实验二血涂片制备白细胞分类计数课件

1、实验二血涂片制备白细胞分类计数1 实验二实验二 血涂片制备染色及白细胞分类计数血涂片制备染色及白细胞分类计数 临床检验基础实验临床检验基础实验 王王 梅梅 江苏大学基础医学与医学技术学院江苏大学基础医学与医学技术学院 临床检验与输血教研室临床检验与输血教研室 实验二血涂片制备白细胞分类计数2 涂片技术涂片技术是制备血液样品最常用的技术。将是制备血液样品最常用的技术。将 血液样品制成单层细胞的涂片标本，染色后可对血液样品制成单层细胞的涂片标本，染色后可对 血液中各种细胞形态进行形态观察、细胞计数、血液中各种细胞形态进行形态观察、细胞计数、 细胞大小测量等工作。细胞大小测量等工作。 实验二血涂片制

2、备白细胞分类计数3 血涂片制备血涂片制备 推片 载玻片 血液 一张满意的血涂片应厚薄均匀 头 体 尾鲜明 涂片干燥后用铅笔在血涂片的头 部写上姓名和编号 李四 B 1 2 3 实验二血涂片制备白细胞分类计数4 方法与步骤方法与步骤 推片：挤出第二滴血置于载玻片的右侧推片：挤出第二滴血置于载玻片的右侧 实验二血涂片制备白细胞分类计数5 再取另一张边缘光滑的双凹片，斜置于血滴的前缘，再取另一张边缘光滑的双凹片，斜置于血滴的前缘， 先向后稍移动轻轻触及血滴，使血液沿玻片端展开先向后稍移动轻轻触及血滴，使血液沿玻片端展开 成线状。成线状。 实验二血涂片制备白细胞分类计数6 实验二血涂片制备白细胞分类计

3、数7 3045 两玻片的角度以两玻片的角度以30-4530-45为宜，轻轻将双凹片向为宜，轻轻将双凹片向 前匀速推进，即涂成血液薄膜。前匀速推进，即涂成血液薄膜。 实验二血涂片制备白细胞分类计数8 血涂片血涂片 实验二血涂片制备白细胞分类计数9 不良血涂片不良血涂片 实验二血涂片制备白细胞分类计数10 实验用品实验用品 器材器材: 医用一次性采血针、酒精棉球、经脱脂洗医用一次性采血针、酒精棉球、经脱脂洗 净的载玻片净的载玻片 、双凹片（推片）、双凹片（推片） 。 试剂试剂: Wrights（瑞氏）染液：（瑞氏）染液：Wrights色素粉色素粉 末末0.1g，溶于，溶于60 ml甲醇。甲醇。 实

4、验二血涂片制备白细胞分类计数11 瑞氏染色原理瑞氏染色原理 瑞氏粉瑞氏粉是由是由伊红伊红和和美蓝美蓝混合后组成的一种中性盐染料。伊红是混合后组成的一种中性盐染料。伊红是 一种酸性染料，为伊红钠盐，其有色部分为阴离子；美蓝是一种碱一种酸性染料，为伊红钠盐，其有色部分为阴离子；美蓝是一种碱 性染料，为氯化美蓝，有色基团为阳离子。如以性染料，为氯化美蓝，有色基团为阳离子。如以M+代表美蓝，以代表美蓝，以 E-代表伊红。将适量的代表伊红。将适量的ME溶解在溶解在甲醇甲醇中，即成为中，即成为瑞氏染液瑞氏染液。 实验二血涂片制备白细胞分类计数12 甲醇的作用甲醇的作用可使可使ME溶解，解离为溶解，解离为M

5、+和和E，这两种有色离，这两种有色离 子可以选择性地吸附血细胞内的不同成分而着色。子可以选择性地吸附血细胞内的不同成分而着色。 各种细胞及细胞的各种成分由于其化学性质不同，对各种染各种细胞及细胞的各种成分由于其化学性质不同，对各种染 料的亲和力也不一样，因此，在血片上可以见到不同的着色。料的亲和力也不一样，因此，在血片上可以见到不同的着色。细细 胞中碱性物质与酸性染料伊红结合染成红色胞中碱性物质与酸性染料伊红结合染成红色 ；细胞中的酸性物质；细胞中的酸性物质 可与染液中的碱性染料美蓝结合染成蓝色可与染液中的碱性染料美蓝结合染成蓝色 ；当细胞含酸、碱性物；当细胞含酸、碱性物 质各半时，它们既与酸

6、性染料作用，又与碱性染料作用，染成淡质各半时，它们既与酸性染料作用，又与碱性染料作用，染成淡 紫红色。紫红色。 瑞氏染色原理瑞氏染色原理 实验二血涂片制备白细胞分类计数13 血涂片染色血涂片染色 勿冲洗再加勿冲洗再加瑞氏染色瑞氏染色液液5-8滴后将滴后将液和液和 液充分混匀静置液充分混匀静置10分钟分钟 直接流水冲洗3-5分钟 （切勿先倒掉染液） 涂片经水洗干燥后用油镜 分类计数100个白细胞 李四李四 123123 涂片干燥后加瑞氏染色涂片干燥后加瑞氏染色液液5-8滴滴 覆盖整个血膜覆盖整个血膜1分钟分钟 实验二血涂片制备白细胞分类计数14 染色 浓染：待涂片在空气中完全 干燥后，滴加数滴W

7、rights 染液盖满血膜为止，染色3 5 min。 淡染：然后滴加等量缓冲液， 使其与染液均匀混合，静置 1015 min。用流水冲去染 液，吸水纸吸干，镜检。 实验二血涂片制备白细胞分类计数15 血涂片的观察血涂片的观察 低倍镜观察低倍镜观察 1.1.染色情况染色情况( (满意、偏酸、偏碱）满意、偏酸、偏碱） 2.2.细胞分布情况细胞分布情况 油镜下分类计数：体尾交界处。油镜下分类计数：体尾交界处。 油镜分类时应按一定走向，不要重复计数。（共计油镜分类时应按一定走向，不要重复计数。（共计 数数100100个白细胞）个白细胞） 李四李四123 123 实验二血涂片制备白细胞分类计数16 体尾

8、交界处体尾交界处 理想区理想区域域 细胞重叠细胞重叠 细胞太稀细胞太稀 理想区域理想区域 实验二血涂片制备白细胞分类计数17 各类成熟白细胞的形态学：各类成熟白细胞的形态学： q中性粒细胞（中性粒细胞（Ne）：在瑞氏染色血涂片上呈在瑞氏染色血涂片上呈 圆形圆形，直径直径1013m，胞浆胞浆染粉红色染粉红色，核形核形一一 叶（杆状核）至五叶不等，叶（杆状核）至五叶不等，以三叶者多见以三叶者多见，染成染成 深紫红色深紫红色，胞浆胞浆中有许多中有许多细小均匀紫红色颗粒细小均匀紫红色颗粒。 实验二血涂片制备白细胞分类计数18 q嗜酸性粒细胞（嗜酸性粒细胞（EoEo）：）：较中性粒细胞稍大较中性粒细胞稍

9、大，胞胞 核核多为两叶，呈眼镜、八字形多为两叶，呈眼镜、八字形，核染色质核染色质粗糙粗糙 染深紫红色染深紫红色，胞浆胞浆内充满内充满粗大均匀的嗜酸性颗粗大均匀的嗜酸性颗 粒粒，瑞氏染色时呈，瑞氏染色时呈桔红色桔红色，有折光性。，有折光性。 实验二血涂片制备白细胞分类计数19 q嗜碱性粒细胞（嗜碱性粒细胞（Ba）：）：胞浆胞浆中含有大小不等中含有大小不等 的的嗜碱性颗粒嗜碱性颗粒，瑞氏染色时呈，瑞氏染色时呈兰黑色兰黑色。于光学显。于光学显 微镜下常见胞浆中有小空泡，乃因嗜碱性颗粒易微镜下常见胞浆中有小空泡，乃因嗜碱性颗粒易 溶于水或因功能活动而脱颗粒所致；溶于水或因功能活动而脱颗粒所致；核核呈呈

10、淡紫红淡紫红 色常看不清色常看不清，呈杆状或分叶状。，呈杆状或分叶状。 实验二血涂片制备白细胞分类计数20 q淋巴细胞（淋巴细胞（Ly）：）：胞体胞体呈圆形，直径介于呈圆形，直径介于 615m之间，在成人血涂片中以小淋巴细胞之间，在成人血涂片中以小淋巴细胞 为多见，直径为多见，直径69m，核核大呈深紫色致密而浓大呈深紫色致密而浓 染染，胞浆胞浆量极少量极少；大淋巴细胞；大淋巴细胞胞浆胞浆量较多，呈量较多，呈 清澈的淡蓝色清澈的淡蓝色，可见，可见少量嗜苯胺蓝颗粒少量嗜苯胺蓝颗粒，胞核胞核 圆或椭圆圆或椭圆，常偏向细胞一侧常偏向细胞一侧，染色较深。，染色较深。 实验二血涂片制备白细胞分类计数21 q单核细胞（单核细胞（Mo）：）：在瑞氏染色涂片上为在瑞氏染色涂片上为12 20m，胞体胞体圆形、椭圆形或不规则形圆形、椭圆形或不规则形；核形核形多多 种多样，最重要的特点是种多样，最重要的特点是染色质染色质较细致疏松，呈较细致疏松，呈 丝网状或条缕状丝网状或条缕状，着色较淡着色较淡胞浆胞浆较多，淡兰色较多，淡兰色， 含大量含大量细小尘土