DNA的粗提取和鉴定

1、专题专题5 DNA5 DNA和蛋白质技术和蛋白质技术陇县第二高级中学陇县第二高级中学 郑杜娟郑杜娟人教版生物选修一人教版生物选修一基础知识基础知识染色体成分染色体成分蛋白质蛋白质DNA1 1）不同浓度）不同浓度NaClNaCl中中DNADNA溶解度不同。溶解度不同。 2 2）DNADNA与其他细胞成分在酒精中溶解度不同，与其他细胞成分在酒精中溶解度不同，DNADNA不溶于酒精，细不溶于酒精，细胞中某些蛋白质则溶于酒精。胞中某些蛋白质则溶于酒精。3 3）DNADNA和蛋白质对酶耐受性不同：酶的专一性和蛋白质对酶耐受性不同：酶的专一性蛋白酶水解蛋蛋白酶水解蛋白质。但是对白质。但是对DNADNA没有

2、影响。没有影响。4 4）DNADNA和蛋白质对高温耐受性不同：蛋白质、和蛋白质对高温耐受性不同：蛋白质、DNADNA热稳定性不同。热稳定性不同。大多数蛋白质不能忍受大多数蛋白质不能忍受60608080高温，而高温，而DNADNA在在8080以上才会变性。以上才会变性。5 5）DNADNA和蛋白质对洗涤剂耐受性不同：洗涤剂能够瓦解细胞膜，和蛋白质对洗涤剂耐受性不同：洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对但对DNADNA没有影响。没有影响。DNA的粗提取实验原理的粗提取实验原理实验案例实验案例1 1）不同浓度）不同浓度NaClNaCl中中DNADNA溶解度不同。溶解度不同。 2 2）DNADNA与其他细胞成分

3、在酒精中溶解度不同，与其他细胞成分在酒精中溶解度不同，DNADNA不溶于酒精，细胞中某些蛋白质则溶于酒精。不溶于酒精，细胞中某些蛋白质则溶于酒精。 鸡血红细胞、白细胞中都有细胞核，鸡血红细胞、白细胞中都有细胞核，含大量含大量的的DNADNA, ,既经济又易取既经济又易取 。6 1).1).制鸡血细胞液制鸡血细胞液0.1g/mL柠檬酸钠柠檬酸钠100mL活活鸡鲜血鸡鲜血180mL500mL烧杯中，玻棒烧杯中，玻棒搅拌搅拌，离心或静置沉淀。离心或静置沉淀。离心或静置后去掉上清液离心或静置后去掉上清液血浆血浆血细胞血细胞提取细胞核物质：提取细胞核物质：溶解核内溶解核内DNA：析出析出DNA：DNA黏

4、稠物再溶解：黏稠物再溶解：提取较纯净的提取较纯净的DNA：DNA的鉴定：的鉴定：滤取滤取DNA黏稠物：黏稠物：过滤含过滤含DNA的的NaClNaCl溶液溶液：2)实验方法步骤：实验方法步骤： 在上述溶液中缓缓在上述溶液中缓缓加入蒸馏水，加入蒸馏水，并沿一个方向并沿一个方向轻轻搅拌轻轻搅拌，出现丝状物；出现丝状物；当丝状物不在增加时，停止加水当丝状物不在增加时，停止加水（此时（此时NaCl溶液的浓度相当于溶液的浓度相当于0.14mol/L）。）。 用多层纱布用多层纱布过滤过滤，含，含DNA的粘稠物留在纱布上。的粘稠物留在纱布上。 用两层纱布过滤。用两层纱布过滤。滤液中含有滤液中含有DNA。所得的

5、滤液体积分数为所得的滤液体积分数为95%的冷却酒精的冷却酒精50mL，用玻棒沿，用玻棒沿一个方向一个方向轻缓搅拌轻缓搅拌，溶液中（，溶液中（析出析出）出现乳白色丝状物，用）出现乳白色丝状物，用玻棒玻棒将将丝状物丝状物卷起。卷起。利用细胞吸水破裂，细胞核内物质释放出来，用利用细胞吸水破裂，细胞核内物质释放出来，用纱布纱布过滤取其滤液。过滤取其滤液。在滤液中加在滤液中加2mol/Lmol/L的的NaClNaCl溶液并搅拌，使染色质中溶液并搅拌，使染色质中DNADNA与蛋白质分离，与蛋白质分离，DNADNA充分溶解，充分溶解，在烧杯中用在烧杯中用2mol/Lmol/L的的NaClNaCl溶液溶解溶液

6、溶解DNADNA。DNADNA与与二苯胺试剂二苯胺试剂反应使溶液呈反应使溶液呈现蓝色现蓝色。自变量你能采用其他方法对你能采用其他方法对DNADNA进行鉴定吗？进行鉴定吗？注意：鉴定所用的试剂是注意：鉴定所用的试剂是二苯胺二苯胺或或甲基绿甲基绿。用用二苯胺二苯胺须加热。用须加热。用甲基绿不用水浴甲基绿不用水浴加热。加热。整个实验中整个实验中加入加入“两次蒸馏水，两次蒸馏水，三次三次NaClNaCl溶液溶液，一次酒精，一次酒精”酒精最好用酒精最好用95%95%的冷酒精的冷酒精; ;加蒸馏水或加入酒精用玻棒搅拌时加蒸馏水或加入酒精用玻棒搅拌时, ,动作要动作要轻缓且朝一个方向轻缓且朝一个方向。保证保

7、证DNADNA分子的完整性。分子的完整性。小结：DNA的粗提取与鉴定的粗提取与鉴定实验原理实验原理DNA在不同浓度在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同溶液中溶解度不同DNA与其他细胞成分在酒精中溶解度不同与其他细胞成分在酒精中溶解度不同DNA和蛋白质对酶、高温和洗涤剂耐受性和蛋白质对酶、高温和洗涤剂耐受性不同不同DNA与二苯胺呈现蓝色反应与二苯胺呈现蓝色反应DNA粗提取粗提取选择适宜材料选择适宜材料破碎细胞破碎细胞DNA的溶解和析出的溶解和析出DNA的纯化的纯化鉴定鉴定DNA与二苯胺混合，沸水浴，呈现蓝色反应与二苯胺混合，沸水浴，呈现蓝色反应练习练习 1 1下列图示中能反映下列图示中能反映DNA

8、DNA溶解度与溶解度与NaCINaCI溶液浓溶液浓度之间关系的是（度之间关系的是（ ）2 2在在DNADNA的粗提取和鉴定的实验中，提取鸡血细胞的核的粗提取和鉴定的实验中，提取鸡血细胞的核物质和析出含物质和析出含DNADNA的粘稠物的操作过程中均用到蒸馏水，的粘稠物的操作过程中均用到蒸馏水，其作用在于其作用在于 ( ) ( ) A A前者用来溶解血细胞，后者用来溶解前者用来溶解血细胞，后者用来溶解DNADNAB B前者使血细胞吸水破裂，后者用来稀释前者使血细胞吸水破裂，后者用来稀释NaClNaCl溶液溶液C C前者用来分离细胞核与细胞质，后者用来提取前者用来分离细胞核与细胞质，后者用来提取DNADNAD D前者使前者使DNADNA从核中分离出来，后者使从核中分离出来，后者使DNADNA析出析出CB3 3、下图为、下图为“DNADNA粗提取和鉴定粗提取和鉴定”实验的相关操作。这些操作目的正实验的相关操作。这些操作目的正确的是确的是（）A.A.是洗涤血细胞，去除血细胞表面的杂质是洗涤血细胞，去除血细胞表面的杂质B.B.是溶解是溶解DNADNA，去除不溶于酒精的杂质，去除不溶于酒精的杂质C.C.是溶解是溶解DNADNA，去除不溶于，去除不溶于2 mol/L NaCl2 mol/L NaCl溶液的杂质