真菌萌芽培训

1、真菌感染日趋增加真菌感染日趋增加 真菌是院内感染常见微生物真菌是院内感染常见微生物真菌感染的流行病学概况真菌感染的流行病学概况 真菌感染的第一个变化：真菌感染的第一个变化：深部真菌感染上升，深部真菌感染上升，其中曲霉菌感染明显上升；其中曲霉菌感染明显上升； 近近20年真菌感染的第二个变化：白色假丝酵年真菌感染的第二个变化：白色假丝酵母菌比例减少，其他念珠菌的比例上升。母菌比例减少，其他念珠菌的比例上升。 曲霉菌引起全身感染的病例已不罕见，死亡曲霉菌引起全身感染的病例已不罕见，死亡率增加。率增加。真菌感染的危险因素真菌感染的危险因素基础疾病基础疾病广谱抗生素使用广谱抗生素使用静脉插管及各种侵袭性

2、操作静脉插管及各种侵袭性操作肾上腺糖皮质激素、免疫抑制剂、放射肾上腺糖皮质激素、免疫抑制剂、放射性或化学治疗后、器官移植后性或化学治疗后、器官移植后高龄（高龄（65岁）、婴幼儿岁）、婴幼儿住院时间长，尤其是入住住院时间长，尤其是入住ICU大于大于5天以天以上上 真菌概述真菌概述浅部真菌浅部真菌深部真菌深部真菌双相型真菌双相型真菌真菌感染的分类真菌感染的分类根据真菌侵犯人体的部位分为根据真菌侵犯人体的部位分为四类四类：浅表浅表真菌病真菌病皮肤皮肤真菌病真菌病 皮下皮下组织真菌病组织真菌病系统系统性真菌病性真菌病浅部真菌病浅部真菌病深部真菌病深部真菌病临床常见的真菌病临床常见的真菌病浅表真菌病浅表

3、真菌病花斑癣花斑癣掌黑癣掌黑癣毛结节菌病毛结节菌病皮肤真菌病皮肤真菌病皮肤癣菌病皮肤癣菌病 手足、体股、头、甲手足、体股、头、甲皮肤念珠菌病皮肤念珠菌病皮下真菌病皮下真菌病孢子丝菌病孢子丝菌病着色芽生菌病着色芽生菌病暗色丝孢霉病暗色丝孢霉病足菌肿足菌肿系统性真菌病系统性真菌病念珠菌病念珠菌病曲霉病曲霉病隐球菌病隐球菌病接合菌病接合菌病双相真菌感染双相真菌感染浅部真菌病浅部真菌病限于皮肤最外层，甲板、毛发和粘膜的感染。限于皮肤最外层，甲板、毛发和粘膜的感染。主要的感染是皮肤癣菌病和浅表念珠菌病。主要的感染是皮肤癣菌病和浅表念珠菌病。大多轻微，容易诊断，对治疗反应良好。大多轻微，容易诊断，对治疗反

4、应良好。手、足、甲癣手、足、甲癣最常见的真菌病最常见的真菌病各种头癣：传染、危害健康各种头癣：传染、危害健康皮下真菌病皮下真菌病往往经过外伤发病往往经过外伤发病 系统性真菌病系统性真菌病常起源于肺，可以播散到全身许多器官常起源于肺，可以播散到全身许多器官, ,严严重的可引重的可引 起死亡起死亡。常通过吸入致病菌孢子而获得，其致病菌腐常通过吸入致病菌孢子而获得，其致病菌腐生于土壤或腐败有机物中，或作为植物致病生于土壤或腐败有机物中，或作为植物致病菌。菌。病原体可分为两组：病原体可分为两组：真正的致病菌和条件致真正的致病菌和条件致病菌。病菌。系统性真菌病系统性真菌病危及生命危及生命系统性真菌病主要

5、的致病真菌系统性真菌病主要的致病真菌荚膜组织胞浆菌荚膜组织胞浆菌粗球孢子菌粗球孢子菌皮炎芽生菌皮炎芽生菌巴西副球孢子菌巴西副球孢子菌临床常见的条件性真菌感染临床常见的条件性真菌感染念珠菌病念珠菌病: 最常见，血源感染的第最常见，血源感染的第4位。位。曲霉菌病曲霉菌病: 常见于干细胞移植、实体器官移常见于干细胞移植、实体器官移植、大剂量化疗患者。植、大剂量化疗患者。隐球菌病隐球菌病: 艾滋病人患病率为艾滋病人患病率为10-20%。 接合菌病（毛霉病）接合菌病（毛霉病）:多见于重症糖尿病、烧多见于重症糖尿病、烧伤病及器官移植病人。伤病及器官移植病人。临床有增多趋势的条件致病性真菌临床有增多趋势的条

6、件致病性真菌非白念念珠菌感染非白念念珠菌感染毛孢子菌感染毛孢子菌感染地霉感染地霉感染镰刀菌感染镰刀菌感染枝顶孢霉感染枝顶孢霉感染暗色真菌感染暗色真菌感染马尔尼菲青霉马尔尼菲青霉真菌感染的诊断方法真菌感染的诊断方法真菌镜检真菌镜检真菌培养真菌培养组织病理组织病理生理生化生理生化血清学方法血清学方法分子生物学分子生物学真菌镜检真菌镜检革兰染色革兰染色 各种真菌均染成各种真菌均染成革兰阳性革兰阳性 直接镜检直接镜检 氢氧化钾（氢氧化钾（KOH）标本）标本墨汁标本墨汁标本 隐球菌隐球菌其它染色其它染色(糖原染色、镀银染色、乳酸酚棉蓝染糖原染色、镀银染色、乳酸酚棉蓝染色等色等)，组织病理学，组织病理学真

7、菌直接镜检的操作真菌直接镜检的操作1.采集标本于载玻片上，滴加采集标本于载玻片上，滴加10%KOH一滴一滴2.覆上盖玻片并微加热，略加压制片后作镜检覆上盖玻片并微加热，略加压制片后作镜检3.查见真菌的有形成分（菌丝、孢子）即为阳查见真菌的有形成分（菌丝、孢子）即为阳性，反之，则为阴性性，反之，则为阴性真菌直接涂片的诊断价值真菌直接涂片的诊断价值最重要又基本的检测方法，一般医院都能开展，最重要又基本的检测方法，一般医院都能开展，能为临床提供及时的诊断依据。能为临床提供及时的诊断依据。发现真菌的有形成分如菌丝、假菌丝或较多的孢发现真菌的有形成分如菌丝、假菌丝或较多的孢子往往提示真菌感染。子往往提示

8、真菌感染。根据菌丝、孢子的形态，部分可确定病原菌根据菌丝、孢子的形态，部分可确定病原菌隐球菌：墨汁涂片中可见厚而透亮的荚膜隐球菌：墨汁涂片中可见厚而透亮的荚膜念珠菌：假菌丝及芽孢念珠菌：假菌丝及芽孢马拉色菌：粗短如香蕉状的菌丝和圆形的孢子马拉色菌：粗短如香蕉状的菌丝和圆形的孢子毛霉菌：粗大而不分隔的菌丝毛霉菌：粗大而不分隔的菌丝 念珠菌病念珠菌病- -直接镜检直接镜检隐球菌病隐球菌病直接镜检直接镜检 新新 型型 隐隐 球球 菌菌组织病理学组织病理学H&EPAS组织学特点组织学特点Immunochemistry皮肤隐球菌病的组织病理学皮肤隐球菌病的组织病理学 菌丝菌丝 孢子孢子曲霉病的曲霉病的组

9、织病理学组织病理学Prof. Richardd Calderones lecture-2006, Beijing 曲霉病曲霉病曲霉头曲霉头双分支菌丝双分支菌丝曲霉病曲霉病直接镜检直接镜检双分支菌丝双分支菌丝曲霉头曲霉头 接合菌（毛霉）病接合菌（毛霉）病直接镜检直接镜检粗大无分隔菌丝粗大无分隔菌丝真菌的培养真菌的培养培养特性：培养特性： 营养要求不高，在营养要求不高，在 沙沙 保保（SabouraudSabouraud）培养基上，）培养基上， PH4PH46 6生长良好，需氧生长良好，需氧。浅部真菌浅部真菌： 22222828，生长缓慢，大多于，生长缓慢，大多于1 12 2 周周出现典型菌落。出

10、现典型菌落。深部感染真菌深部感染真菌：3737长的最好，生长较快，长的最好，生长较快，3 34 4 天天即长出菌落。即长出菌落。真菌各种培养法真菌各种培养法常用真菌培养基及用途常用真菌培养基及用途培培 养养 基基用用 途途沙保培养基沙保培养基真菌的常规培养真菌的常规培养放线菌酮氯霉素琼脂放线菌酮氯霉素琼脂同上同上玉米粉聚山梨酯玉米粉聚山梨酯80琼脂琼脂观察白假丝酵母菌的厚膜观察白假丝酵母菌的厚膜孢子孢子马铃薯葡萄糖琼脂（马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）观察真菌菌落色素，用于观察真菌菌落色素，用于鉴别真菌鉴别真菌尿素琼脂尿素琼脂用生化反应鉴别真菌用生化反应鉴别真菌 （红色癣菌和石膏样癣菌）（红色癣菌和

11、石膏样癣菌）心脑浸液葡萄糖血琼脂心脑浸液葡萄糖血琼脂深部真菌培养（二相性真深部真菌培养（二相性真菌）菌）真菌的鉴定真菌的鉴定方法方法：生化反应生化反应: :用于主要深部感染真菌如假丝酵母菌、隐用于主要深部感染真菌如假丝酵母菌、隐球菌等。球菌等。芽管形成芽管形成厚膜孢子生成厚膜孢子生成免疫学及分子生物学试验免疫学及分子生物学试验镜检镜检: :丝状真菌丝状真菌常见病原真菌常见病原真菌酵母及酵母样真菌酵母及酵母样真菌_ _念珠菌念珠菌_ _隐球菌隐球菌_ _毛孢子菌毛孢子菌_ _马拉色菌等马拉色菌等霉菌霉菌( (丝状真菌丝状真菌) )_ _皮肤癣菌皮肤癣菌_ _曲霉菌曲霉菌_ _毛霉菌毛霉菌_ _镰

12、刀菌等镰刀菌等双相真菌双相真菌念珠菌念珠菌- -实验室检查实验室检查直接镜检：可见卵园形发芽孢子及菌丝，如查到大直接镜检：可见卵园形发芽孢子及菌丝，如查到大量假菌丝，说明念珠菌处于致病状态。量假菌丝，说明念珠菌处于致病状态。染色：革兰染色，菌丝、芽孢呈蓝色，着色不均匀染色：革兰染色，菌丝、芽孢呈蓝色，着色不均匀。过碘酸染色，菌丝、芽孢染成红色。用。过碘酸染色，菌丝、芽孢染成红色。用1:10001:1000吖啶吖啶橙染色，在荧光显微镜下，菌体呈现荧光。橙染色，在荧光显微镜下，菌体呈现荧光。培养：最常用的培养基是沙保氏培基，当菌落生长培养：最常用的培养基是沙保氏培基，当菌落生长后再移种至米粉吐温后

13、再移种至米粉吐温8080培基或其它鉴定培养基中，以便培基或其它鉴定培养基中，以便进一步鉴定菌种。进一步鉴定菌种。芽管试验（芽管试验（Germ-tube test）原理原理：白念珠菌在有营：白念珠菌在有营养的液体环境中养的液体环境中3535培养，可从酵母细胞培养，可从酵母细胞生出芽管。生出芽管。结果结果：白念珠菌可在：白念珠菌可在2h2h内生成芽管，热带念内生成芽管，热带念珠菌和其他念珠菌则珠菌和其他念珠菌则否。否。 厚膜孢子形成试验厚膜孢子形成试验（Dalmo plate test）念珠菌显色培养基念珠菌显色培养基CHROMagar CandidaAPIAUX酵母鉴定系统酵母鉴定系统ID32C

14、 ID32C 酵母鉴定系统酵母鉴定系统隐球菌隐球菌(Cryptococcus)土壤、鸟粪、尤其是鸽粪中大量存在，它是机会致土壤、鸟粪、尤其是鸽粪中大量存在，它是机会致病菌。病菌。本属的共同特征为细胞呈圆形或卵圆形，偶有伸长本属的共同特征为细胞呈圆形或卵圆形，偶有伸长形或多样形，呈多边芽殖。形或多样形，呈多边芽殖。大部分菌株有荚膜。大部分菌株有荚膜。通过呼吸道进入体内通过呼吸道进入体内健康人具有免疫能力健康人具有免疫能力 易感因素易感因素AIDSAIDS、糖尿病、淋巴瘤、肿瘤、糖尿病、淋巴瘤、肿瘤、SLESLE、器官移植器官移植 隐球菌病隐球菌病cryptococcosiscryptococco

15、sis实验室检查实验室检查- -病原学检查病原学检查直接镜检直接镜检: : 墨汁染色，新生隐球菌呈圆形的双层厚壁墨汁染色，新生隐球菌呈圆形的双层厚壁孢子孢子, , 外有一层宽阔荚膜外有一层宽阔荚膜, , 边缘清楚完整边缘清楚完整, , 菌体内菌体内可见出芽（菌体计数：判断预后及疗效的指标）可见出芽（菌体计数：判断预后及疗效的指标）培养：培养基内可加氯霉素培养：培养基内可加氯霉素, , 但不可加放线菌酮但不可加放线菌酮, , 因因后者抑制本菌生长。后者抑制本菌生长。生理生化测定：采用自动微生物系统和生理生化测定：采用自动微生物系统和APIAPI鉴定鉴定组织病理学检查及免疫组化组织病理学检查及免疫

16、组化 直接镜检直接镜检 脑脊液直接墨汁涂片脑脊液直接墨汁涂片真菌培养真菌培养 SDASDA培养基，培养基，2525培养培养 实验室检查实验室检查- -其它检查方法其它检查方法 乳胶凝集试验乳胶凝集试验 阴性阴性阳性阳性隐球菌荚膜多糖抗原乳胶凝集试验隐球菌荚膜多糖抗原乳胶凝集试验标本为脑脊液或血清标本为脑脊液或血清操作简便、快速，可用于隐球菌感染的早期诊断操作简便、快速，可用于隐球菌感染的早期诊断灵敏度和特异性均在灵敏度和特异性均在95%以上，且有估计预后和疗以上，且有估计预后和疗效的作用。效的作用。隐球菌敏感药物隐球菌敏感药物两性霉素两性霉素B B5-5-氟胞嘧啶氟胞嘧啶 ( (与两性霉素与两

17、性霉素B B联合用药联合用药) )氟康唑氟康唑曲霉菌曲霉菌- -分类分类 烟曲霉是最常见的致病曲霉烟曲霉是最常见的致病曲霉其次为黄曲霉和黑曲霉其次为黄曲霉和黑曲霉棒曲霉、灰绿曲霉、构巢曲霉、米曲霉、土棒曲霉、灰绿曲霉、构巢曲霉、米曲霉、土曲霉、焦曲霉、杂色曲霉也有致病报道，但曲霉、焦曲霉、杂色曲霉也有致病报道，但发生率低。发生率低。1 1、烟曲霉菌、烟曲霉菌 在在SDA培养基上菌落生长快，棉培养基上菌落生长快，棉花样，开始为白色，花样，开始为白色，23天后转为绿天后转为绿色，数日后变为深绿色，呈粉末状。色，数日后变为深绿色，呈粉末状。分生孢子头的顶囊烧瓶状，小梗单层分生孢子头的顶囊烧瓶状，小梗

18、单层，排列成木栅状，布满顶囊表面，排列成木栅状，布满顶囊表面3/4，顶端有链形分生孢子，分生孢子球形顶端有链形分生孢子，分生孢子球形，有小棘，绿色。，有小棘，绿色。 2 2、黄曲霉菌、黄曲霉菌 在在SDA培养基上菌落生长快，黄色，表面粉末状。分生孢子培养基上菌落生长快，黄色，表面粉末状。分生孢子头顶囊球形或近球形，小梗双层，第一层长，布满顶囊表面头顶囊球形或近球形，小梗双层，第一层长，布满顶囊表面，呈放射状排列，黄色，顶端有链形孢子，呈放射状排列，黄色，顶端有链形孢子 3 3、土曲霉菌、土曲霉菌在在SDA培养基上菌落生长快，培养基上菌落生长快，小，圆形，淡褐色或褐色。小，圆形，淡褐色或褐色。分

19、生孢子头的顶囊半球形，分生孢子头的顶囊半球形，小梗双层，第一层短，第二小梗双层，第一层短，第二层长，呈放射状排列，分布层长，呈放射状排列，分布顶囊表面顶囊表面2/3，顶端有链形，顶端有链形孢子孢子 。4 4、黑曲霉菌、黑曲霉菌在在SDA培养基上菌落生长快，表面黑色，粉末状。分培养基上菌落生长快，表面黑色，粉末状。分生孢子头的顶囊球形或近球形，小梗双层，第一层生孢子头的顶囊球形或近球形，小梗双层，第一层粗大，第二层短小，呈放射状排列，布满整个顶囊粗大，第二层短小，呈放射状排列，布满整个顶囊，黑色，顶端有链形孢子，黑色，顶端有链形孢子 。5 5、杂色曲霉菌、杂色曲霉菌 在在SDA培养基上菌落生长慢

20、，菌落培养基上菌落生长慢，菌落圆形紧密，绒毛状，羊毛状，圆形紧密，绒毛状，羊毛状，颜色有数环，从青绿到红绿。颜色有数环，从青绿到红绿。分生孢子头的顶囊近球形，小分生孢子头的顶囊近球形，小梗双层，第一层长，第二层短梗双层，第一层长，第二层短，呈放射状排列，布满顶囊，呈放射状排列，布满顶囊4/5，顶端有链形孢子，顶端有链形孢子 6 6、构巢曲霉菌、构巢曲霉菌在在SDA培养基上菌落暗绿色，中央呈粉末状，边缘绒培养基上菌落暗绿色，中央呈粉末状，边缘绒毛状。分生孢子头的顶囊半球形，小梗双层，第一毛状。分生孢子头的顶囊半球形，小梗双层，第一层短，第二层长，呈放射状排列，布顶囊层短，第二层长，呈放射状排列，

21、布顶囊1/2，顶端，顶端有链形孢子。有链形孢子。 曲霉菌的主要形态特征曲霉菌的主要形态特征菌丝菌丝-分隔、分枝、无色分隔、分枝、无色/ /淡色淡色/ /深色深色足细胞足细胞-有有分生孢子梗分生孢子梗-分隔分隔/ /不分隔不分隔, ,光滑光滑/ /不光滑不光滑顶囊顶囊-烧瓶烧瓶/ /半球半球产孢结构产孢结构瓶梗瓶梗/ /瓶梗瓶梗+ +梗基梗基分生孢子分生孢子大小、颜色、纹饰大小、颜色、纹饰其它其它: :子囊果、菌核等子囊果、菌核等毛霉病毛霉病(mucormycosis)概述概述是由毛霉目中某些菌种引起人类一种感染性是由毛霉目中某些菌种引起人类一种感染性疾病疾病, , 一般呈急性快速发展一般呈急性

22、快速发展, , 少数为慢性发少数为慢性发展。展。可累及鼻、脑、肺、胃肠道、皮肤等器官，可累及鼻、脑、肺、胃肠道、皮肤等器官，其共同特征是血管壁破坏，血栓形成，周围其共同特征是血管壁破坏，血栓形成，周围组织梗塞，产生黑色坏死性损害。组织梗塞，产生黑色坏死性损害。大部分病人有严重的基础疾病大部分病人有严重的基础疾病, , 如糖尿病、如糖尿病、免疫抑制、饥饿、烧伤或其它严重的外伤。免疫抑制、饥饿、烧伤或其它严重的外伤。诊诊 断断较困难较困难, , 特别是内脏器官感染特别是内脏器官感染, , 常常是在尸检中发现。常常是在尸检中发现。 毛霉为空气的污染菌毛霉为空气的污染菌, , 血、尿、脑脊液中罕见病原

23、体生血、尿、脑脊液中罕见病原体生长长, , 血清学试验和直接血清学试验和直接ELISA ELISA 试验缺乏特异性。试验缺乏特异性。 直接镜检标本中和组织病理切片中见到宽大无分隔或极直接镜检标本中和组织病理切片中见到宽大无分隔或极少分隔菌丝少分隔菌丝, , 比培养分离更有意义。真菌镜检阴性比培养分离更有意义。真菌镜检阴性, , 不不能除外诊断。能除外诊断。 糖尿病患者糖尿病患者, , 有急性快速播散的鼻窦炎、眶组织蜂窝织有急性快速播散的鼻窦炎、眶组织蜂窝织炎、支气管炎、支气管或叶的肺炎炎、支气管炎、支气管或叶的肺炎, , 应考虑毛霉病的诊应考虑毛霉病的诊断。断。毛霉菌的形态毛霉菌的形态直接镜检

24、直接镜检可见粗大的、无分隔的、不规则、宽约可见粗大的、无分隔的、不规则、宽约3-18um3-18um、分、分枝较少且呈直角的菌丝枝较少且呈直角的菌丝在在HEHE染色清晰染色清晰,PAS,PAS和和GMSGMS染色不良染色不良发现菌丝是诊断的基础发现菌丝是诊断的基础毛霉菌的培养毛霉菌的培养毛霉目中的致病菌在许多真菌培养基上快速生长毛霉目中的致病菌在许多真菌培养基上快速生长对放线菌酮敏感，故培养基内不用此药，可加抗生对放线菌酮敏感，故培养基内不用此药，可加抗生素抑制细菌生长。素抑制细菌生长。活体标本不要研磨以免损坏菌丝，而妨碍生长。活体标本不要研磨以免损坏菌丝，而妨碍生长。置于置于25253030

25、培养，根据镜下特征鉴定菌种。培养，根据镜下特征鉴定菌种。双相型真菌双相型真菌37 37 C C 酵母相酵母相27 27 C C 菌丝相菌丝相定义定义专指那些在组织内或专指那些在组织内或3737培养时呈酵母相，于室温培养时呈酵母相，于室温中培养时则呈菌丝相的致病真菌中培养时则呈菌丝相的致病真菌包括申克孢子丝菌、马内菲青霉菌、荚膜组织胞浆包括申克孢子丝菌、马内菲青霉菌、荚膜组织胞浆菌、粗球孢子菌、巴西副球孢子菌和皮炎芽生菌等菌、粗球孢子菌、巴西副球孢子菌和皮炎芽生菌等有较严格的地域分布（仅申克孢子丝菌此点不突出有较严格的地域分布（仅申克孢子丝菌此点不突出）对人体致病力较强（有较大的侵袭性），患者不

26、一对人体致病力较强（有较大的侵袭性），患者不一定在感染前有免疫受损定在感染前有免疫受损马内菲青霉马内菲青霉（Penicilium marneffei） 属于双相型真菌属于双相型真菌 可引起马内菲青霉病（可引起马内菲青霉病（penicilliosis marneffei） 主要流行区为东南亚，如泰国主要流行区为东南亚，如泰国北部、越南、香港、台湾及北部、越南、香港、台湾及中国的南方中国的南方 目前已成为目前已成为HIV阳性患者的主阳性患者的主要条件致病菌要条件致病菌 青霉菌菌落特征青霉菌菌落特征菌丝相菌丝相酵母相酵母相 在在SDASDA或或PDAPDA上，上，2525培养，生长快，初为白色膜样或

27、绒状，逐培养，生长快，初为白色膜样或绒状，逐渐变为黄色至黄绿色绒状，渐变为黄色至黄绿色绒状，2 2周后呈灰绿色粉状，能产生可溶性酒周后呈灰绿色粉状，能产生可溶性酒红色色素，培养基呈红色（霉菌相）红色色素，培养基呈红色（霉菌相）青霉菌菌落特征青霉菌菌落特征37在在SDA上培养上培养3天（酵母相）天（酵母相）显微镜特征显微镜特征-菌丝相菌丝相 帚状枝帚状枝分散，双轮生，分散，双轮生，少数为单轮生，对称或少数为单轮生，对称或不对称，有不对称，有2 27 7个梗基个梗基，梗基上有，梗基上有3 36 6个瓶梗个瓶梗，顶端变窄，也可见单，顶端变窄，也可见单个瓶梗个瓶梗 分生孢子呈椭圆形、分生孢子呈椭圆形、

28、球形，长而散乱，不成球形，长而散乱，不成束束显微镜特征显微镜特征酵母相酵母相 可见关节孢子，圆形可见关节孢子，圆形、椭圆形及两端钝圆、椭圆形及两端钝圆有横隔的长形酵母细有横隔的长形酵母细胞胞非培养诊断的方法简介非培养诊断的方法简介真菌细胞壁成分真菌细胞壁成分 （1-31-3）- D- D-葡聚糖检测（葡聚糖检测（G G试验）试验） 真菌抗原检查真菌抗原检查 半乳甘露聚糖（半乳甘露聚糖（galactomannan) galactomannan) 抗原（抗原（GM) GM) 甘露聚糖甘露聚糖( (mannan)mannan)抗原抗原 隐球菌荚膜多糖抗原（乳胶凝集试验）隐球菌荚膜多糖抗原（乳胶凝集试

29、验）真菌特异的代谢产物（真菌特异的代谢产物（D-D-阿拉伯糖醇）阿拉伯糖醇）真菌真菌DNADNA的检测的检测镜检和培养方法镜检和培养方法敏感性低敏感性低 血培养：在肿瘤和血液病病人中，血培养：在肿瘤和血液病病人中，50%50%尸检证实尸检证实深部念珠菌感染的病例血培养阴性深部念珠菌感染的病例血培养阴性。培养结果阳性仅表示存在某种真菌，区分定植培养结果阳性仅表示存在某种真菌，区分定植 和感染困难和感染困难 培养时间长培养时间长 有些标本采集困难有些标本采集困难非培养方法优点非培养方法优点 快速报告结果快速报告结果 敏感性提高敏感性提高 取材简便取材简便 多以真菌在致病状态产生的物质为检测标多以真

30、菌在致病状态产生的物质为检测标 志物，结果阳性提示有致病性志物，结果阳性提示有致病性 定量检测可判断感染严重程度及疗效评估定量检测可判断感染严重程度及疗效评估深部真菌感染的诊断标准深部真菌感染的诊断标准EORTC/MSG2008EORTC/MSG2008修订版修订版 宿主因素宿主因素 临床特征临床特征 病原学病原学真菌镜检真菌镜检真菌培养真菌培养组织病理学检查组织病理学检查血清学检查方法（间接证据）血清学检查方法（间接证据） CSF CSF隐球菌抗原阳性隐球菌抗原阳性确诊确诊 GM-test, G-test GM-test, G-test临床诊断临床诊断Clinical Infectious

31、Diseases 2008; 46-D-D-葡聚糖（葡聚糖（G G试验）的价值试验）的价值 酵母菌、丝状真菌细胞壁成分；酵母菌、丝状真菌细胞壁成分； 用于对系统性真菌病的诊断筛查；用于对系统性真菌病的诊断筛查； 不仅检测曲霉菌，还可以检测念珠菌、不仅检测曲霉菌，还可以检测念珠菌、镰刀菌、毛孢子菌、支顶孢属等；镰刀菌、毛孢子菌、支顶孢属等； 不能检测：隐球菌和接合菌。不能检测：隐球菌和接合菌。-D-D-葡聚糖（葡聚糖（G G试验）的价值试验）的价值 敏感性：敏感性：63-100%63-100%；特异性：；特异性：74-100%74-100% 美国大多数研究限于念珠菌菌血症美国大多数研究限于念珠菌

32、菌血症 其他真菌感染（侵袭性曲霉菌病）的研究资料其他真菌感染（侵袭性曲霉菌病）的研究资料少少 缺点：易引起假阳性（血液透析；接受血制品缺点：易引起假阳性（血液透析；接受血制品治疗；药物等），而且无法区分真菌种类。治疗；药物等），而且无法区分真菌种类。 动态监测可避免假阳性动态监测可避免假阳性 半乳甘露聚糖（半乳甘露聚糖（GMGM）曲霉菌细胞壁上一种多聚糖抗原，用于曲霉感曲霉菌细胞壁上一种多聚糖抗原，用于曲霉感染的早期诊断及治疗的监测；染的早期诊断及治疗的监测；可以从血清、脑脊液、胸水、可以从血清、脑脊液、胸水、BALF检测到；检测到；敏感性：敏感性：29-100%；特异性：；特异性：80-98

33、.7%特点特点:与症状的消长成正比与症状的消长成正比,可用于疗效观察；可用于疗效观察；阳性结果出现在临床症状和影像学特征之前，阳性结果出现在临床症状和影像学特征之前，对高危人群应进行动态监测（对高危人群应进行动态监测（2次次/周）。周）。半乳甘露聚糖（半乳甘露聚糖（GMGM）试验的局限性）试验的局限性 结果阴性不能排除结果阴性不能排除IA ； 应在经验抗真菌治疗前进行检测；应在经验抗真菌治疗前进行检测； 出现阳性结果，应取另一份标本再次测定出现阳性结果，应取另一份标本再次测定; 尚未评价在新生儿或儿童血清中的表现；尚未评价在新生儿或儿童血清中的表现； 某些药物和食物可以导致假阳性；某些药物和食

34、物可以导致假阳性； 青霉菌、隐球菌、拟青霉菌出现交叉反应青霉菌、隐球菌、拟青霉菌出现交叉反应酵母菌的药敏酵母菌的药敏CLSI M44纸片扩散法药敏试验纸片扩散法药敏试验：培养基采用培养基采用MH琼脂平琼脂平皿，含皿，含2%葡萄糖和葡萄糖和0.5g/ml甲基美蓝。菌液调整到甲基美蓝。菌液调整到0.5McF，35-37孵育孵育20-24h，缓慢生长的菌株（例如隐球菌属），缓慢生长的菌株（例如隐球菌属），可以孵育，可以孵育48h后再读取结果。后再读取结果。药敏质控菌株：白念珠菌药敏质控菌株：白念珠菌ATCC90028和近平滑念珠菌和近平滑念珠菌ATCC22019。白念珠菌。白念珠菌ATCC90028

35、氟康唑质控允许范围是氟康唑质控允许范围是28-39mm；可选择质控菌株近平滑念珠菌；可选择质控菌株近平滑念珠菌ATCC22019氟康氟康唑质控允许范围是唑质控允许范围是22-33mm。酵母菌的药敏酵母菌的药敏FluconazoleZone diameter(mm)New Breakpoint according to Pfaller paper2010Zone diameter(mm)Old Breakpoint according to CLSI M44-S3SpeciesSSDDRSSDDRC.albicans1714-16131915-1814C.parapsilosis complex

36、1714-1613C.tropicalis1714-1613C.glabrata complex1514VoriconazoleZone diameter(mm)New BreakpointZone diameter(mm)Old Breakpoint according to CLSI M44-S3SpeciesSSDDRSSDDRC.albicans1715-16141714-1613C.parapsilosis complex1715-1614C.tropicalis1715-1614C.krusei1513-1412C.glabrata complex*让我们一起来解让我们一起来解决真菌问题！决真菌问题！谢谢！谢谢！真菌感染的危险因素真菌感染的危险因素基础疾病基础疾病广谱抗生素使用广谱抗生素使用静脉插管及各种侵袭性操作静脉插管及各种侵袭性操作肾上腺糖皮质激素、免疫抑制剂、放射肾上腺糖皮质激素、免疫抑制剂、放射性或化学治疗后、器官移植后性或化学治疗后、器官