第八章微生物监测环境解析

1、第八章第八章 微生物监测环境微生物监测环境第一节 环境污染的指示微生物第二节 污染物生物毒性的微生物学检 测方法第三节 污染物致突变性的微生物检测 方法第八章微生物监测环境解析一、一般污染指示微生物v指示微生物：在常规环境监测中，用以指示环境样品污染性质与指示微生物：在常规环境监测中，用以指示环境样品污染性质与程度，并评价环境卫生状况的具有代表性的微生物。程度，并评价环境卫生状况的具有代表性的微生物。（一）细菌总数（一）细菌总数1 1、定义：环境中被测样品在一定条件下培养后所得的、定义：环境中被测样品在一定条件下培养后所得的1mL1mL或或1g1g检样中检样中所含有的细菌菌落总数。所含有的细菌

2、菌落总数。u反映环境中异养型细菌的污染从度，也间接反映一般营养性有机反映环境中异养型细菌的污染从度，也间接反映一般营养性有机物的污染程度。物的污染程度。第八章微生物监测环境解析2 2、方法、方法（1 1）液态与固态对象中的细菌总数）液态与固态对象中的细菌总数： 将经过一定倍数稀释的样品悬液，定量接种将经过一定倍数稀释的样品悬液，定量接种（倾注或图布）于营养平板，有氧（倾注或图布）于营养平板，有氧3737培养培养48h48h后观察后观察菌落。菌落。第八章微生物监测环境解析（2 2）空气中的细菌总数：）空气中的细菌总数：平板暴露沉降法采用直径平板暴露沉降法采用直径9cm9cm平平皿在皿在1.2m1

3、.2m高处暴露高处暴露5min5min，培养计，培养计数；数；奥氏公式：奥氏公式：5min5min内落在内落在100cm100cm2 2营营养琼脂平板上的细菌数和养琼脂平板上的细菌数和10L10L空空气中所含的细菌数相同气中所含的细菌数相同最小采样量和最小沉降面积（为最小采样量和最小沉降面积（为避免出现避免出现“0 0”粒的概率，确保结粒的概率，确保结果可靠性）。果可靠性）。仪器法采用固体撞击式采样器。仪器法采用固体撞击式采样器。C=100050NAtC空气细菌数空气细菌数A捕集面积，捕集面积，cm2t暴露时间，暴露时间，minN菌落数，个菌落数，个第八章微生物监测环境解析菌落计算方法菌落计算

4、方法l有效菌落：无片状菌落的平皿；若片状菌落不到培养皿有效菌落：无片状菌落的平皿；若片状菌落不到培养皿一半，而另一半分布又均匀，可以半皿计数再乘一半，而另一半分布又均匀，可以半皿计数再乘2 2代表全代表全皿；皿；l选择平均菌落数在选择平均菌落数在3030300300之间进行计算；之间进行计算；l若有两个稀释度的平均符合，按两者菌落总数之比来决若有两个稀释度的平均符合，按两者菌落总数之比来决定，定，222则报告较少的菌落总数；则报告较少的菌落总数；l若均大于若均大于300300（小于（小于3030），按稀释度最高（低）的平均），按稀释度最高（低）的平均菌落数乘以稀释倍数报告；菌落数乘以稀释倍数报

5、告；l若所有稀释度均不在若所有稀释度均不在3030300300之间，则以最接近的报告。之间，则以最接近的报告。报告方式：报告方式：l100采用两位有效数字，采用两位有效数字，余者四舍五入；余者四舍五入；l无法计算时，注明稀释倍数无法计算时，注明稀释倍数第八章微生物监测环境解析u结果：结果： cfu/mlcfu/ml或或cfu/gcfu/gu细菌总数的卫生标准细菌总数的卫生标准生活饮用水生活饮用水100 cfu/ml100 cfu/ml室内空气室内空气5005001000 /m1000 /m3 3室内空气指示菌以咽喉正常菌丛中的绿色链球菌为最室内空气指示菌以咽喉正常菌丛中的绿色链球菌为最合适，在

6、上呼吸道和空气中较易发现。合适，在上呼吸道和空气中较易发现。u对方法的评价：相对性对方法的评价：相对性第八章微生物监测环境解析 1mL 混合混合 1mL 混合混合 9mL 10mL 1 ： 10-1 10-1 ： 10-2 10-2 10-3 10-4 10-5得到不同得到不同稀释度稀释度 （10-x）菌液菌液第八章微生物监测环境解析 10-2 10-3 10-4 10-5 第八章微生物监测环境解析n细菌数量细菌数量=？n细菌数量细菌数量=数出的菌落数数出的菌落数/稀释度稀释度n例如：例如：10-5稀释度时菌落数为稀释度时菌落数为125个个n细菌数量细菌数量=125/10-5=1.25107个

7、个/mLn 平板计数法是采用最广的一种活菌计数法平板计数法是采用最广的一种活菌计数法n如国标法水中细菌总数的测定如国标法水中细菌总数的测定 。n注意：注意：作空白及取平行样（作空白及取平行样（2 23 3组）均值减小组）均值减小误差误差第八章微生物监测环境解析（二）霉菌和酵母菌总数（二）霉菌和酵母菌总数u意义：偏酸性好氧条件，存活力强，有机营养物广意义：偏酸性好氧条件，存活力强，有机营养物广泛；反映环境的一般性污染。泛；反映环境的一般性污染。u方法：虎红培养基、察氏培养基等；倾注平板法；方法：虎红培养基、察氏培养基等；倾注平板法； 25-28 3-525-28 3-5天。天。u结果：结果： c

8、fu/mlcfu/ml或或cfu/gcfu/gu卫生标准：卫生标准：u方法评价：主要适用于霉菌，酵母菌附带生长，均方法评价：主要适用于霉菌，酵母菌附带生长，均非环境中全部酵母菌。非环境中全部酵母菌。第八章微生物监测环境解析二、粪便污染指示菌二、粪便污染指示菌（一）粪便污染指示菌的理想条件：（一）粪便污染指示菌的理想条件：u是人畜粪便中的正常菌，且数量较粪便中其他菌为是人畜粪便中的正常菌，且数量较粪便中其他菌为多多u受人畜粪便污染的环境中可检出，而未受污染环境受人畜粪便污染的环境中可检出，而未受污染环境无该菌存在无该菌存在u排出至环境后，该菌存活时间与肠道致病菌相当或排出至环境后，该菌存活时间与

9、肠道致病菌相当或略长略长u对氯等消毒剂及其他不良因素的抵抗力略强于肠道对氯等消毒剂及其他不良因素的抵抗力略强于肠道致病菌致病菌u检出与鉴定方法比较简便迅速检出与鉴定方法比较简便迅速第八章微生物监测环境解析（二）总大肠菌群（二）总大肠菌群v是一群能在是一群能在3737，24h24h内发酵乳糖产酸产气，需氧或内发酵乳糖产酸产气，需氧或兼性厌氧的兼性厌氧的G G- -无芽孢杆菌；无芽孢杆菌；v主要包括四个菌属：埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、克主要包括四个菌属：埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、克雷伯菌属、肠杆菌属；雷伯菌属、肠杆菌属；v方法：多管发酵法、滤膜法。方法：多管发酵法、滤膜法。不适于用大肠菌群作为粪便

10、污染指示菌的不适于用大肠菌群作为粪便污染指示菌的食品食品冷冻食品冷冻食品经射线照射处理的食品经射线照射处理的食品 pHpH较高的食品较高的食品 在上述食品中大肠菌群的细菌比许多在上述食品中大肠菌群的细菌比许多肠道病原微生物更易死亡肠道病原微生物更易死亡第八章微生物监测环境解析1、多管发酵法、多管发酵法初发酵：在初发酵：在2 2个各装有已灭菌的个各装有已灭菌的50mL50mL浓乳糖蛋白胨的大浓乳糖蛋白胨的大发酵瓶中，无菌操作加入水样发酵瓶中，无菌操作加入水样100mL100mL；在；在1010只含只含5mL5mL培养培养基的发酵管中加水样基的发酵管中加水样10mL10mL，混匀后，混匀后3737

11、培养培养24h24h；如无酸及气体产生，为如无酸及气体产生，为“”；如有酸和气体，或无气；如有酸和气体，或无气体但有酸产生，为体但有酸产生，为“”；如有气体产生，但没产酸，；如有气体产生，但没产酸，溶液也不浑浊，可能是操作技术溶液也不浑浊，可能是操作技术 问题，须重作检验；问题，须重作检验；平板分离：从阳性管中取液，分平板分离：从阳性管中取液，分 别接种在品红亚硫酸钠培养基或别接种在品红亚硫酸钠培养基或 伊红美蓝培养基上，注意编号，伊红美蓝培养基上，注意编号， 3737培养培养24h24h。第八章微生物监测环境解析多管发酵法多管发酵法如无细菌增殖现象，为如无细菌增殖现象，为“”；如仅发现芒状、

12、霉状或其他无如仅发现芒状、霉状或其他无关菌属的菌落，为关菌属的菌落，为“”；挑；挑取符合下列特征的菌落取符合下列特征的菌落1/31/3涂涂片、片、G G染色、镜检；染色、镜检；品红亚硫酸钠培养基：紫红色，品红亚硫酸钠培养基：紫红色，具金属光泽；深红色，不带或具金属光泽；深红色，不带或略带金属光泽；淡红中心色较略带金属光泽；淡红中心色较深；深；伊红美蓝培养基：深紫黑色，伊红美蓝培养基：深紫黑色，具金属光泽；紫黑色，不带或具金属光泽；紫黑色，不带或略带金属光泽；淡紫红色，中略带金属光泽；淡紫红色，中心色较深。心色较深。第八章微生物监测环境解析多管发酵法多管发酵法复发酵试验：挑取镜检复发酵试验：挑取

13、镜检G G- -无芽孢杆菌的其余部分菌无芽孢杆菌的其余部分菌落，接种于含落，接种于含10mL10mL普通浓普通浓度乳糖蛋白胨培养基的发度乳糖蛋白胨培养基的发酵管中，酵管中，3737培养培养24h24h，观，观察产酸产气；察产酸产气；根据复发酵结果，统计出根据复发酵结果，统计出阳性管及瓶数，查表得出阳性管及瓶数，查表得出总大肠菌群数。总大肠菌群数。第八章微生物监测环境解析多管发酵法多管发酵法v水源水检验时水样稀水源水检验时水样稀释释1010倍，预备倍，预备1515支发支发酵管，酵管，5 5支装支装5ml5ml浓培浓培养基，加水样养基，加水样10ml10ml；1010支装支装10ml10ml普通培

14、养普通培养基，基，5 5支加水样支加水样1ml1ml，5 5支加稀释水样支加稀释水样1ml1ml；以后检测同饮用水，以后检测同饮用水，根据存在的阳性管数根据存在的阳性管数查另外的检数表。查另外的检数表。第八章微生物监测环境解析滤膜法滤膜法比发酵法缩短时间，有可能在比发酵法缩短时间，有可能在24h24h内完成。内完成。孔径孔径0.45-0.650.45-0.65mm，多孔性硝化纤维膜；，多孔性硝化纤维膜；滤膜灭菌：蒸馏水煮滤膜灭菌：蒸馏水煮15min15min3 3次；次；滤器灭菌：酒精棉球火焰灭菌或滤器灭菌：酒精棉球火焰灭菌或121 30min121 30min；过滤水样：粗糙面向上，过滤水量

15、的确定以培养过滤水样：粗糙面向上，过滤水量的确定以培养后滤膜上长出的菌落不多于后滤膜上长出的菌落不多于5050个为原则。个为原则。第八章微生物监测环境解析滤膜法滤膜法水样过滤后，继续抽气水样过滤后，继续抽气5s5s关闭，带菌滤膜置于品红亚关闭，带菌滤膜置于品红亚硫酸钠培养基上，二者之间不得留有气泡，硫酸钠培养基上，二者之间不得留有气泡，3737培养培养24h24h；挑取特征菌落染色镜检；挑取特征菌落染色镜检；G G- -无芽孢杆菌的穿刺接种到乳糖蛋白胨半固体培养基无芽孢杆菌的穿刺接种到乳糖蛋白胨半固体培养基（预先煮沸排气），（预先煮沸排气），3737培养培养6 68h8h，产气者为，产气者为“

16、”，培养基内部形成龟裂状，甚至部分上浮；培养基内部形成龟裂状，甚至部分上浮；第八章微生物监测环境解析v结果与卫生标准：结果与卫生标准：u大肠菌群数（个大肠菌群数（个/L/L或个或个/ml/ml）；饮用水标准：）；饮用水标准：0 0个个/100ml/100ml，土壤，土壤1001010-2-2v方法评价：发酵法耗时长、滤膜法不适于混浊度高方法评价：发酵法耗时长、滤膜法不适于混浊度高的水样、结果可能不准确、不能指示水中细菌；来的水样、结果可能不准确、不能指示水中细菌；来源不单一；不能指示病毒源不单一；不能指示病毒v新进展：新进展：“大肠菌群产色基质试验大肠菌群产色基质试验”两个活性底物邻硝基苯两个

17、活性底物邻硝基苯-D-吡喃半乳糖苷及吡喃半乳糖苷及4甲基伞形酮基甲基伞形酮基-D葡萄糖醛酸，分别被大肠葡萄糖醛酸，分别被大肠菌群的菌群的半乳糖苷酶和大肠杆菌的半乳糖苷酶和大肠杆菌的葡萄葡萄糖醛酸酶分解产生黄色的邻硝基苯和发荧光的糖醛酸酶分解产生黄色的邻硝基苯和发荧光的化合物，化合物，24h即可完成即可完成第八章微生物监测环境解析粪大肠菌群u能在能在44.5发酵乳糖的大肠菌群，亦称发酵乳糖的大肠菌群，亦称耐热性大肠菌群。耐热性大肠菌群。u粪大肠菌群与粪便中大肠杆菌数直接相粪大肠菌群与粪便中大肠杆菌数直接相关，且在外环境中不易繁殖，因此意义关，且在外环境中不易繁殖，因此意义更大。更大。u方法：多管

18、发酵法、滤膜法方法：多管发酵法、滤膜法EC培养基：三号胆盐、胰蛋白胨、乳糖培养基：三号胆盐、胰蛋白胨、乳糖M-TEC培养基：眎蛋白胨、酵母膏、乳培养基：眎蛋白胨、酵母膏、乳糖、十二烷基磺酸钠、脱氧胆盐钠、溴糖、十二烷基磺酸钠、脱氧胆盐钠、溴甲酚紫、溴酚红等甲酚紫、溴酚红等第八章微生物监测环境解析粪大肠菌群u结果：同总大肠菌群结果：同总大肠菌群u卫生标准：卫生标准：u方法评价：是种较好的水中肠道致病菌的指方法评价：是种较好的水中肠道致病菌的指示菌示菌第八章微生物监测环境解析粪链球菌u意义：意义：在人粪便中数量仅次于大肠菌群细菌在人粪便中数量仅次于大肠菌群细菌在水中不会自行繁殖，但抵抗力弱于致在水

19、中不会自行繁殖，但抵抗力弱于致病菌病菌为水质细菌学评价提供有意义的补充材为水质细菌学评价提供有意义的补充材料料根据根据Fe/Fs（粪大肠菌群（粪大肠菌群/粪链球菌）粪链球菌）来来推测粪便污染的来源，仅适于新鲜污染推测粪便污染的来源，仅适于新鲜污染u方法：多管发酵法、滤膜法方法：多管发酵法、滤膜法lFe/Fs 4，认为污染主要来自于人粪；，认为污染主要来自于人粪；l0.7，主要来自温血动物粪便，主要来自温血动物粪便l2，混合污染以人粪为主，混合污染以人粪为主l0.7，混合污染以动物粪便为主，混合污染以动物粪便为主第八章微生物监测环境解析v产气荚膜梭菌产气荚膜梭菌u意义：存在于人及温血动物粪便中，

20、具有芽意义：存在于人及温血动物粪便中，具有芽孢的厌氧杆菌；具有较强抵抗力，特别适用孢的厌氧杆菌；具有较强抵抗力，特别适用于含有毒物质的水体于含有毒物质的水体u方法：多管发酵法、滤膜法、倾注法方法：多管发酵法、滤膜法、倾注法v蛭弧菌蛭弧菌u意义：天然寄生菌，对污染的指示滞后，其意义：天然寄生菌，对污染的指示滞后，其指示污染可弥补大肠菌群的不足。指示污染可弥补大肠菌群的不足。u方法：自来水双层琼脂平板法方法：自来水双层琼脂平板法产气荚膜梭菌产气荚膜梭菌蛭弧菌蛭弧菌第八章微生物监测环境解析第三节 其他指示微生物v致病菌的指示菌致病菌的指示菌u沙门氏菌沙门氏菌u志贺氏菌志贺氏菌u铜绿假单胞菌铜绿假单胞

21、菌u金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌u链球菌链球菌u破伤风梭菌破伤风梭菌肠炎沙门氏菌肠炎沙门氏菌志贺氏菌志贺氏菌铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌产色素的铜绿假单胞菌产色素的铜绿假单胞菌金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌链球菌链球菌破伤风梭菌破伤风梭菌第八章微生物监测环境解析v肠道病毒的指示微生物肠道病毒的指示微生物u脊髓灰质炎病毒脊髓灰质炎病毒v选用理由：脊髓灰质炎病毒疫苗株对环境压选用理由：脊髓灰质炎病毒疫苗株对环境压力相对稳定，抵抗力较其它病毒强，操作相力相对稳定，抵抗力较其它病毒强，操作相对安全，与其他病毒比较易从环境样品中检对安全，与其他病毒比较易从环境样品中检测到测到v浓缩方法：滤膜法、氢氧化铝吸附沉

22、淀法、浓缩方法：滤膜法、氢氧化铝吸附沉淀法、聚乙二醇脱水透析法聚乙二醇脱水透析法v检测方法：蚀斑实验、免疫学法检测方法：蚀斑实验、免疫学法第八章微生物监测环境解析u噬菌体噬菌体f2v选用理由：与肠道病毒基本性状相似，选用理由：与肠道病毒基本性状相似，核酸均为核酸均为RNA，理化性质相近；存在，理化性质相近；存在于人类粪便中，在水和污水中存在的于人类粪便中，在水和污水中存在的数目多于肠道病毒；对外环境和氯的数目多于肠道病毒；对外环境和氯的耐受力与肠道病毒相似或稍强；检测耐受力与肠道病毒相似或稍强；检测方法简单方法简单v检测方法：空斑定量测定法检测方法：空斑定量测定法第八章微生物监测环境解析v不足

23、之处：在人粪便中数量不多；不足之处：在人粪便中数量不多；DNA大肠大肠杆菌噬菌体在人类粪便中经常存在，并可能杆菌噬菌体在人类粪便中经常存在，并可能在水环境中繁殖，易掩盖或混淆。在水环境中繁殖，易掩盖或混淆。v作为肠道病毒污染指标不理想，可作为消毒作为肠道病毒污染指标不理想，可作为消毒效果评价指标效果评价指标第八章微生物监测环境解析第二节 污染物生物毒性的微生物学检测方法 第八章微生物监测环境解析一、原核微生物检测法v发光细菌发光细菌细菌生物发光抑制试验细菌生物发光抑制试验v细菌发光的生物学机制：细菌发光的生物学机制：NADH2FMN细胞色素细胞色素O2虫荧光色素酶虫荧光色素酶O2，醛，醛激活的

24、虫荧光色素酶激活的虫荧光色素酶虫荧光色素酶虫荧光色素酶+光光第八章微生物监测环境解析（一）细菌生物发光抑制试验v试验原理试验原理u环境条件不良或有毒物存在时，因细菌荧光环境条件不良或有毒物存在时，因细菌荧光素酶活性或细胞呼吸受到抑制，发光能力受素酶活性或细胞呼吸受到抑制，发光能力受影响而减弱，其减弱程度与毒物的毒性大小影响而减弱，其减弱程度与毒物的毒性大小和浓度成一定比例关系和浓度成一定比例关系u常用明亮发光杆菌常用明亮发光杆菌u“Microtox”法，是目前国际通用、使用最为法，是目前国际通用、使用最为广泛的污染物毒性微生物学检测方法广泛的污染物毒性微生物学检测方法第八章微生物监测环境解析细

25、菌生物发光抑制试验v试验方法试验方法u菌种复苏：加入菌种复苏：加入2NaCl，稳定，稳定12hu样品处理：样品稀释并调样品处理：样品稀释并调pH68，同时调，同时调溶液的渗透压使之含溶液的渗透压使之含2NaCl。u毒性测定：定量加入菌液和样品，毒性测定：定量加入菌液和样品，15培培养养5或或10min，直接读出光量抑制百分率，直接读出光量抑制百分率 求不同剂量及其求不同剂量及其IR之间的回归方程，计算之间的回归方程，计算IC50冻干菌种：白色粉末状，含冻干菌种：白色粉末状，含4发光发光菌细胞，菌细胞，2NaCl，保护剂和缓冲物，保护剂和缓冲物质，质，2025备用，有效期一备用，有效期一年年IR

26、阴性对准组指标值实验组指标值阴性对准组指标值实验组指标值阴性对准组指标值阴性对准组指标值100阳性有机对照苯酚阳性有机对照苯酚阳性无机对照阳性无机对照Zn2+阴性对照蒸馏水阴性对照蒸馏水第八章微生物监测环境解析细菌生物发光抑制试验u质量控制质量控制v同一剂量平行测定管间的发光强度差异值应同一剂量平行测定管间的发光强度差异值应20v100mg/L苯酚的苯酚的IC50,5min应为应为1326mg/Lv100mg/L ZnSO47H2O的的IC50,15min应为应为310mg/L第八章微生物监测环境解析细菌生物发光抑制试验v方法评价方法评价u与传统鱼类与传统鱼类96h毒性试验有良好的一致性毒性试

27、验有良好的一致性u灵敏、快速，自动化程度高灵敏、快速，自动化程度高u各实验室间重现性好，变异系数各实验室间重现性好，变异系数1020，明显好于传统鱼类明显好于传统鱼类96h毒性试验毒性试验u目前目前“Microtox”已有效地应用于化学物质的已有效地应用于化学物质的定量构效关系研究定量构效关系研究第八章微生物监测环境解析（二）硝化细菌硝化作用抑制试验v试验原理试验原理u毒物抑制硝化作用的酶类导致亚硝化或硝化毒物抑制硝化作用的酶类导致亚硝化或硝化细菌对底物的利用能力或产物生产量下降。细菌对底物的利用能力或产物生产量下降。通过测量底物或产物的变化来检测污染物毒通过测量底物或产物的变化来检测污染物毒

28、性作用的程度性作用的程度v试验方法：试验方法：v方法评价：灵敏度与方法评价：灵敏度与“Microtox”相当，但结相当，但结果相关性较差果相关性较差l菌种增至108个/mll定量加入菌液、NaNO2溶液、不同浓度样品，蒸馏水做对照l30培养4h，定时取样分析NO2-含量随时间变化，得出硝化作用强度l比较样品组与对照组，可得IC50第八章微生物监测环境解析二、真核微生物检测法（一）藻类（一）藻类生长抑制试验生长抑制试验u试验原理：常用硅藻、栅藻、小球藻等，生试验原理：常用硅藻、栅藻、小球藻等，生长迅速，对水质变化敏感，通过测定其生长长迅速，对水质变化敏感，通过测定其生长量来反应水质污染情况或物质

29、毒性程度量来反应水质污染情况或物质毒性程度u试验方法：藻体生长量；释出氧量；摄取试验方法：藻体生长量；释出氧量；摄取14C量；细胞量；细胞DNA及及ATP测定测定u结果评价与标准：藻细胞最大生长速率与对结果评价与标准：藻细胞最大生长速率与对照相比降至照相比降至50以下，且呈剂量反应关系以下，且呈剂量反应关系时，即可认为受试物有毒性作用时，即可认为受试物有毒性作用第八章微生物监测环境解析（二）原生动物微尺度群落级毒性试验u试验原理：在正常条件下自然界水环境的微试验原理：在正常条件下自然界水环境的微型生物群落种类、分布与构成均有一定规律。型生物群落种类、分布与构成均有一定规律。在外界环境因素的干扰

30、下，群落的平衡被破在外界环境因素的干扰下，群落的平衡被破坏，结构特征也随之变化。通过分析相关的坏，结构特征也随之变化。通过分析相关的微型生物群落结构参数，即可判断水环境的微型生物群落结构参数，即可判断水环境的质量状况或污染物质的毒性特征。具有很强质量状况或污染物质的毒性特征。具有很强的生态学意义。的生态学意义。第八章微生物监测环境解析原生动物微尺度群落级毒性试验u聚氨酯泡沫塑料块（聚氨酯泡沫塑料块（PFU）法）法v作为微型动物的生态岛，其上原生动作为微型动物的生态岛，其上原生动物群集速度随种类上升而下降，两者物群集速度随种类上升而下降，两者交叉点及为平衡点，达到平衡时间取交叉点及为平衡点，达到

31、平衡时间取决于环境条件决于环境条件v据报道：孔径据报道：孔径100150 m，厚度，厚度5cm，规格，规格56.57.5cm3为好，可为好，可依靠垂坠物悬挂在任何水层依靠垂坠物悬挂在任何水层v据报道：其挤出液可见到水体中大约据报道：其挤出液可见到水体中大约85的原生动物种类，可以反映整个的原生动物种类，可以反映整个群落动态变化的全过程和基本趋势群落动态变化的全过程和基本趋势第八章微生物监测环境解析原生动物微尺度群落级毒性试验u试验方法与评价：一般情况下，随着污染程试验方法与评价：一般情况下，随着污染程度的升高，原生动物种类数（度的升高，原生动物种类数（S）会减少，多）会减少，多样性指数（样性指

32、数（d）会降低，）会降低，Seq会下降；在一个会下降；在一个以异养型生物为主的水体中，异养型指数以异养型生物为主的水体中，异养型指数（HI）高，表示存在有机污染，此时群集速）高，表示存在有机污染，此时群集速度常数（度常数（G）会增大，）会增大，T90会缩短会缩短第八章微生物监测环境解析三、活性污泥毒性检测法v脱氢酶活性试验脱氢酶活性试验u试验原理：活性污泥中微生物的脱氢酶类能试验原理：活性污泥中微生物的脱氢酶类能使被氧化有机质的氢原子活化并传递给特定使被氧化有机质的氢原子活化并传递给特定的氢受体，反映活性污泥对污水中有机质的的氢受体，反映活性污泥对污水中有机质的氧化分解能力。毒性物质的存在会抑

33、制脱氢氧化分解能力。毒性物质的存在会抑制脱氢酶的活性，可通过指示剂的还原变色速度来酶的活性，可通过指示剂的还原变色速度来确定脱氢酶的活性，以判断毒性物质的作用确定脱氢酶的活性，以判断毒性物质的作用强度。常用指示剂为强度。常用指示剂为TTC（氯化三苯基四氮（氯化三苯基四氮唑），它受氢后变为红色唑），它受氢后变为红色TF（三苯基甲臜）（三苯基甲臜）（485nm）第八章微生物监测环境解析脱氢酶活性试验v试验方法：试验方法：uTF标准曲线的制作标准曲线的制作u驯化的活性污泥经离心洗涤制成悬浮液驯化的活性污泥经离心洗涤制成悬浮液u在测定管中定量加入悬浮液、在测定管中定量加入悬浮液、Tris-HCl缓冲缓

34、冲液、样品、液、样品、TTC等，以蒸馏水做对照等，以蒸馏水做对照u37水浴避光反应显色，加浓硫酸终止水浴避光反应显色，加浓硫酸终止u加入丙酮萃取加入丙酮萃取TF，离心上清液，离心上清液485nm比色，比色，得得TF产生量，计算脱氢酶活性产生量，计算脱氢酶活性酶活：指酶催化化学反应的能力，衡量标酶活：指酶催化化学反应的能力，衡量标准是酶促反应速度的大小，用单位时间内准是酶促反应速度的大小，用单位时间内底物的消耗量或产生生成量来表示底物的消耗量或产生生成量来表示第八章微生物监测环境解析呼吸抑制试验u试验原理：废水中有毒物质可以抑制微生物试验原理：废水中有毒物质可以抑制微生物的呼吸，使其耗氧量和的呼

35、吸，使其耗氧量和CO2产生量下降，下产生量下降，下降的程度与毒性物质的浓度和强度有关降的程度与毒性物质的浓度和强度有关u试验方法：传统的瓦勃氏呼吸仪法和目前的试验方法：传统的瓦勃氏呼吸仪法和目前的直接测定直接测定DO法法u结果评价：结果评价：相对好氧速率相对好氧速率污泥的呼吸耗氧速率污泥的呼吸耗氧速率内源性呼吸耗氧速率内源性呼吸耗氧速率100第八章微生物监测环境解析四、微生物学检测法评价v简便简便v灵敏灵敏v快速快速v经济经济v结果的差异性结果的差异性v结果的变异性结果的变异性v与哺乳动物试验互为补充与哺乳动物试验互为补充第八章微生物监测环境解析第三节 污染物致突变性的微生物检测方法v一、基因

36、突变试验v二、DNA损伤修复试验v三、DNA重组试验v四、微生物致突变试验与致癌物的确定第八章微生物监测环境解析一、 基因突变试验v鼠伤寒沙门氏菌鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶试验哺乳动物微粒体酶试验（Ames试验）试验）u应用与评价：应用与评价：v良好的环境致突变物与潜在致癌物初筛报警良好的环境致突变物与潜在致癌物初筛报警vAmes试验已被我国食品安全性毒理学评价程试验已被我国食品安全性毒理学评价程序、农药登记毒理学试验方法、新药（西药）序、农药登记毒理学试验方法、新药（西药）毒理学研究指导原则、化妆品安全性评价程毒理学研究指导原则、化妆品安全性评价程序和方法、食品功能毒理学评价程序和检验

37、序和方法、食品功能毒理学评价程序和检验方法等列为评价致突变性的必做试验方法等列为评价致突变性的必做试验第八章微生物监测环境解析鼠伤寒沙门氏菌鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体哺乳动物微粒体酶试验（酶试验（Ames试验）试验）u原理：原理： v人工诱变的鼠伤寒沙门氏菌株，又称人工诱变的鼠伤寒沙门氏菌株，又称TA（his）菌株，是组氨酸营养缺陷型菌株，在）菌株，是组氨酸营养缺陷型菌株，在致突变物的作用下，能发生回复突变为野生致突变物的作用下，能发生回复突变为野生型型v根据该菌在特殊培养基上的生长能力，判断根据该菌在特殊培养基上的生长能力，判断受试物是否具有致突变性受试物是否具有致突变性v哺乳动物肝匀浆

38、中含微粒体混合功能氧化酶，哺乳动物肝匀浆中含微粒体混合功能氧化酶，对间接致突变物有生物活化作用对间接致突变物有生物活化作用第八章微生物监测环境解析鼠伤寒沙门氏菌鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体哺乳动物微粒体酶试验（酶试验（Ames试验）试验）u常用菌株：常用菌株：TA97、TA98、TA100、TA102组氨酸依赖性，组氨酸依赖性，+ +表示需要表示需要 深粗糙型脂多糖屏障丢失，深粗糙型脂多糖屏障丢失，+ +表示表示缺失，有抑菌缺失，有抑菌紫外线损伤修复基因缺陷，紫外线损伤修复基因缺陷，+ +表示缺失，无修复能力表示缺失，无修复能力抗氨苄青霉素因子，抗氨苄青霉素因子，+ +表示有表示有 抗四环素

39、质粒，抗四环素质粒，+ +表示有表示有第八章微生物监测环境解析鼠伤寒沙门氏菌鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体哺乳动物微粒体酶试验（酶试验（Ames试验）试验）u实验设计：实验设计：v菌株选择：菌株选择： TA97、TA98、TA100、TA102v溶剂选择：根据受试物的理化性质，水溶性溶剂选择：根据受试物的理化性质，水溶性的最好用灭菌双蒸水，非水溶的一般常用二的最好用灭菌双蒸水，非水溶的一般常用二甲基亚砜（甲基亚砜（DMSO），每皿有机溶剂用量不），每皿有机溶剂用量不得超过得超过0.1ml第八章微生物监测环境解析鼠伤寒沙门氏菌鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体哺乳动物微粒体酶试验（酶试验（Ames试

40、验）试验）v剂量选择：在剂量选择：在0.2500 g/皿之间选择皿之间选择2或或3个个剂量，常用为剂量，常用为0.2、2、20、500 g/皿。有杀皿。有杀菌作用的包括一个最低杀菌浓度，有沉淀的菌作用的包括一个最低杀菌浓度，有沉淀的包括一个最小沉淀浓度，诱变阴性的包括一包括一个最小沉淀浓度，诱变阴性的包括一个最大溶解浓度，无杀菌作用的最高检测浓个最大溶解浓度，无杀菌作用的最高检测浓度至少应为度至少应为500 g/皿。受试溶液应新鲜配制皿。受试溶液应新鲜配制v阳性对照物的选择：必须同时做阳性对照，阳性对照物的选择：必须同时做阳性对照，用以检定菌株的回变性和特异性以及用以检定菌株的回变性和特异性以

41、及S-9混合混合液的效果液的效果第八章微生物监测环境解析鼠伤寒沙门氏菌鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体哺乳动物微粒体酶试验（酶试验（Ames试验）试验）v试验设计的严密性：受试物最少应设三个剂试验设计的严密性：受试物最少应设三个剂量，以便观察剂量反应关系，同时设阳性对量，以便观察剂量反应关系，同时设阳性对照、阴性对照和溶剂对照。阴性对照可反应照、阴性对照和溶剂对照。阴性对照可反应菌株的自发回变情况，溶剂对照可排除溶剂菌株的自发回变情况，溶剂对照可排除溶剂引起突变的可能性。同一样品必须做加引起突变的可能性。同一样品必须做加S-9混混合液和不加合液和不加S-9混合液的试验。试验时，每份混合液的试验。

42、试验时，每份样品（包括对照）均应做三个平行样，至少样品（包括对照）均应做三个平行样，至少应做应做2次重复试验，方可正式报告结果次重复试验，方可正式报告结果第八章微生物监测环境解析鼠伤寒沙门氏菌鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体哺乳动物微粒体酶试验（酶试验（Ames试验）试验）u培养基：培养基：vS-9液取材：选用液取材：选用200g左右、健康雄性左右、健康雄性Sprague-Dawley系大鼠或系大鼠或150g左右、健康雄左右、健康雄性性Wister大鼠。大鼠。v营养肉汤培养基（增菌用）：含牛肉膏、蛋白营养肉汤培养基（增菌用）：含牛肉膏、蛋白胨胨vVogel-Bonner氏液：含多种无机盐氏液：含

43、多种无机盐v底层琼脂（供细菌生长）：含底层琼脂（供细菌生长）：含V-B液、葡萄糖液、葡萄糖v顶层琼脂（致突变试验）：含生物素、组氨酸顶层琼脂（致突变试验）：含生物素、组氨酸第八章微生物监测环境解析鼠伤寒沙门氏菌鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体哺乳动物微粒体酶试验（酶试验（Ames试验）试验）v营养琼脂（鉴定菌株特性）营养琼脂（鉴定菌株特性）v氨苄青霉素平皿（鉴定氨苄青霉素平皿（鉴定R因子）：含因子）：含V-B液、葡萄糖、生物素、组氨酸、氨苄青液、葡萄糖、生物素、组氨酸、氨苄青霉素霉素v组氨酸组氨酸/生物素平皿（鉴定生物素平皿（鉴定His）：含）：含V-B液、葡萄糖、生物素、组氨酸液、葡萄糖、生物

44、素、组氨酸vMaster平板（短期保存菌种）：含平板（短期保存菌种）：含V-B液、葡萄糖、生物素、组氨酸、氨苄青液、葡萄糖、生物素、组氨酸、氨苄青霉素霉素第八章微生物监测环境解析鼠伤寒沙门氏菌鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体哺乳动物微粒体酶试验（酶试验（Ames试验）试验）u试验方法：试验方法： v纸片点试法：定性试验纸片点试法：定性试验p结果评价：如果仅在平板上出现少量的散的结果评价：如果仅在平板上出现少量的散的菌落认为是阴性致突变物。如果浸有受试物菌落认为是阴性致突变物。如果浸有受试物的纸片周围长出较多密集的回变菌落与空白的纸片周围长出较多密集的回变菌落与空白对照有明显区别者，可判定该受试物

45、为阳性对照有明显区别者，可判定该受试物为阳性致突变物致突变物纸片周围回变菌落数纸片周围回变菌落数20，为，为“-”纸片周围回变菌落数纸片周围回变菌落数100，为，为“+”纸片周围回变菌落数纸片周围回变菌落数200，为，为“+”纸片周围回变菌落数纸片周围回变菌落数500，为，为“+”第八章微生物监测环境解析鼠伤寒沙门氏菌鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体哺乳动物微粒体酶试验（酶试验（Ames试验）试验）u平皿渗入法：定量试验平皿渗入法：定量试验v结果评价：结果评价：p阳性结果的判断：阳性结果的判断： 渗入试验必须同时渗入试验必须同时获得下列结果，才能确定测试物为阳获得下列结果，才能确定测试物为阳性致

46、突变物性致突变物v背景菌落生长良好背景菌落生长良好v测试皿回变菌落数比对照皿回变菌落测试皿回变菌落数比对照皿回变菌落数增加数增加2倍以上倍以上v有剂量反应关系有剂量反应关系v试验结果有重现性试验结果有重现性第八章微生物监测环境解析鼠伤寒沙门氏菌鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体哺乳动物微粒体酶试验（酶试验（Ames试验）试验）p阴性结果的判断：渗入试验必须同时获得下阴性结果的判断：渗入试验必须同时获得下列结果，才能确定测试物为阴性致突变物列结果，才能确定测试物为阴性致突变物v对于纯化学受试物，当试验浓度达对于纯化学受试物，当试验浓度达500g/皿皿（或对测试菌株最大无抑制用剂量）仍未见（或对测试菌

47、株最大无抑制用剂量）仍未见阳性结果者，阳性结果者，v S-9试验结果阴性试验结果阴性v不同菌株试验结果均为阴性不同菌株试验结果均为阴性v重复检验也均为阴性重复检验也均为阴性第八章微生物监测环境解析鼠伤寒沙门氏菌鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体哺乳动物微粒体酶试验（酶试验（Ames试验）试验）u注意事项注意事项v无菌操作。本试验全部操作必须严格无菌，无菌操作。本试验全部操作必须严格无菌，所使用的溶液、培养基、器材等必须经过所使用的溶液、培养基、器材等必须经过灭菌，以防其它细菌或霉菌污染灭菌，以防其它细菌或霉菌污染v测试菌株的菌液必须是新培养的新鲜菌液，测试菌株的菌液必须是新培养的新鲜菌液，每每ml

48、活菌数不得少于活菌数不得少于2 108个。菌株在个。菌株在使用前应进行鉴定使用前应进行鉴定v试验中所用的阳性对照物对人体有害，操试验中所用的阳性对照物对人体有害，操作时，应加强个人防护作时，应加强个人防护v应有良好的、具通风换气设备的实验室应有良好的、具通风换气设备的实验室第八章微生物监测环境解析鼠伤寒沙门氏菌鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体哺乳动物微粒体酶试验（酶试验（Ames试验）试验）u注意事项注意事项v一切带有测试菌的器皿，用后立即高压灭菌，若一切带有测试菌的器皿，用后立即高压灭菌，若来不及灭菌则放在加盖容器内，严防任何小动物来不及灭菌则放在加盖容器内，严防任何小动物特别是老鼠接触特别是

49、老鼠接触v所用有机溶液必须重新蒸馏。低温蒸馏必须用水所用有机溶液必须重新蒸馏。低温蒸馏必须用水浴及专用蒸馏器，并在通风柜内进行，严防明火浴及专用蒸馏器，并在通风柜内进行，严防明火接触，以免发生火灾接触，以免发生火灾v使用的蒸馏水必须是重蒸水。配试剂及培养基要使用的蒸馏水必须是重蒸水。配试剂及培养基要用新蒸的蒸馏水，保证一切溶剂无致突变物污染。用新蒸的蒸馏水，保证一切溶剂无致突变物污染。所有器皿最后也应用新蒸出的蒸馏水洗净所有器皿最后也应用新蒸出的蒸馏水洗净第八章微生物监测环境解析v发光细菌试验发光细菌试验u原理：发光细菌的自发暗变异株与致突变物原理：发光细菌的自发暗变异株与致突变物接触后，可恢

50、复一定强度的发光能力。接触后，可恢复一定强度的发光能力。u应用与评价：与应用与评价：与Ames试验检测遗传毒性物试验检测遗传毒性物质所反应的遗传毒性水平具有较好的一致性；质所反应的遗传毒性水平具有较好的一致性；美国美国Microbics公司标准化方法公司标准化方法“Mutatox”第八章微生物监测环境解析发光细菌试验发光细菌试验u方法：方法：v步骤：菌株复苏步骤：菌株复苏增菌增菌分装分装20振荡振荡24h开始测定发光强度（每隔开始测定发光强度（每隔34h）v结果判定：结果判定：p待测样品管发光强度是对照管待测样品管发光强度是对照管3 3倍为阳倍为阳性结果；性结果；p样品管样品管5 5个平行系列

51、中阳性结果个平行系列中阳性结果3，待，待测物具致突变性；不足测物具致突变性；不足3个为可疑；无个为可疑；无阳性结果可认为不具有致突变性阳性结果可认为不具有致突变性第八章微生物监测环境解析v其他基因突变试验其他基因突变试验u营养缺陷型菌株回复突变试验：类似于营养缺陷型菌株回复突变试验：类似于Ames试验试验u细菌的正向突变试验：正向突变比回复突变细菌的正向突变试验：正向突变比回复突变的的DNA有更多位点可以发生突变，可以检测有更多位点可以发生突变，可以检测更为广泛的化合物更为广泛的化合物u粗糙脉孢菌的正向突变试验：真核真菌，用粗糙脉孢菌的正向突变试验：真核真菌，用于检测基因的正向和回复突变于检测

52、基因的正向和回复突变u构巢曲霉的突变试验：构巢曲霉的突变试验：第八章微生物监测环境解析第二节 DNA损伤修复试验vSOS显色试验显色试验uSOS修复：修复：“易错性易错性DNA修复修复”，靠，靠这种修复形成的这种修复形成的DNA聚合酶由于识别聚合酶由于识别碱基的精确性低，易造成复制的差错，碱基的精确性低，易造成复制的差错，进而引起突变进而引起突变u原理：致突变因素作用于原理：致突变因素作用于DNA产生的产生的某些损伤可诱导细菌某些损伤可诱导细菌SOS修复系统的修复系统的反应，通过检测反应，通过检测SOS修复的能力来查修复的能力来查明理化因素是否具有致突变、致癌的明理化因素是否具有致突变、致癌的

53、特性；可用特定菌株分解特定物质产特性；可用特定菌株分解特定物质产生色素来反应其中酶的合成水平生色素来反应其中酶的合成水平-半乳糖苷酶分解半乳糖苷酶分解Xgal(5-Xgal(5-溴溴-4-4-氯氯-3-3-吲哚吲哚- -D-半乳糖苷半乳糖苷) )和和ONPG（邻硝基苯（邻硝基苯-D-半乳糖苷），半乳糖苷），分别产生蓝色不溶性色素和黄色可分别产生蓝色不溶性色素和黄色可溶性色素溶性色素第八章微生物监测环境解析SOS显色试验显色试验u方法：检测细菌细胞原发直接的方法：检测细菌细胞原发直接的SOS反应，反应，即用产色底物来监测大肠杆菌即用产色底物来监测大肠杆菌SOS修复反应；修复反应；纸片法定性，液体

54、法定量纸片法定性，液体法定量u应用与评价：与应用与评价：与Ames的敏感性、准确性相的敏感性、准确性相当，且操作简单、快速、经济、方便、不受当，且操作简单、快速、经济、方便、不受测试菌株存活数的影响；可将二者互为补充测试菌株存活数的影响；可将二者互为补充共同作为研究遗传毒物的初筛试验共同作为研究遗传毒物的初筛试验第八章微生物监测环境解析聚合酶缺陷型菌株试验v原理：多数致癌物质可与原理：多数致癌物质可与DNA结合使之发生结合使之发生一定的改变和损伤，而微生物具有修复一定的改变和损伤，而微生物具有修复DNA的功能；将同一受试物作用于具有修复能力的功能；将同一受试物作用于具有修复能力的野生型菌株和缺

55、乏修复能力的变异株，则的野生型菌株和缺乏修复能力的变异株，则微生物的生长可能出现差异；聚合酶缺陷型微生物的生长可能出现差异；聚合酶缺陷型菌株菌株DNA受损后即不能修复，细菌无法生存受损后即不能修复，细菌无法生存第八章微生物监测环境解析聚合酶缺陷型菌株试验v菌株：菌株：E.coli P3478（polA-）和）和E.coli W3110（polA+）v方法：点试法比较抑菌圈或划线接种带方法：点试法比较抑菌圈或划线接种带v应用与评价：应用与评价：u只对具有直接致突变作用的烷化物较为敏感只对具有直接致突变作用的烷化物较为敏感u对需要代谢活化的化合物如芳香胺、多环烃等对需要代谢活化的化合物如芳香胺、多

56、环烃等不敏感，加肝匀浆活化系统亦效果不佳不敏感，加肝匀浆活化系统亦效果不佳u在液体培养基中测定对某些原致癌物检出率有在液体培养基中测定对某些原致癌物检出率有所提高所提高第八章微生物监测环境解析重组缺陷型菌株试验v原理：利用检验重组修复能力来判断致突变原理：利用检验重组修复能力来判断致突变性性v菌株：枯草芽孢杆菌重组缺陷型菌株菌株：枯草芽孢杆菌重组缺陷型菌株Bac.subtilis M45（recA-）和对照菌株）和对照菌株Bac.subtilis H17（recA+）v方法：点试法比较抑菌圈或划线接种带方法：点试法比较抑菌圈或划线接种带v应用与评价：应用与评价：u在无代谢活化条件下比在无代谢活

57、化条件下比Ames敏感敏感u在有代谢活化条件下检出率比在有代谢活化条件下检出率比Ames低低第八章微生物监测环境解析溶源性细菌试验v原理：溶源性细菌细胞受到某些诱变剂作原理：溶源性细菌细胞受到某些诱变剂作用时，产生用时，产生SOS修复，使菌体内原噬菌体修复，使菌体内原噬菌体活跃起来，在菌体内大量繁殖，使细菌发活跃起来，在菌体内大量繁殖，使细菌发生裂解而释放；在固体培养基上裂解非溶生裂解而释放；在固体培养基上裂解非溶源性细菌形成噬菌斑源性细菌形成噬菌斑v菌株：溶源性菌株：溶源性E.coli K12（）和非溶源性）和非溶源性E.coli K12（S）v方法：将两种菌液按一定比例同时接种于方法：将两

58、种菌液按一定比例同时接种于一个平板，放入受试物过夜培养观察一个平板，放入受试物过夜培养观察v应用与评价：可用于测定复杂混合物的潜应用与评价：可用于测定复杂混合物的潜在遗传毒性在遗传毒性第八章微生物监测环境解析第三节 DNA重组试验v酿酒酵母的有丝分裂基因转变可测定致突变酿酒酵母的有丝分裂基因转变可测定致突变物质所致的缺陷型等位基因的转变物质所致的缺陷型等位基因的转变v异点等位基因二倍体的酵母菌株在其同一基异点等位基因二倍体的酵母菌株在其同一基因座位有两个不同的缺陷型等位基因，其存因座位有两个不同的缺陷型等位基因，其存在导致一定的营养要求在导致一定的营养要求v在致突变物损伤在致突变物损伤DNA，

59、导致整个基因组的有，导致整个基因组的有丝分裂重组增强，基因转变随之发生，一个丝分裂重组增强，基因转变随之发生，一个突变型整段转移取代另一突变型等位基因中突变型整段转移取代另一突变型等位基因中有缺陷的核苷酸顺序，将其中一个基因恢复有缺陷的核苷酸顺序，将其中一个基因恢复成野生型等位基因成野生型等位基因第八章微生物监测环境解析第四节 微生物致突变试验与致癌物的确定vICPEMC于于1983年提出致突变试验的遗传学年提出致突变试验的遗传学终点分为终点分为5类类uDNA完整性的改变完整性的改变uDNA重排或交换重排或交换uDNA碱基序列改变碱基序列改变u染色体完整性改变染色体完整性改变u染色体分离改变染

60、色体分离改变第八章微生物监测环境解析v目前没有一种致突变试验能涵盖所有的遗传目前没有一种致突变试验能涵盖所有的遗传学终点。学终点。ICPEMC认为需选用一组试验配套认为需选用一组试验配套进行检测，包括进行检测，包括5种遗传学终点。如选用种遗传学终点。如选用Ames试验、微核试验、枯草杆菌试验、微核试验、枯草杆菌DNA修复修复试验和外周血淋巴细胞姊妹染色单体互换试验和外周血淋巴细胞姊妹染色单体互换（SCE）试验）试验4个项目即可满足要求个项目即可满足要求第八章微生物监测环境解析第十九章 微生物监测技术的新发展v第一节 分子生物学技术在环境微生物监测中的应用v第二节 微生物传感器在环境监测中的应用