水中微生物的测定

1、实验实验水中细菌总数的测定水中细菌总数的测定实验目的v掌握水样的采取方法。v掌握水样细菌总数测定的方法；了解水源水的平板菌落计数的原则。v学习检测水中大肠菌群的原理和方法。v了解大肠菌群数量与水质状况的关系。v了解大肠菌群的数量在饮水中的重要性。实验原理v饮用水是否合乎标准，通常通过水中细菌总数和大肠菌群数来确定。v细菌总数是指1毫升水样在一定的培养基平板（普通琼脂培养基）中，3724小时培养后所生长的菌落数，此值仅是一种近似值。一般规定，1毫升自来水的总菌数不得超过100个。v如果水源被粪便污染，则有可能也被肠道病原菌污染而引起伤寒、痢疾、霍乱等肠道病的流行，但肠道病原菌在水中数量较少，又易

2、变异与死亡，故从水中特别是自来水中分离出病原菌，常常有困难。v而大肠菌群是肠道好氧菌中最普遍和数量最多的一种，所以常将其作为粪便污染的标志，即根据水中大肠菌群的数目来判断水源是否被粪便所污染，并间接推测水源受肠道病原菌污染的可能性。一般规定每1000毫升自来水中大肠菌群不超过三个。实验材料v普通琼脂培养基；乳糖蛋白胨发酵管；3倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管，复红亚硫酸钠培养基。v无菌空瓶；灭菌水；灭菌培养皿、吸管、试管。v自来水、池水、河水或湖水实验步骤实验步骤v水样的采取水样的采取自来水：自来水： 先将自来水龙头用火焰灼烧先将自来水龙头用火焰灼烧3min3min，再，再开放水龙头水流开放水龙头水流5

3、min5min，以灭菌三角烧瓶接取，以灭菌三角烧瓶接取水样。水样。池水、河水或湖水：池水、河水或湖水： 取距水面取距水面10-15cm10-15cm的深层水样，将具的深层水样，将具塞玻璃瓶瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，塞玻璃瓶瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，盛满后将瓶塞盖好再从水中取除去玻璃塞，盛满后将瓶塞盖好再从水中取出。出。v细菌总数测定细菌总数测定1）自来水 吸取1ml水样与平皿内冷却至45的培养基混匀，于37下培养24h计数，共两皿。同时做不接水样的空白皿对照试验。2） 池水、河水或湖水 采用平板菌落计数法：一般中等污秽水样，取101、102、103三个稀释度，污秽严重的

4、取102、103、104三个稀释度。 最后三个稀释度的稀释水样重复上述自来水的细菌测定试验。水样稀释过程示意图水样稀释过程示意图v菌落计数方法菌落计数方法（1）计算相同稀释度的平均菌落数有较大片菌苔生长时，弃用；以无片菌苔生长的平皿计数。若片菌苔大小不到培养皿的一半，其余一半分布均匀，将此一半计数2（2）选择平均菌落数在30300之间的平板只有一个符合此范围时只有一个符合此范围时，以该平均菌落数乘稀释倍数。有两个在有两个在30300间时间时，按两者菌落总数比值决定：比值小于2，取平均；比值大于2，取较小的菌落总数。（3）所有菌落数均大于300，取稀释度最高的平均菌落数乘稀释倍数。（4） 所有菌

5、落数均小于30，取稀释度最低的平均菌落数乘稀释倍数。（5） 所有菌落数均不在30300之间，以最接近30或300的平均菌落数乘稀释倍数。计算菌数落总数方法举例计算菌数落总数方法举例 例次例次不同稀释的平均菌落数不同稀释的平均菌落数两个稀释度两个稀释度菌落数之比菌落数之比菌落总烽（个菌落总烽（个/ml）10-110-210-31136516420-16400或或1.610422760295461.637750或或3.810432890271602.227100或或2.71044无法计数无法计数1650513-513000或或5.1105527115-270或或2.71046无法计数无法计数305

6、12-30500或或3.1104备注备注两位两位以后以后的数的数字采字采取四取四舍五舍五入的入的方法方法去掉去掉五、实验报告五、实验报告1结果结果（1）自来水）自来水平板平板菌落数菌落数1ml自来水中细自来水中细菌总数菌总数12（2）池水、河水或湖水等）池水、河水或湖水等稀释度稀释度10-110-210-3平板平板121212菌落数菌落数平均菌落数平均菌落数计算方法计算方法细菌总数细菌总数/mLv大肠菌群检查 滤膜法过滤水样过滤水样用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘部分，将粗糙面向上，帖放在已灭菌的滤床上、，固定好滤器，将100mL水浴(如水样含菌数较多，可减少过滤水样量，或将水样稀释)注入滤器中，打开滤器阀门，在负0.5大气压下抽滤。 v培养培养水样滤完后，再抽气约5s，关上滤器阀门，取下滤器，用灭菌镊子夹取滤膜边缘部分，移放在品红亚硫酸钠培养基(36.1.3.1)上，滤膜截留细菌面向上，滤膜应与培养基完全贴紧，两者间不得留有气泡，然后将平皿倒置，放入37恒温箱内培养2224h。 v观察结果 挑出符合下列特征菌落进行革兰氏染色、镜检。 紫红色，具有金属光泽的菌落。 深红色，不带或略带金属光泽的菌落淡红色，中心色较深的菌落。v凡革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌，再接种乳糖蛋白胨培养基液，于37培养24h，有产酸产气者，则判定为总大肠菌群阳性。 v计算滤膜上生长的总大肠