实验2-溴磺酞钠的药代动力学参数估算

1、实验二溴磺酞钠(BSP)的药代动力学参数估算Experiment 2. Estimation of pharmacokinetic parameters of Sodium bromsulphalein(BSP)教材：钱之玉 主编，药理学实验与指导第二版，中国医药科技出版社，2003年实验内容【目的】以溴磺酞钠（BSP）为例，学习估算药代动力学参数的基本方法 【原理】某些药物，在动物体内按一房室模型处置，静脉注射后，血药浓度-时间议程为一级动力学方程，即： 式中k为药物清除速率常数，C0为t=0 时的血药浓度。 上式经对数变换得：即血药浓度对时间t在半对数坐标纸上呈直线。1、药理作用 ：本品为

2、诊断用药。经静脉注射后本品几乎全部通过肝脏加以清除。当肝功能异常时，血浆中磺溴酞钠（BSP）清除速度减慢。定时抽取血样，测定血液中BSP含量，观察其清除速度即可反映肝功能状况。2、溴磺酞钠溶液对组织有刺激性，注射时切不可漏出静脉外，否则可引起局部组织坏死。 有关药动学参数的求算： 消除速率常数k=-2.303b（时间-1） 半衰期t1/2=0.693/k（时间） 表观分布容积V=X0/C0（体积/体重） 消除率C1=kV=0.693V/t1/2（体积/时间/体重）实验内容【材料】家兔1只离心管，试管，吸管，注射器，静脉插管，兔手术台，722分光光度计2% 溴磺酞钠溶液，肝素化生理盐水（10u/

3、ml），草酸钾，2.5N NaOH，0.01N HCl，1% 盐酸普鲁卡因实验内容Methods1. a rabbit weigh-fix-anesthesia with urethane2.Shear the hair in the groin on one side where throbbing can be seen, subdermal 3.Cut the skin 34cm - Separate the femoral vein - insert a venous cannula - fix it -make sure blood can be taken smoothly. 4.

4、Blood samples(1.5ml) are taken from femoral vein at 2，4，6，10，15，20min following iv 20mg/kg of BSP. The blood samples-into the tubes containing K2C2O4. 5 Every time before taking blood sample, give up about 0.2ml blood at first, and after sampling blood, inject the same capacity of Saline to rabbit t

5、o make up the blood for loss.6.Separate the plasma by centrifuging at 3000rpm for 5min.7.Transfer 0.5ml plasma from each sample to various dry tubes.8.Add 5.5ml of 0.01N HCl to each tube and shake it thoroughly.9.The optical densities AH+ are measured with colormeter (540nm). Distilled water serves

6、as a blank.10.After obtained the optical densities AH+，add one drop of 2.5N NaOH to each tube and shake it. Then measure optical densities AOH-.11.With the difference between two optical densities = AOH-AH+，the concentration of BSP in plasma is determined from the standard curve. BSP标准曲线 C=-0.255+16

7、.655A（ug/ml） = AOH - AH+，【方法与步骤】1. 取家兔1只，称重，乌拉坦全麻，背位固定于手术台上，在一侧腹股沟部搏动处剪毛。（固定：背位固定，要绑紧。）方法与步骤 方法与步骤2. 纵切皮肤34cm，分离股静脉，在静脉下穿双线，结扎远心端，作静脉切口，插入与注射器相连的静脉托管（内充满肝素化盐水）,结扎固定，检查取血是否顺利（取血1.5ml ）。（静脉血：紫红色，色深；注意钝性分离；肌肉分层时，若兔子挣扎，就滴一些普鲁卡因；静脉托管管口可以稍微剪斜一点，但是不能太尖，以免插破血管；结扎固定时一定要绑紧，防止兔子挣扎，管子脱离；向插管中打一些肝素化生理盐水，检查是否插入，再回

8、抽血，检查取血是否顺利，同时观测一下取一次血需要的多长时间。）静脉插管：静脉于远心端结扎后静脉塌陷呈细线状，较难静脉插管：静脉于远心端结扎后静脉塌陷呈细线状，较难插管，因此可试用静脉充盈插管法。即：在股静脉近心端插管，因此可试用静脉充盈插管法。即：在股静脉近心端用血管夹夹住（也可用线提起），活动肢体使股静脉充盈，用血管夹夹住（也可用线提起），活动肢体使股静脉充盈，剪口插入套针。剪口插入套针。3. 静脉注射20mg/kg BSP，分别于注射后第2，4，6，10，15，20min由股静脉取血1.52ml置于盛有草酸钾试管中，轻轻摇动试管，使草酸钾均匀地溶解于血液中。（注意：20mg/kg BSP单

9、位换算；每次取血量固定，记录开始取血和结束取血时间点，t值取中间点。）4. 每次取血样时，先舍去0.2ml左右血液，取后，补充等量生理盐水。（每次抽完血一定要尽快补充肝素化生理盐水，避免血液凝固堵塞插管和针头。）方法与步骤5.将各试管离心（3000rpm,5min），分别取血浆0.5ml，转移入另一试管中，加入0.01N HCl溶液5.5ml，混匀后在722分光光度计于波长540nm处测吸光度。（注意：试管标号；离心时要配平。）6. 测定后，加入2.5N NaOH溶液1d，混匀后再进行吸光度测定，计算吸光度差值，利用差值从标准曲线上求出相应的血药浓度，利用lnct作直线回归，求得斜率和截矩，利

10、用前面公式求出相应的药动学参数。方法与步骤 溴磺酞钠在碱性溶液中呈红色（BSP +本底 ）,酸性溶液中无色（本底）。 的计算可以排除血浆本体的干扰。7. 标准曲线绘制：以蒸馏水配制浓度为200g/ml的BSP标准溶液，取7支试管，以1，2，37编号，按表1进行操作。 利用吸光度差值对相应的BSP浓度作图即得标准曲线。 BSP标准曲线 C=-0.255+16.655A（ug/ml） = AOH- - AH+ 方法与步骤方法与步骤表1、 BSP标准曲线绘制【注意事项】实验过程中，动作要轻，注意采血器用生理盐水吸洗，应尽量避免样品溶血，影响测定。每次取血样时，应先取0.2ml 血弃去，采血过程尽可能

11、轻快，确保血样时间准确。样品离心前必须平衡，转速适中。【方法评价】股静脉取血较其他途径如耳缘静脉取血有迅速、方便且不易溶血等优点。此法仅是一粗略估算药动学参数的方法。实验内容Methods1. a rabbit weigh-fix-anesthesia with urethane2.Shear the hair in the groin on one side where throbbing can be seen, subdermal 3.Cut the skin 34cm - Separate the femoral vein - insert a venous cannula - fix

12、 it -make sure blood can be taken smoothly. 4.Blood samples(1.5ml) are taken from femoral vein at 2，4，6，10，15，20min following iv 20mg/kg of BSP. The blood samples-into the tubes containing K2C2O4. 5 Every time before taking blood sample, give up about 0.2ml blood at first, and after sampling blood,

13、inject the same capacity of Saline to rabbit to make up the blood for loss.6.Separate the plasma by centrifuging at 3000rpm for 5min.7.Transfer 0.5ml plasma from each sample to various dry tubes.8.Add 5.5ml of 0.01N HCl to each tube and shake it thoroughly.9.The optical densities AH+ are measured with colormeter (540nm). Distilled water serves as a blank.10.After obtained the optical densities AH+，add one drop o