2021药材显微鉴别法操作规程

1、2021药材显微鉴别法操作规程药材显微鉴别法操作规程日期：批 准：日期：编号：1302 - 034-修订号00 01 02批准日期 审 核：日期：生效日期：再财份制部均1rL . 产 字 部 签生部发：制定（变更）原因及目的：生效日期 执行2021年版中国药典。 份质量部份企业管理部份分发部门供应 务部份总工办份营销部份产品开 办公室份1适用范围：适用于药材显微鉴别。2职责检验员：严格按操作规程进行检验。QC主任：监督检查执行情况。3定义显微鉴别系指用显微镜对药材（饮片）切片、粉末、解离组织或表面制片及含药材粉 末的制剂中药材的组织、细胞或内含物等特征进行鉴别的一种方法。鉴别时选择有代表性 的

2、供试品，根据各品种鉴别项的规定制片。制剂根据不同剂型适当处理后制片。此法适用 于： 药材性状鉴别特征不明显或外形相似而组织构造不同； 药材呈粉末状或已 破碎，不易辨认或区分； 凡含药材粉末的制剂：用显微化学方法确定药材中有效成分在组织中的分布情况及其特征。4在进行显微鉴别时，首先要将样品制成适用F镜检的标本。对于完整的药材可制 成各种切面的切片；对于粉末药材（包括丸、散等成方制剂）可直接装片或作适当处理后 装片。 药材切片标本的制作方法较多。在药材鉴定的研究工作中往往将其制成石蜡 切片（永久切片），因制在石蜡切片外形较完整，厚薄均匀，旦可制得连续切片，既便于 观察，乂能长期保存。但由于制片技术

3、复杂，费时太多，不适用于日常检验。所以在中药 鉴定工作中经常采用徒手切片或滑走切片法制片；为观察叶类、花类及全草类药材的叶片、花冠、萼片、 苞片等的表皮组织及其附属物的特征，还需要将其制成表面装片；为清楚地观察比较硬的 细胞组织，如导管、纤维、石细胞等的形态，往往还要进行“组织解离”后装片：观察花 粉、饱子等的形态特征或构造，需用花粉粒与饱子制片法制片：观察矿物药或较坚硬的动 物类药材如珍珠、石决明及动物骨骼，可采用磨片法制片。这些镜检标本片一般都是在观 察前临时制备，故统称为“临时制片技术”。本规程以中国药典现行版和局颁、部颁标准收教品种的显微鉴别项目要求为主，故主 要介绍与临时制片技术有关

4、的仪器、用具、试液和操作方法等。5仪器与用具5.1仪器 生物光学显微镜（应配有目镜测微尺和载物台测微尺，最好具2.5X或 4X物镜头和偏光装置）、显微摄影装置或显微描绘器、电脑联机装置及其图像处理软件、 滑走切片机、小型粉碎机、台式离心机、医用超声仪等。5.2用具5. 2.1放大镜、刀片、解剖刀、镜子（包括粗镣及眼科弯镜与直镶）、剪（眼科翦 与手术剪）、解剖针等。5. 2.2载玻片、盖玻片。5. 2.3吸湿器（即玻璃干燥器改装成底部放入蒸编水并加微量苯酚防霉，上部瓷板 上置药材样品，利用潮气润湿药材样品）、培养皿或小烧杯（放切片用，切片后的处理无 可在其中进行）、酒精灯、铁三角架、石棉网、滴瓶

5、、试管，试管架、滴管、玻璃棒（粗 与细）、乳钵、量筒等。5. 2.4毛笔（从刀上刷取切片用）、铅笔（HB、3H或6H铅笔 绘图用）、带盖搪镜盘（）、纱布、绸布、滤纸、火柴等。6试液6.1 水合氯醛试液此液为常用封藏液，也是透化剂。可使干缩的细胞膨胀而透明，并能溶解淀粉粒、树脂、蛋白质、叶绿素及挥发油等，加热后透化效果更为明显。6.2 廿油醋酸试液（斯氏液）此液为常用封藏液。专用于观察淀粉粒形态，可使 淀粉粒保持原形，便于测量其大小。6.3 甘油乙醇试液此液为常用封藏液，也是软化剂。常用于保存植物性材料及临 时切片，有软化组织的作用。6.4 苏丹III试液 此液可使木栓化、角质化细胞壁及脂肪油、

6、挥发油、树脂等染 成红色或淡红色。6.5 钉红试液此液可使黏液染成红色。本液应临用新制。6.6 间苯三酚试液此液与盐酸合用，可使木化细胞壁染成红色或紫红色。6.7 典试液此液可使淀粉粒染成蓝色或紫色：蛋白质或糊粉粒染成棕色或黄棕色。6.8 硝铭酸试液 此液为常用的“植物组织解离液”。解离浸泡时间，按样品的质地不 同而异。6.9 a-蔡酚试液此液可使菊糖染成紫红色，并很快溶解。6. 10硝酸汞试液 （米隆氏试液）此液可使糊粉粒染成破红色。6.11 氯化锌碘试液此液用于检查木质化与纤维素细胞壁，前者显黄棕色，后者显蓝色或紫色。以上水合氯醛等试液，均应符合（中国药典2021年版一部附录XV B规定）

7、规定。7 制片7.1横切片或纵切片?选取供试品欲观察部位，经软化处理后，用徒手或滑走切片法，切成1020 Um的 薄片，必要时可包埋后切片。选取平整的薄片置载玻片上，根据观察对象的不同，滴加甘油 醋酸试液、水合氯醛试液或其他试液12滴.，盖上盖玻片。必要时滴加水合氯醛试液后, 在酒精灯上加热透化，并滴加甘油乙醵试液或稀甘油，盖上盖玻片。7.2粉末制片：主 要用于粉末状的药材观察?取药材干燥，用粉碎机粉碎后过四号筛，挑取粉末少许置载玻片上，滴加廿油醋酸 试液、水合氯醛试液或其他适宜的试液，盖上盖玻片。必要时，按上法加热透化。7.3表 面制片：凡较厚或新鲜药材用上述方法不能使之透化或不便于整体装片

8、。?将供试品湿润软化后，剪取欲观察部位约4nmi2, 一正一反置我玻片上，或撕取表皮, 加适宜的试液或加热透化后，盖上盖玻片。7.4 解离组织片：适用于厚壁组织或输导组织等的单个细胞的显微观察。?将供试品切成长约5mm、直径约2mm的段或厚约1mm的片，如供试品中薄壁组织占 大部分，木化组织少或分散存在，采用氢氧化钾法；如果供试品质地坚硬，木化组织较多或集 成较大群束，采用硝铭酸法或氯酸钾法。7. 4.1氢氧化钾法将供试品置于试管中，加5%氢氧化钾溶液适量，加热至玻璃棒挤压能离散为止，倾去 碱液，加水洗涤后，取出少量置我玻片上，用解剖针撕开，滴加稀甘油，盖上盖玻片。 7.4.2硝铭酸法置供试品

9、于试管中，加硝钠酸试液适量，放置至用玻璃棒压能离散为止，倾去酸液， 加水洗涤后，照氢氧化钾法操作装片。7.4.3氯酸钾法置供试品于试管中，加硝酸溶液（1-2）及氯酸钾少量，缓缓加热，待产生的气泡渐 少时，再及时加入氯酸钾少量，以维持气泡稳定地发生，至用玻璃棒挤压能离散为止，倾 去酸液，加水洗涤后，照氢氧化钾法操作装片。7.5花粉与抱子制片?取花粉、花药（或小的花朵）、抱子或饱子囊群（干燥的供试品浸于冰醋酸中软 化），用玻璃棒研碎，经纱布过滤至离心管中，离心，取沉淀加新配制的醋酊与硫酸（9:1） 的混合液/3ml,置水浴上加热23分钟，离心，取沉淀，用水洗涤2次，取沉淀少量置 我玻片上，滴加水合

10、氯醛试液，盖上盖玻片，或加50%甘油与1%苯酚各2滴，用品红甘 油胶取明胶1g，加水6ml,浸泡至溶化，再加甘油7ml,加热并轻轻搅拌至完全混匀，用 纱布过滤至培养皿中，加碱性品红溶液（碱性品红0.1g,加无水乙静600ml及樟油80ml, 溶解）适量，混匀，凝固后即得封藏。7.6磨片制片坚硬的动物、矿物类药，可采用磨片法制片。选取厚度约12mm的供试材料，置粗 磨石（或磨砂玻璃板）上，加适量水，用食指、中指夹住或压住材料，在磨石上往返磨砺, 待两面磨平，旦厚度约数百微米时，将材料移置细磨石上，加水，用软木塞压在材料上， 往返磨砺至透明，用水冲洗，再用乙醇处理和甘油乙醇试液装片。7.7含药材粉

11、末的制 剂显微制片按供试品不同剂型，散剂、胶囊剂（内容物为颗粒状，应研细），可直接取适量粉末; 片剂取23片，水丸、糊丸、水蜜丸、锭剂等（包衣者除去包衣），取数丸或12锭， 分别置乳钵中研成粉末，取适量粉末；蜜丸应将药丸切开，从切面由外至中央挑取适量样 品或用水脱蜜后，吸取沉淀物少量。根据观察对象不同，分别按粉末制片法制片（15 片）。7.8细胞壁性质的鉴别7. 8.1木质化细胞壁：加间苯三酚试液2滴，稍放置，加盐酸1滴，因木质化程 度不同，显红色或紫红色。7. 8.2木栓化或角质化细胞壁：加苏丹W试液，稍放置或微热，显橘红色至红色。 7.8.3纤维素细胞壁：加氯化锌碘试液，或先加碘试液湿润后

12、，稍放置，再加硫酸溶液 （33-50）：显蓝色或紫色。7. 8. 4硅质化细胞壁：加硫酸无变化。7.9 细胞内含物性质的鉴别7.8. 1淀粉 粒7. 8. 1.1加碘试液，显蓝色或紫色。7. 8. 1.2用甘油醋酸试液装片，置偏光显微镜下观察，未糊化的淀粉粒显偏光现象; 己糊化的无偏光现象。7.8.2糊粉粒7. 8. 2. 1加碘试液，显棕色或黄棕色。7. 8. 2. 2加硝酸汞试液，显砖红色。材料中如含有多量脂肪油，宜先用乙醛或石油 醒脱脂后进行试验。7. 8.3脂肪油、挥发油、树脂7. 8. 3. 1加苏丹【H试液，显橘红色、红色或紫红色。7. 8. 3. 2加90%乙醇,脂肪油和树脂不溶

13、解（蒐麻油及巴豆油例外），挥发油则溶解。 7. 8.4菊糖 加10%a-蔡酚乙醇溶液，再加硫酸，显紫红色并溶解。7. 8.5黏液：加 钉红试液，显红色。7. 8.6草酸钙结晶7. 8. 6. 1加稀醋酸不溶解，加稀盐酸溶解而无气泡发生。7. 8. 6. 2加硫酸溶液（1-2）,逐渐溶解，片刻后析出针状硫酸钙结晶。7. 8.7 碳酸钙结晶（钟乳体）：加稀盐酸溶解，同时有气泡发生。7. 8.8硅质：加硫酸不溶解。 细胞及细胞内含物性质的鉴别7.9显微测量系指用目镜测微尺，在显微镜下测量细胞及细胞内含物等的大小。7. 9.1目镜测微尺 放在目镜筒内的一种标尺，为一个直径1820mm的圆形玻璃片, 中

14、央刻有精确等距离的平行线刻度，常为50格或100格。7. 9.2载物台测微尺 在特制的载玻片中央粘贴一刻有精细尺度的圆开玻片。通常 将长1mm （或2mm）精确等分成100 （或200）小格，每1小格长10um,用以标定目镜测微 尺。7.9.3目镜测微尺的标定 用以确定使用同一显微镜及特定倍数的物镜、目镜和镜 筒长度时，目镜测微尺上每一格所代表的长度。取载物台测微尺置显微镜载物台上，在高倍物镜（或低倍物镜）下，将测微尺刻度移 至视野中央。将目镜测微尺（正面向上）放入目镜镜筒内，旋转目镜，并移动载物台测 微尺，使目镜测微尺的“0 ”刻度线与载物台测微尺的某刻度线相重合，然后再找第二条 重合刻度线，根据两条重合线间两种测微尺的小格数，计算出目镜测微尺每一小格在刻物 镜条件下相当的长度（um）。当测定时要用不同的放大倍数时，应分别标定。7. 9.4测量方法 将需测量的目的物显微微片置显微镜载物台上，用目镜测微尺测 量目的物的小格数，乘以上述每一小格的微米数，通常是在高倍镜下测量，但欲测量较长 的目的物，如纤维、导管、非腺毛等的长度时，需在低倍镜下测量。记录最大值与最小值 （um）,允许有少量数值略高或略低于规定。8注意事项8.1 粉末制片时易产生气泡，可先加少量乙醇使其润湿或反复将盖玻片沿一侧轻抬, 产生的气泡可用滤纸或针将其移出。8.2 装片用的液体如易挥发，装片后立即观察。8.3