乙肝五项操作规程

1、昆仑泌尿外科医院检验科 免疫室作业指导书文件编号；SZKL-MY-05版本/修订号；1/0主题内容乙肝五项检测（乳胶法）操作规程生效日期：20150101页码：第1页共4页乙肝五项（乳胶法）操作规程1. 检测目的乙型肝炎病毒标志物（HBsAg HBsAb HBeAg HBeAb HBcAb检测。2. 测定原理HBsAg检测采用双抗体夹心法原理，试剂含有被事先固定于膜上测试区（T区）的抗体。检测时，标本滴入试剂加样处，标本与预包被的乳胶颗粒（即标记物）结合的 HBsAb （即标 记抗体）反应，该结合物随之在毛细效应下向上层析。如是阳性，乳胶抗体（标记抗体）在 层析过程中先与标本中的HBsAg结合

2、，随后结合物会被固定在 T区膜上的HBsAb甫获，形成 HBsAt标记抗体-HBsAg-HBsAb复合物，从而在T区形成一条红杠。如为阴性，则 T区没有红 杠。HBsAb检测采用双抗原夹心法原理，试剂含有事先固定于膜上测试区（T区）的HBsAg检测时，标本滴入试剂加样处，标本与预包被的乳胶颗粒结合的HBsAg反应（即标记抗原）反应，该结合物随之在毛细效应下向上层析。如是阳性，乳胶抗原（标记抗原）在层析过程 中先与标本中的HBsAb结合，随后结合物会被固定在 T区膜上的HBsAg捕获，形成HBsAg标 记抗原-HBsAb-HBsAg复合物，从而在T区形成一条红杠。如为阴性，则 T区没有红杠。HB

3、eAg检测采用双抗体夹心法原理。试剂含有事先固定于膜上测试区（T区）的HBeAb检测时，标本滴入试剂加样处，标本与预包被的乳胶颗粒结合的HBeAb反应（即标记抗体）反应，该结合物随之在毛细效应下向上层析。如是阳性，乳胶抗体（标记抗体）在层析过程 中先与标本中的HBeAg!吉合，随后结合物会被固定在 T区膜上的HBeAb捕获，形成HBeAb标 记抗原-HBeAg-HBeAb复合物，从而在T区形成一条红杠。如为阴性，则 T区没有红杠。HBeAg、HBcAb采用竞争抑制法原理，试剂含有事先固定于膜上测试区（ T区）的抗体。 检测时，标本滴入试剂加样处，随之标本在毛细效应下向上层析。如标本中含有相应的

4、抗体， 则同膜上测试区（T）的单克隆抗体竞争，与预包被在乳胶颗粒上的相应抗原反应。如标本中没有相应的抗体，则预包被在乳胶颗粒上的相应抗原与膜上测试区 （T）的单克隆抗体全部结合。 阳性标本，测试区（T）将没有红色条带；阴性标本，测试区（T）会出现明显的红色条带。昆仑泌尿外科医院检验科 免疫室作业指导书文件编号；SZKL-MY-05版本/修订号；1/0主题内容乙肝五项检测（乳胶法）操作规程生效日期：20150101 页码：第2页共4页3.标本米集样本采集后应尽快分离血清或血浆以避免溶血。检测进应尽量使用新鲜的样本。样本若 不能及时送检，可在2-8 C冷藏3天。长期保存需冷冻于-20 C,忌反复冻

5、融。发臭、溶血等 异常样本请勿使用。4. 试剂艾博生物医药有限公司5. 操作步骤5.1使用前将试剂板和血清/血浆标本恢复至室温（2030%）。从原包装铝箔袋中取出试剂盒（注意：在扣开铝箔前应先恢复至室温），在1小时内应尽快地使用。5.2将试剂盒置于干净平坦的台面上，用吸管吸取血清/血浆标本，逐滴垂直加入于试剂板 的五个加样子L中（每孔2-3滴）。5.3加样后立刻开始计时，等待红色条带的出现，在15分钟时读取测试结果。在20分钟后读 取的结果无效。6. 结果判定由于前三个项目HBsAg、HBsAb HBeAg使用双抗体（原）夹心法原理，后两个项日HBeAb HbcAb使用竞争法原理。因此前一：个

6、项日与后两个项目判读方法是不同的，请注意区别。6.1. HBsAg、HBsAb HbeAg6.1.1阳性（+）:两条红色条带出现。一条于测试区（T）内，另一条位于质控区（C）。阳性结 果表明：标本中含有待测物质。6.1.2阴性（-）:质控区（c）出现一条红色条带，在测试区（T）内无红色条带出现。阴性结果表明：标本中检测不出待测物质。6.1.3无效：质控区（c）未出现红色条带，表明不正确的操作过程或试剂盒已经变质损坏。在 此情况下，应再次仔细阅读说明书，并用新的试剂盒重新测试。如果问题仍然存在，应立即 停止使用此批号产品，并与当地供应商联系。6.1.4注意：在进行HBsAg HBsAb HbeA

7、g测试时，测试区（T）内的红色条带可显现出颜色 深浅 的现象。只要在规定的观察时间内，不论该条带颜色深浅，即使只有非常弱的色带也应昆仑泌尿外科医院检验科 免疫室作业指导书文件编号；SZKL-MY-05版本/修订号；1/0主题内容乙肝五项检测（乳胶法）操作规程生效日期：20150101 页码：第3页共4页该判为阳性结果。6.2. HBeAb、HBcAb621阳性（+）:仅质控区（C）出现一条红色条带.在测试区（T）内无红色条带出现。阳性结果 表明：标本中含有待测物质。6.2.2弱阳性（+）:质控区（C）出现一条红色条带，在测试区（T）内有非常弱的红色条带出现。 阳性结果表明：标本中含有待测物质。

8、6.2.3阴性（-）:两条红色条带出现。一条于测试区（T）内，另一条位于质控区（C）。阴性结果 表明：标本中检测不出待测物质。6.2.4无效：质控区（C）未出现红色条带，表明不正确的操作过程或试剂盒已经变质损坏。在 此情况下，应重新测试。如果问题仍然存在，应立即停止使用此批号产品，并与当地供应商 联系。7. 质量控制7.1请控制判读时间，测试结果应在测定开始后20分钟左右读取，30分钟后读判定无效。7.2质控区内（C区）一条红色条带的出现是试验结果可靠的前提。质控内 （C）所显现的红色条 带是判定标本是否足够，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。8. 注意事项8.1乳胶法乙肝五项

9、检测试剂板（血清/血浆）只是定性的筛选乙肝病毒血清标志物的存在， 不能确定血样中病毒的含量。8.2由于在技术上和操作上可能出现的失误，同时也由于标本中存在的干扰物质，检测结果 可能有错误。对可疑结果应作相应的进一步检测。8.生物安全防护8.1在检测前，所有标本均应视为“阳性”标本即生物危险品。8.2如操作中不慎洒落血液，要及时对污染台面消毒处理。8.3操作前一定要做好自身防护（穿白大衣、带口罩、白帽、胶皮手套）昆仑泌尿外科医院检验科 免疫室作业指导书文件编号；SZKL-MY-05版本/修订号；1/0主题内容乙肝五项检测（乳胶法）操作规程生效日期：20150101页码：第4页共4页8.4 HBV

10、对低温、干燥、紫外线、70%乙醇均有耐受性。煮沸100 C 10分钟、高压蒸汽灭菌121 T 15分钟或加热160C 2小时均可灭活HBV 510g/L次氯酸钠30分钟，1: 4000福尔 马林37C 72小时，0.5 %过氧乙酸15分钟均可破坏其传染性。9. 临床意义9.1 HBsAg阳性：血清HBsAg阳性，表示受检者处于 HBV的感染状态。HBsAg也可从许多 乙肝检验对象体液和分泌物中测出，如唾液、精液、乳汁、阴道分泌物等。9.2 HBsAb阳性：多见于乙型肝炎处于恢复期或既往曾感染过HBV现在已恢复，而且对HBV有一定的免疫力；同时，HBsAb阳性是对接种乙肝疫苗后产生效果，即接种免

11、疫成功的指标。9.3 HBeAg阳性：见于HBV感染的早期，表示血液中含有较多的病毒颗粒，提示肝细胞有进 行性损害和高度传染性；乙型肝炎加重之前，HBeAg即有升高，有助于预测肝炎病情，HBeAg 持续阳性，易转为慢性乙型肝炎；HBeAg和HBsAg均为阳性的孕妇，可以将乙型肝炎传播病 毒给新生儿，其感染的阳性率为 70%90%。9.4 HBeAb阳性：多见于HBeAg转阴的检验对象，意味着 HBV部分被清除或抑制，病毒复制 减少，传染性降低；部分慢性乙型肝炎、肝硬化、肝癌检验对象可检出HBeAb在HBsAgffi HBsAb 阴性时，如能检出HBeAh和HBeAb,也能确诊为乙型肝炎近期感染。9.5 HBeAb阳性：说明既往感染过乙肝病毒。它是感染病毒后最早呈阳性,也是最晚转阴性的一项，而且有些人一辈子都是阳性。附：HBcAb-IgG阳性：高滴度表示正在感染 HBV低滴度则是既往感染过 HBV的指标，具有流行病学的意义。HB