实验七蔬菜中硝酸盐含量的测定(紫外分光光度法)

1、实验七 蔬菜中硝酸盐含量的测定(紫外分光光度法)1实验目的掌握蔬菜中硝酸盐的测定原理，熟悉取样方法、样品的处理、测定和仪器的 使用方法，了解各种试剂的配制方法。2、实验原理用pH9.69.7的氨缓冲液提取样品中硝酸根离子，同时加活性炭去除色素 类，加沉淀剂去除蛋白质及其他干扰物质，利用硝酸根离子和亚硝酸根离子在紫外区219nm处具有等吸收波长的特性，测定提取液的吸光度，其测得结果为硝 酸盐和亚硝酸盐吸光度的总体，鉴于新鲜蔬菜、水果中亚硝酸盐含量甚微，可忽 略不计。测定结果为硝酸盐的吸光度，可从标准曲线上查得相应的质量浓度，计算样品中硝酸盐的含量。3、仪器与试剂3.1仪器(1) 紫外分光光度计(

2、2) 分析天平：感量 O.OIg, O.OOOIg。(3) 研钵(4) 可调式往返震荡机(5) pH 计3.2试剂(1) 盐酸。(2) 氢氧化铵。(3) 氨缓冲溶液(pH9.69.7):量取20ml盐酸，加到5OOnl水中，混合后加入 50ml氢氧化铵，用水定容至1OOOml。用精密pH计调pH到9.69.7。(4) 活性炭(粉末)。(5) 正辛醇。(6) 亚铁氰化钾溶液 3 K4Fe(CN)6 .3出0=15%:称取15Og亚铁氰化钾溶于 水，定容至1000ml。(7) 硫酸锌溶液3 (ZnSO4)=3O%:称取300g硫酸锌溶于水，定容至1000ml（8）硝酸盐标准溶液：称取0.2039g

3、经110i5C烘干至恒重的硝酸钾（优级纯）， 用水溶解，定容至250ml。此溶液硝酸根质量浓度为 500mg/L,于冰箱内保存。4、实验步骤4.1取样 选取一定数量的生菜，先用自来水冲洗，再用蒸馏水清洗干净，用吸 水纸吸干表面水分，剪碎后充分混匀，称取5.0g于研钵中充分捣碎。4.2提取 将匀成浆后的样品少量多次共 20ml水洗净研钵，将样品全部转移到 50ml容量瓶中，加1滴正辛醇消除泡沫，再加入 3ml氨缓冲溶液，0.5g粉末状 活性炭。放置于可调式往返振荡机上（200次/min）振荡30min，加入亚铁氰化 钾溶液和硫酸锌溶液各1ml，充分混合，加水定容至100ml，充分摇匀，放置5mi

4、n， 用定量滤纸过滤。同时做空白实验。4.3测定 根据试样中硝酸盐含量的高低，吸取上述滤液10ml于50ml容量瓶内， 用水定容。用1cm石英比色皿，于219nm处测定吸光度。4.4工作曲线的配制分别吸取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0和1.2ml硝酸盐标准溶液于50mL容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀，此标准系列溶液硝酸根质量浓度分别为 0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 和 12.0mg/L。用 1cm 石英比色皿，于 219nm 处测定吸光度，以标准溶液质量浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。5、结果计算样品中硝酸盐含量以质量分数 表示，数值以毫克每千克（mg/kg ）计，按 公式（1）计算：3 =px V1 x V3/ m x V2（1）式中：3样品中硝酸盐含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；p从工作曲线中查得测试液中硝酸盐质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）；V1提取液定容体积，单位为毫升（ml ）；V2吸取滤液体积，单位为毫升（ml）；V3待测液定容体积，单位为毫升（ml ）；m样品质量，单位为克（g）。计算结果保留到整数位。6、注意事项本标准适用于新鲜蔬菜及水果中硝酸盐含量的测定。本方法检出限为1.2mg/kg。本方法的线性范围为 2.00mg/kg12.00