菊花的组织培养》(1)ppt课件

1、植物组织培育技术Plant Tissue Culture二、相关知识二、相关知识 离体in vitro)条件下利用人工培育条件在无菌情况下培育、生长、发育再生出完好植株的过程。 1958年，英国科学家Steward 等用胡萝卜根的愈伤组织细胞进展悬浮培育，胜利诱导出胚状体并分化为完好的小植株，不但使细胞全能性实际得到证明，而且为组织培育的技术程序奠定了根底。 运用领域运用领域 1 1、快速繁衍、快速繁衍 运用组织培育的途径运用组织培育的途径，一个单株一年可以繁衍几万到几百万个植，一个单株一年可以繁衍几万到几百万个植株。例如一株兰花一年繁衍到株。例如一株兰花一年繁衍到400400万株。万株。2

2、2、种苗脱毒、种苗脱毒 针对病毒对农作物呵斥针对病毒对农作物呵斥的严重危害，经过组织培育可以有效地培育的严重危害，经过组织培育可以有效地培育出大量的无病毒种苗。出大量的无病毒种苗。3 3、远缘杂交、远缘杂交 利用组织培育可以使难利用组织培育可以使难度很大的远缘杂交获得胜利，从而育成一些度很大的远缘杂交获得胜利，从而育成一些稀有的新物种。稀有的新物种。二、相关知识二、相关知识运用领域运用领域 4 4、突变育种、突变育种 采用组织培育可以直采用组织培育可以直接诱变和挑选出具抗病、抗盐、高赖氨酸、接诱变和挑选出具抗病、抗盐、高赖氨酸、高蛋白等优良性状的种类。高蛋白等优良性状的种类。5 5、基因工程、

3、基因工程 基因工程主要研讨基因工程主要研讨DNADNA的的转导，而基因转导后必需经过组织培育途径转导，而基因转导后必需经过组织培育途径才干实现植株再生。才干实现植株再生。6 6、生物制品、生物制品 有些极其昂贵的生物制有些极其昂贵的生物制品，如抗癌首选药物品，如抗癌首选药物-紫杉醇等，可经过组紫杉醇等，可经过组织培育方式消费。织培育方式消费。二、相关知识二、相关知识植物组织培育的分类 广义的组织培育依外植体不同，可分为： 1) 器官培育organ culture 2)茎尖分生组织培育(shoot tip culture, apical meristem culture) 3)愈伤组织培育(ca

4、lluse cultrue) 4)细胞培育(cell culture) 5)原生质体培育(protoplast culture)二、相关知识二、相关知识元贝驾考 元贝驾考2021科目一 科目四金手指考试 金手指驾驶员考试 外植体(explant)：由活体in vivo)植物体上提取下来的，接种在培育基上的无菌细胞、组织、器官等。 愈伤组织(callus)：在人工培育基上由外植体上构成的一团无序生长形状的薄壁细胞。二、相关知识二、相关知识二、相关知识二、相关知识二、相关知识二、相关知识二、相关知识二、相关知识二、相关知识二、相关知识二、相关知识二、相关知识二、相关知识二、相关知识植物组织培育特点

5、 培育条件可以人为控制 生长周期短，繁衍率高 管理方便，利于工厂化消费和自动化控制二、相关知识二、相关知识植物组织培育营养条件-培育基(Culture Medium) 培育基是植物组织培育的重要基质。 培育基的成分主要可以分水、无机盐、有机物、天然复合物、培育体的支持资料等五大类。二、相关知识二、相关知识 国际上流行的培育基有几十种，常用的培育基有： MS培育基、B5培育基、White培育基、N6培育基、KM-8P培育基二、相关知识二、相关知识常用培育基简介-MS培育基 1962年由Murashige和Skoog为培育烟草细胞而设计的。特点是无机盐和离子浓度较高，为较稳定的平衡溶液。其营养的数

6、量和比例较适宜，可满足植物的营养和生理需求。它的硝酸盐含量较其他培育基为高，广泛地用于植物的器官、花药、细胞和原生质体培育，效果良好。有些培育基是由它演化而来的。二、相关知识二、相关知识常用培育基简介-B5培育基 是1968年由Galmborg等为培育大豆根细胞而设计的。其主要特点是含有较低的铵，这能够对不少培育物的生长有抑制造用。从实际得知有些植物在B5培育基上生长更适宜，如双子叶植物特别是木本植物。二、相关知识二、相关知识常用培育基简介-White培育基 是1943年由White为培育番茄根尖而设计的。1963年又作了改良，称作White改良培育基，提高了MgSO4的浓度和添加了硼素。其特

7、点是无机机盐数量较低，适于生根培育。二、相关知识二、相关知识常用培育基简介N6培育基 是1974年朱至清等为水稻等禾谷类作物花药培育而设计的。其特点是成分较简单，KNO3和NH42SO4含量高。在国内已广泛运用于小麦、水稻及其他植物的花药培育和其他组织培育。二、相关知识二、相关知识常用培育基简介KM-8P培育基 1962年由Murashige和Skoog为培育烟草细胞而设计的。特点是无机盐和离子浓度较高，为较稳定的平衡溶液。其营养的数量和比例较适宜，可满足植物的营养和生理需求。它的硝酸盐含量较其他培育基为高，广泛地用于植物的器官、花药、细胞和原生质体培育，效果良好。有些培育基是由它演化而来的。

8、二、相关知识二、相关知识不同营养条件对植物组织培育的影响 Growth medium is optimised for regeneration of plantletsNo sucrose (0%)Sucrose reduced to 1%Sucrose increased to 5%T h e e x p l a n t i s completely covered with green shoots, and roots are developing on the lower surface Very few shoots have developed on the explant. N

9、o roots and no callus.Shoots developed on edges of upper surface, a n d s o m e r o o t development has occuredShoots have developed over the surface of the explant, along with roots from the lower surface. The result is comparable with the control medium二、相关知识二、相关知识No BAPBAP reduced to 0.1 mg. l-1

10、No NAAPoor shoot development and no roots. Extensive callus generationPoor shoot development and no rootsNAA reduced to 0.1 mg. l-1More balanced development of roots and shoots. However, undifferentiated callus is developing at the edges of the explantProfuse development of roots and a reduced numbe

11、r of shoots. Undifferentiated callus is developing at the edges of the explant二、相关知识二、相关知识NAA increased to 5.0 mg. l-1Profuse development of roots over the explant upper and lower surface, and few shoots. Some callusNo MS saltsNo sign of regeneration from explant at all. MS salts reduced to 0.47 g.

12、l-1 Some root growth but reduced development of shootsMS salts increased to 9.52 g. l-1 Shoots developed on upper surface of explant. No roots or callus.二、相关知识二、相关知识植物细胞的全能性 植物细胞具有该植物体全部遗传的能够性，在一定条件下具有发育成完好植物体的潜在才干。 差别:(1) 受精卵的全能性最高 (2) 受精卵分化后的细胞中，体细胞的全能性比生殖细胞的低。 潜在全能性的缘由：基因表达的选择性 科学研讨阐明，处于离体形状的植物活细

13、胞，在一定的营养物质、激素和其他外界条件的作用下，就能够表现出全能性，发育成完好的植株。人工条件下实现的这一过程，就是植物组织培育。三、实验原理植物细胞全能性的表达 脱分化dedifferentiation)：未来自已分化组织的已停顿分裂的细胞从植物体部分的抑制性影响下解脱出来，恢复细胞的分裂活性。 再分化redifferentiation):经脱分化的组织或细胞在一定的培育条件下可有转变为各种不同细胞类型的才干。三、实验原理四、试剂和器材1、资料 新颖胡萝卜茎2、试剂 MS培育基 10%亚硫酸溶液MS培育基配制方法四、试剂和器材四、试剂和器材3、仪器高压灭菌锅、超净任务台、烘箱、培育箱4、玻

14、璃器皿试剂瓶(50、100、1000ml)、三角瓶(100ml)、刻度吸管(0.5、1、5、10ml)、培育皿5、器具镊子、解剖刀、接种针、记号笔、封口膜离体的植物离体的植物器官、组织、器官、组织、细胞细胞脱分化脱分化愈愈伤伤组组织织再分化再分化根根芽芽植植物物体体五、操作步骤切开胡萝卜，在圆圈处取一块组织P-木质部、C-构成层、X-韧皮部五、操作步骤构成层开场构成愈伤组织C1-愈伤组织、C2-构成层五、操作步骤3-4周后完全构成愈伤组织形状脱分化组织块失去色素五、操作步骤把脱分化后的愈伤组织转移到培育基上五、操作步骤两周左右开场再分化，长出幼苗五、操作步骤将幼苗移植到外部条件下培育顺化五、操

15、作步骤顺化一个月后的胡萝卜植株五、操作步骤培育基配制(I)母液配制： 按照MS培育基成分表, 配制分别配制培育基的母液。1、大量元素母液(10倍液) 分别称取10倍用量的各种大量无机盐，依次溶解于大约800ml热的60-80蒸馏水中。一种成分完全溶解后再参与下一种，最后加水，定容至1000ml后装入试剂瓶中，冰箱内储存备用。五、操作步骤2、微量元素母液(100倍液) 分别称取100倍用量的微量无机盐，依次溶解于800ml重蒸水中，加水定溶到1000ml。 3、铁盐母液100倍液 称取100倍用量的Na2-EDTA(乙二胺四乙酸钠)和FeSO47H2O，溶于800ml重蒸水中，最后定容到1000

16、ml。 五、操作步骤培育基配制(I )母液配制：4、有机物质母液(100倍数) 分别称取50倍用量的各种有机物质，依次溶解于400ml重蒸水中，定容至1000ml，装入棕色试剂瓶中，储存冰箱备用。 除上述四种母液外，培育基中经常附加的各种生物素和细胞分裂素也要配成母液储存，临用时按浓度定量汲取参与。五、操作步骤培育基配制(I)母液配制：5、生长素 如2,4-D、IAA、NAA等。准确称取20mg，先用2ml95%乙醇溶解，然后加水，定容至20ml，浓度为1mg/ml，再放置冰箱内储存备用。 6、细胞分裂素 如激动素(Kt)、6-苄基嘌呤(6-BA)。准确称取20mg，先用2ml的1mol/ml

17、 HCL或NaOH溶解，然后加水，定容至20ml，浓度为1mg/ml，再放置冰箱内储存备用。五、操作步骤培育基配制(I)母液配制： 取1000ml烧杯一只，加大量元素10倍母液100ml，微量元素100倍母液10ml，铁盐100倍母液10ml,有机物质100倍母液10ml。此外,根据培育资料和实验目的还要附加一定量的生长素,细胞分裂素及蔗糖等,然后加水至1000ml,待蔗糖充分溶解后用1mol/L 的NaOH或HCl调酸碱度为pH5.8,最后参与琼脂粉6.5g,如用琼脂条,那么要加8g。五、操作步骤培育基配制(II)配制与分装： 将盛有培育基的烧杯在电磁炉上，煮至琼脂完全融化，补加蒸馏水至10

18、00ml。 将配制好的培育基分装到培育用三角瓶中，每只100ml三角瓶约装40ml培育基。 分装时要防止把培育基倒在瓶口上，否那么培育时容易引起杂菌污染。 五、操作步骤培育基配制(II)配制与分装：1、把装好的培育基的三角瓶放入高压灭菌锅中，盖好锅盖。2、设置灭菌参数为121，20min，开场灭菌。 五、操作步骤培育基配制(III)灭菌：1、取新颖胡萝卜茎，用去离子水洗净。2、在胡萝卜茎上切一块含有构成层的组织，放入磨口三角瓶中，倒入适量10%亚硫酸溶液，悄然摇动15-30s。3、倒去亚硫酸溶液，无菌水洗涤3-4次，彻底去除残留叶面和瓶内的亚硫酸溶液五、操作步骤胡萝卜的取材与处置1、先用肥皂洗手，穿上任务服，戴上口罩和任务帽。2、放入培育瓶和灭菌后的接种器具(镊子、解剖刀、接种针)，把镊子、解剖刀、接种针插入内盛70%酒精的广口瓶中。3、用镊子把胡萝卜夹入培育皿内的吸水纸上，吸干水珠，把