9味中药对鸡腿蘑深层发酵的影响

1、9 味中药对鸡腿蘑深层发酵的影响 本文采用将中药固体粉末 摘 要：研究中药对鸡腿蘑深层发酵中生物量和胞外粗多糖的影响。 分别加入培养基中 接种培养，培养 4 d 后测定生物量和胞外粗多糖。结果表明，除黄芪、玉竹外，绞股蓝、苦 荞、魔芋、百合、 人参、丹参和苦瓜都能促进鸡腿蘑的生长和胞外多糖的分泌。不同中药量添加的结果显示， 人参的最适添加量为 1 . 5 % ，绞股蓝、苦荞、魔芋、百合、丹参和苦瓜的最适添加量均为 关键词：中药；鸡腿蘑；发酵；多糖 Effectsof NineKindsof ChineseTraditionalMedicineson Submerged Fermentation

2、 of Coprinuscomatus WANG Fen，g DING Zhong-yang ，WANG Yu-hong， ZHANG Ke-chang (LaboratoryofBiomassResourceandKeyLaboratoryofIndustrialBiotechnologyofMinistryo fEducation, Southern Yangtze University, Wuxi 214036, China) Abstract ： SomeworkswerecarriedoutabouttheeffectsofnineKindsofChineseTraditionalM

3、edicineson biomassandcrude exopolysaccharideofCoprinuscomatusinsubmergedfermentation.Theresultshowed:allmed icines,exceptAstrgalusmenbranaceus andPolygonatumodoratum,couldimprovethefermentationofCoprinuscomatusandstimulatet hesecretionofcrudeexopolysaccharide inacertaindosage.Itcouldbeconcluded,byad

4、dingmedicinesindifferentdosages,thatwhen theoptimumdosagesofMomordica charantiaL.,Gynostemmapentaphyllum,Lily,Buckwheat,RadixSalviaemiltiorrhizaeandAm orphaphalluskonjakwererespec- tively 0.5%, and the biomass and crude exopolysaccharide could reach the maximumwhen Ginseng was added at 1.5%. Key wro

5、ds ： Chinese traditiond medieine ； Coprinus comatus ； fementation ； exopolysaacharide 鸡腿蘑 （Coprinus comatus） ，又名鸡腿菇、毛头鬼 伞，真菌门担子菌亚门层菌纲伞菌目鬼伞科鬼伞属 1,2 o 甘、平、无 ，“主小儿寒热痫” （“别录” ） , “和醋敷肿毒、恶 （ “本草拾遗” ） 。现代研究表明，鸡腿蘑具有降低血 抗肿瘤，提高机体免疫力，降低血糖的功效 8 鸡腿蘑营养丰富，可食用，而且具有较高的药用价值。 我国传统医学对其药性有过不少记载： 毒” 疮” 脂， 3 。 因此，鸡腿蘑具有较高

6、的食用价值和药用价值。近几 年来，有学者提出了中药发酵制药技术 9,10 ；而鸡腿蘑 作为一种药用真菌，能以液体发酵进行生产。因此， 我们在深层发酵培养基中添加适量的中药，使鸡腿蘑在 代谢过程中可能对中药的一些成分进行转化，而中药的 某些成分也可能促进鸡腿蘑的生长和活性物质产生，从 而进一步增强鸡腿蘑降血糖的功效。本文在添加中药培 养基中进行鸡腿蘑深层发酵，初步研究了中药对鸡腿蘑 菌丝生长及其胞外多糖分泌的影响。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 菌种：鸡腿蘑 (Coprinus comatus) ，由江南大学 生物工程学院生物资源实验室筛选保藏 1.1.2 培养基：斜面培养基：综合

7、PDA 培养基。种 子培养基：葡萄糖 20g/L ，玉米粉 15g/L ，麸皮 5g/L ， KH 2 PO 4 2g/L ，MgSO 4 7H 2 O 3g/L ，酵母膏 2g/L ，玉 米浆 5g/L 。发酵基础培养基：葡萄糖 10g/L ，玉米粉 15g/L ，麸皮 10g/L ， KH 2 PO 4 2g/L ，MgSO 4 7H 2 O 3g/L 。 1.1.3 中药材：绞股蓝、苦荞、黄芪、魔芋、百 合、人参、丹参、玉竹均购自江苏无锡山河药业集团。 苦瓜为鲜苦瓜切片后 60C烘干至恒重。各种中药粉碎后 过 60 目备用。 1.2 方法 1.2.1 接种培养 将中药固体粉末按一定的量加

8、入到发酵基础培养基 中，121C灭菌30min。冷却后接入鸡腿蘑液体种子。 摇瓶条件：三角瓶 500ml，装液量150ml，温度25C, 转速 150r/min ，培养时间 4d 。 1.2.2 生物量计算 取 100ml 发酵液，离心 (3000r/min ，20min) ，沉淀 用自来水洗涤3次，收集菌丝体，60 C烘干至恒重，称 重得生物量。 1.2.3 胞外粗多糖的计算 将离心所得的发酵液上清液合并，减压浓缩至原体 积的2/53/5，加入无水酒精至乙醇含量为30%(V/V), 在冰箱中静置 2 4 h 。离心，弃去沉淀，上清液再加无 水酒精至乙醇含量为 70%(V/V) ，在冰箱中静置

9、 24h 。离 心，收集沉淀，60 C烘干至恒重，称重得胞外粗多糖 的 量 。 2 结果与分析 2.1 中药对鸡腿蘑发酵的影响 将9味中药的固体粉末按 1%(W/W的比例分别加入 发酵基础培养基中，研究其对鸡腿蘑深层发酵生物量和 胞外粗多糖的影响，结果如表 1 所示。其中对照样为不 添加中药的发酵基础培养基发酵的结果，其他条件相 同。由表 1 可见，在 1 % 的中药浓度下，黄芪和玉竹 对鸡腿蘑的生长有明显的抑制作用，丹参也有一定的抑 制作用，而绞股蓝、苦荞、百合、人参、魔芋和苦 瓜均能促进鸡腿蘑的生长，尤其以绞股蓝最为显著，生 物量增加了 2 7 % 。从胞外粗多糖来看，黄芪和玉竹由 于抑制

10、鸡腿蘑的生长，发酵结束后离心上清液碘液检测 呈阳性，说明酒精沉淀的胞外粗多糖中有淀粉或糊精类 物质的存在，这可能是胞外粗多糖成倍增加的原因；其 他7 种中药均能促进鸡腿蘑胞外多糖的分泌，离心上清 液碘液检测呈阴性。 试样 对照 绞股蓝 苦荞 黄芪 百合 人参 丹参 玉竹 魔芋 苦瓜 检测结果 表 2 添加中药的鸡腿蘑发酵液离心上清液碘液检测结果 Table 2 Results of iodine-solution test of supernatant separated from fermented liquid of C. comatus added Chinese medicines 注

11、：“”表示碘液检测结果呈阳性；“”表示碘液检测结果呈阴性。 为了进一步确定黄芪和玉竹对鸡腿蘑生长的抑制， 将其添加量降为 0.5% ，结果如图 2 所示。由图 2 可以 看出，在降低了黄芪和玉竹的添加量后，其对鸡腿蘑 的生长仍然具有抑制作用；胞外粗多糖虽明显增多，但 碘液检测仍呈阳性。 2.2 不同中药量对鸡腿蘑发酵的影响 试样 对照 绞股蓝 苦荞 黄芪 百合 生物量 (g/100ml) 0.6135 0.7769 0.7458 0.2159 0.6921 胞外粗多糖 (g/100ml) 0.2137 0.3912 0.3515 0.4452 0.3954 试样 人参 丹参 玉竹 魔芋 苦瓜

12、生物量 (g/100ml) 0.7614 0.5598 0.2697 0.7174 0.7552 胞外粗多糖 (g/100ml) 0.2964 0.2567 0.6746 0.3978 0.3218 表1 中药对鸡腿蘑生物量和胞外粗多糖的影响 食品科学 工艺技术 Table 1 Effect of different Chinese medicines on biomass and exopolysaccharide of C. comatus1462005, Vol. 26, No. 10 取对鸡腿蘑生长没有很强抑制的 7 味中药，改变其 添加量，分别为 0.25% 、0.5%、0.75%、

13、 1%、1.5% 和 2 % ，研究了不同中药用量对鸡腿蘑生物量和胞外粗 多糖的影响。结果如图 2(a,b,c,d,e,f,g) 所示。 结果表明，百合、人参、苦荞和苦瓜 4 味中药均 能促进鸡腿蘑的生长和胞外多糖的分泌，但随着添加量 的增加，其生物量和胞外粗多糖都呈现了下降的趋势， 说明这几味中药的用量应该控制在一定范围内，而峰值 的出现使得我们能够初步确定它们的最适添加量。与前 面4 味中药不同的是，绞股蓝、丹参和魔芋这 3 味中药 对鸡腿蘑胞外多糖分泌的促进呈现剂量效应，而它们对 鸡腿蘑生长的影响与前述几种中药相似。另外，从中 药添加量对鸡腿蘑生长影响的角度来看，除人参外，绞 股蓝等六味

14、中药最适添加量都在 0.5% 。 3 讨论 研究结果表明，黄芪、玉竹抑制鸡腿磨的生长， 图1 黄芪和玉竹对鸡腿蘑发酵的影响 Fig.1 Effect of A. membranaceus and P. odoratum on the fermentation of C. comatu 生 物 量 (g/100m )l 胞 外 粗 多糖 (g/1m0 对照 黄芪 玉竹 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 物量生 外粗多糖胞 0g/1(0ml) 生物量 (g/100ml) 胞外粗多糖 (g/100ml) 0 0.5 1 1.5 2 2.5 中药添加量 (%) 0.85 0.

15、8 0.75 0.7 0.65 物量生 0g/1(0ml) 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 外粗多糖胞 0g/1(0ml) a. 绞股蓝 生物量 胞外粗多糖 图2 中药添加量对鸡腿蘑发酵的影响 Fig.2 Effect of different dosages of Chinese medicines on the fermentation of C. comatus 0 0.5 1 1.5 2 2.5 中药添加量 (%) 0.8 0.75 0.7 0.65 0.6 0.55 0.5 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 b. 百合 生物量 胞外粗多糖 物量生

16、 0g/1(0ml) 外粗多糖胞 0g/1(0ml) 0 0.5 1 1.5 2 2.5 中药添加量 (%) 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 c. 丹参 生物量 胞外粗多糖 物量生 0g/1(0ml) 外粗多糖胞 0g/1(0ml) 0 0.5 1 1.5 2 2.5 中药添加量 (%) 0.85 0.8 0.75 0.7 0.65 0.6 0.55 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 d. 人参 生物量 量生物胞外粗多糖 0g/1(0ml) 外粗多糖胞 0g/1(0ml) 0 0.5 1 1.5 2 2.5 中药添加

17、量 (%) 0.9 0.85 0.8 0.75 0.7 0.65 0.6 0.4 0.3 0.2 0.1 0 e. 苦荞 生物量 胞外粗多糖 物量生 0g/1(0ml) 外粗多糖胞 0g/1(0ml) 0 0.5 1 1.5 2 2.5 中药添加量 (%) 0.9 0.85 0.8 0.75 0.7 0.65 0.6 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 f. 魔芋 生物量 量生物胞外粗多糖 0g/1(0ml) 外粗多糖胞 0g/1(0ml) 0 0.5 1 1.5 2 2.5 中药添加量 (%) 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1

18、 0 g. 苦瓜 生物量 胞外粗多糖 物量生 0g/1(0ml) 外粗多糖胞 0g/1(0ml)147 工艺技术 食品科学 2005, Vol. 26, No. 10 其他 7 味中药都能促进鸡腿蘑的生长和胞外多糖的分 泌。在低添加量时，百合、人参、苦荞和苦瓜均可 增加鸡腿蘑的生物量和胞外粗多糖的产生；但随着添加 量的升高，生物量和胞外粗多糖在一定剂量下都出现了 峰值，而且，除百合外，其变化趋势是基本一致的。 绞股蓝、丹参和魔芋亦能促进鸡腿蘑的生长，生物量 变化趋势与百合等相同；但其对鸡腿蘑胞外粗多糖产量 的影响，呈现剂量关系。从生物量分析，人参的最适 添加量为 1 . 5 % ，百合、苦荞、

19、苦瓜、绞股蓝、丹参 和魔芋的最适添加量为 0.5% 。由于百合等 7 味中药本身 就具有降血糖的功效，加上其均能促进鸡腿蘑的生长和 代谢，通过发酵可能会提升鸡腿蘑在降血糖方面的疗 效。对于中药在鸡腿蘑发酵过程中的变化以及中药对鸡 腿蘑发酵及其功效的影响我们将做进一步的研究。 参考文献： 1 邵立平 . 真菌分类学 M. 北京: 中国林业出版社 , 1984. 2 黄年来 . 自修食用菌学 M. 南京: 南京大学出版社 , 1987. 3 Byeung-Hun-Lee,Hyun-Jeong-Kim,Jong-Sun-Chang,etal. InhibitoryeffectofCoprinusco

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21、ean-Soci- ety-of-Food-Science-and-Nutrition,1999,28(2):452-457. 5 李师鹏 , 苏蕾 . 鸡腿蘑多糖的提取及其免疫活性抗肿瘤活 性的研究 J. 中国商办工业 ,2000,1(1):44-45. 6 崔旻, 张好建, 安利国 . 鸡腿蘑多糖对肿瘤生长的抑制作 用 J. 世界华人消化杂志 ,2002,10(3):287-290. 7 王玉萍 , 李翔太 , 等. 富铬鸡腿蘑菌丝体发酵液急性毒性 和降血糖作用的初步研究 J. 山东大学学报 ,2000,35(1): 117-120. 等. 鸡腿蘑发酵液与钒酸钠协同抑制小 J. 中国食用菌 , 2003, 22(1): 39- 曹秋娥 . 微生物发酵中药应成为中药研 ,2001,32(3):267-268. 孙筱林 , 等 . 中药发酵制药技术 J. 山东 8 韩春超 , 邢福国 , 鼠血糖升高作用的研究 40. 9 王兴红 , 李旗德 , 究的新内容 J. 中草药 10 吴炳新 , 牛纪江 , 中医杂志 ,2001,20(3):179-180. 收稿日期： 2004-08-31 基金项目：陕西省科学院科技攻关项目 (2002K-09) 作者简介：杨明琰，硕士研究生，研究方向为应用微生物技术。 高产 SOD 酵母菌的诱变选育及发酵条件研究 杨明琰 1,2 ，郭爱莲 2