、PM增益、响 应时间等）。4

2、.基本测定（1）荧光激发光谱 测定设置仪器参数，扫描发射波长，找到max入em,以此为发射波长，记录发射强度作为激发 波长的函数，便得到 激发光谱。（2）荧光发射光谱测定设置仪器参数，扫描激发波长，找到max入ex,以此为激发波长，记录发射强度与发射波长间的函数关系，便得到荧光发射光谱。（3）差谱测定设置仪器参数，选择合适的工作方式， 测定背景溶液的 发射光谱并储存起来，在一定的工 作方式下，扫描样品溶液的发射波长， 得到当时的光度值和储存的背景值之间的差示值， 即 差谱。(4) 峰面积积分选择适当的工作方式，对样品溶液进行积分操作，即得到峰面积积分。(5) 荧光强度选择合适的测量参数，设置入

3、ex入em采用定点读数或 扫描方式，即可测得所选波长处的荧光强度。(6) 定量测定配制一系列已知浓度的 标准溶液，在一定的测定条件下，设置 入ex入em按照由稀至浓 的次序，测定标准溶液的荧光强度，绘制荧光强度一浓度的工作曲线，不改变仪器参数测定 未知溶液的荧光强度，由工作曲线即可求出未知溶液的浓度。(三) 分析结果的表述1.荧光激发光谱、发射光谱以及其他 光谱由仪器控制电脑直接绘出。2峰面积积分、荧光强度由仪器控制电脑计算显示。3. 定量测试：在相同的测定条件下，测定一系列已知浓度的标准溶液的荧光强度，绘制出荧光强度-浓度的工作曲线。浓度未知的溶液的荧光强度测定后，由工作曲线求出该溶液的 浓度。(四) 注意事项1. 在实验开始前，应提前打开仪器预热，并配制好所需的溶液，对于已经配制好的溶液， 在不用时放在4C冰箱中保存，放置时间超过一星期的溶液要重新配制。2. 实验所用的样品池是四面透光的石英池，拿取的时候用手指掐住池体的上角部，不能接触到四个面，清洗样品池后应用擦镜纸对其四个面进行轻轻擦拭。3. 在测试样品时，注意荧光强度范围的设定不要太高，以免测得的荧光强度超过仪器的测定上限。4. 实验结束后，要及

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