TaqMan-MGB探针荧光定量PCR反应试剂盒

1、TaqMan-MGB 探针荧光定量 PCR 反应试剂盒使用说明书（Cat#Yu-R01-1 ）【产品介绍】TaqMan-MGB 探针有许多特殊性质： 1、Taqman-MGB 探针比普通 Taqman 探针（比如Taqman-TAMRA探针和Taqman-BHQ1探针）更短，一般为15bp左 右；2、MGB可以提高探针Tm值10C左右，提高配对与非配对模板间的Tm值 差异； 3、 MGB 探针特异性更高，可区分模板一个碱基的差异；4、 MGB 为不发光的荧光基团， 并且与报告基团的空间位置更接近， 可以使实验的背景更低， 信 噪比更高，结果更精确，灵敏度更高。Taqman-MGB探针的特点使其

2、多应用于普 通Taqman探针不能胜任的领域，比如SNP分型、已知点突变的突变型和杂合子 基因的检测以及 microRNA 的检测。由于具有普通外切酶活性的 DNA 聚合酶很难酶切水解 MGB 探针。另外， 由于Taqman-MGB探针在识别模板的过程中影响因素较多， 普通Taqman探针的 荧光定量 PCR 反应液并不适用于 Taqman-MGB 探针。本公司专利技术生产的 TaqMan-MGB 探针专用荧光定量反应试剂盒在许多 性能上完全超越国外同类产品， 性能优良， 结果可靠。 本产品还可以应用于普通 Taqman探针（比如Taqman-TAMRA探针和Taqman-BHQ1探针），同时

3、对FAM、 HEX 和 VIC 等荧光物质的有明显的荧光增强效果。【产品特点】1. 适用于使用 TaqMan-MGB 探针、 Taqman-TAMRA 探针和 Taqman-BHQ1 探针 的实时荧光定量PCR，对FAM、HEX和VIC等荧光物质的有明显的荧光增强效 果。结合本公司的各种 miRNA 提取试剂盒（ Cat#Yu-Mi01-1， Cat#Yu-Mi02-1， Cat#Yu-Mi02-2，Cat#Yu-Mi03-1），可以进行多种游离 DNA 和 miRNA 的检测。2. 灵敏度高：本产品的扩增效率为 96.149%, R2为0.995,扩增microRNA的效 率是进口产品 4倍

4、以上（图 1-2，表 1-2）。3. 稳定性好：本产品重复好，CV值2%。4. 操作简单： 只需在反应体系中加入引物、探针、模板和 ROX 。5. 本产品使用热启动酶，可以进行 Hot Start法PCR反应。6.本产品无本品无OSHA规定的危险物品，安全无化学污染Inlarvi MelMifi yn昭Hui Fite il*n* CHI* *申鼻 14ehUM韶 * RM 3IriiMAjHT牛-【适用仪器】Thermal Cycler系列荧光疋量 PCR仪Applied Biosystems系列荧光疋量 PCR仪、Roche Diag no sties LightCycler 系列荧光定量

5、PCR 仪、Bio-Rad CFX96Real-Time PCR Detectio n System等。表1进口产品的microRNA-21标准曲线结果浓度（Copies/匕）Ct值10437.91910533.75910630.33310726.294M!|_llAQH TFMIJ Sm cunrlXi itn ttataii图1进口产品的microRNA-21标准曲线Slandud CurvnLUrH尹户吕电淫拳Amplltficittoni Ploft3 呈 M-M- R R r.wJs&h.r.wJs&h.却护！slactuMAsjslactuMAsj1717虫拧2323辽為5050

6、耳3-13-1Hrjnvva airwegALti*iT*fM Tirtl! M ihiafc jjSjj5 口 Jri QWV *Tmo Ji rh* NLBJ-口口 口口口 口口口口口口 口s口口 dan 口 口口口&7&7口小片須1:1:呷eMs-eMs-口 aAUmH/AilMHnuEPIrlfrllQL:-aAUmH/AilMHnuEPIrlfrllQL:-口口aeDmcB 迅 mralmral 出Adupp.wuuMl+.ll-1T1s:2c2JZTp74ld;2JR:RAIAdupp.wuuMl+.ll-1T1s:2c2JZTp74ld;2JR:RAI_口口口 口 Do 表2本产

7、品的microRNA-21标准曲线结果浓度（Copies/匕）Ct值10435. 12210531.12461028.12310724.790图2本产品的microRNA-21标准曲线【试剂盒组成】试剂盒组成数量保存条件TaqMan-MGB探针荧光定量PCR反应预混液（5为200丄-20 C保存Rox dye 2 (50 X)15丄-20 C保存ddH2O1mL使用说明书1份3X.L23Siindud Curv1 1 ? ? J J + +1 1rairlvffi-EM.rairlvffi-EM.崎旧 *踌M M冲個 mgnAflnMv3mgnAflaaL2KHlaaL23 3口番CMCM【规

8、格】50T/盒【贮藏与有效期】PCR反应预混液-20C保存，有效期12个月。开盖后，4C保 存，有效期2周。Rox dye 2（50 x） -20C保存，有效期24个月。【有效成分】Tris-Hcl，氯化钾，氯化镁【注意事项】使用前务必认真阅读以下注意事项。1. 使用前充分融解，轻轻颠倒混匀，避免起泡，短暂离心后使用。2. 反应液的配制和分装务必使用无污染的尖嘴、EP管等。3. 如果配制试剂时间较长，请将融解后的反应液于冰上放置。4试剂盒仅供科研使用。【操作步骤】1、在无菌洁净PCR管中依次加入以下试剂：成分加入量（丄）终浓度PCR反应预混液（5X41 X上游引物（10gM）0.60.3 M下

9、游引物（10gM）0.60.3 M探针（10gM）0.40.2 M模板2ddH2O12.15Rox dye 2 ( 50 X0.25总体积20注：以下仅为建议，最佳条件需要各个实验室摸索。 通常引物浓度为0.30.3 M M可以获得很好的结果。反应不佳时，引物浓度可以在 0.110.11 M M范围内调整。 使用的探针浓度与定量PCRPCR仪、探针种类和荧光标记物质有关。通常探针终 浓度在0.10.50.10.5 M M范围内调整。 模板添加量因模板溶液中靶基因的拷贝数不同而不同，模板添加量最好在100ng100ng以下。RNA/MicroRNARNA/MicroRNA模板的添加量最好不要超过总体积的 10%10%。RoxRox是否加入视仪器而定。2、充分混匀后短暂离心。3、扩增：95