食品中有毒有害物质的分析VIP

1、2021年10月11日choose view, header and footer to enter text here1食品中有毒有害物质的分析食品中有毒有害物质的分析气相色谱气相色谱/质谱联用技术和液相色谱的应用质谱联用技术和液相色谱的应用1，饲料中-兴奋剂（盐酸克仑特罗）的分析2. ndma （n-亚硝胺）的测定3. 海产品中的药物残留的分析4. 酱油中的氯丙醇的分析2021年10月11日choose view, header and footer to enter text here2gc/msd 或 hplc-uv法饲料中盐酸克仑特罗(clenbuterol)的测定2021年10月1

2、1日choose view, header and footer to enter text here3盐酸克仑特罗(clenbuterol) 盐酸克仑特罗是一种肾上腺素兴奋剂，主要用于防治人，畜支气管哮喘和支气管痙挛，治疗剂量较低。 在饲料中添加盐酸克仑特罗具有营养再分配作用，提高饲料报酬，提高瘦肉率的效果。 盐酸克仑特罗在肌肉特别是在内脏中会有高浓度的残留，对人与动物的肝，肾及神经系统产生危害。 欧盟最早颁布法规禁止其作为饲料添加剂使用，美国和加拿大也禁用，我国农业部亦发文作出同样规定。2021年10月11日choose view, header and footer to enter t

3、ext here4盐酸克仑特罗chohch2nhc(ch3)3 hclnh2clcl白色结晶粉末，可从sigma 公司购买，可溶于水。2021年10月11日choose view, header and footer to enter text here5gc/msd 方法样品中的盐酸克仑特罗经提取，净化，衍生化，采用agilent5973n gc/msd scan 方式进行测定，外标法定量。方法回收率为92%-99%， 检出限为低于0.2 ppm。2021年10月11日choose view, header and footer to enter text here6样品处理样品处理提取提取

4、：饲料样品10克加50ml 0.01mol/l hcl溶液超声清洗器萃取30min,离心10 min上清液如有必要，重复一次2021年10月11日choose view, header and footer to enter text here7样品处理样品处理净化净化上清液加2.0 ml 5 mol/l naoh溶液，加入10 ml 氯仿,振荡萃取。60水浴中真空蒸发氮气吹干重复二次衍生化加 1.0 ml氯仿溶解，再加入 0.1ml乙酸酐衍生试剂。氮气吹干，加0.5 ml 氯仿溶解2021年10月11日choose view, header and footer to enter text

5、here8色谱与质谱条件色谱与质谱条件色谱条件色谱条件：hp5ms 30m x 0.25mm x 0.25um 进样口：250，不分流，进样量2ul， 柱温：120（3min）20/min 220 （10 min) 质谱条件：质谱条件：ei源，接口温度源，接口温度280 ，质量扫描范围，质量扫描范围50500amu 溶剂延迟：溶剂延迟：3min。2021年10月11日choose view, header and footer to enter text here9clenbuterol 的标准质谱图的标准质谱图2021年10月11日choose view, header and footer

6、 to enter text here10hplc 法法采用反相高效液相色谱法用水相和有机相二次提取饲料中的盐酸克仑特罗，可减少饲料中杂质的干扰。uv检测器，c18柱回收率在8595，检出限 提高选择性和灵敏度提高选择性和灵敏度20 attograms / ul of octafluoronaphthaleneacquired using lvi with ecni ms on 5973(44,000 molecules / ul )33332021年10月11日choose view, header and footer to enter text here34pci+sim +lvi pc

7、i+sim +lvi 技术分析技术分析ndmandma20 20 fgfg/ /ulul200 200 fgfg/ /ululpci-nhpci-nh3 3-sim chromatograms -sim chromatograms of 50of 50 ul ul injections of ndma injections of ndma standards in chstandards in ch2 2clcl2 2 . . applying a concentration & recovery applying a concentration & recovery factor of 50

8、0,factor of 500, 200200 fg fg/ /ulul = 0.4ng/l (0.4 = 0.4ng/l (0.4 ppt ppt) ) 2020 fg fg/ /ulul = 0.04ng/l (40 = 0.04ng/l (40 ppq ppq) )34342021年10月11日choose view, header and footer to enter text here35ndmandma分析的线性及重现性分析的线性及重现性ndma quantitation curve from 20 fg/ul to 4000 fg/ulr2 =0.999concentratio

9、nrsd ratio 75/92 rsd response (area)202.9%2.4%402.2%3.2%2000.7%0.8%20000.7%1.7%40000.3%0.9%reproducibility in 75/92 m/z ratio and response (n=5)reproducibility in 75/92 m/z ratio and response (n=5)for concentrations of ndma from 20 to 4000 for concentrations of ndma from 20 to 4000 fgfg/ /ulul353520

10、21年10月11日choose view, header and footer to enter text here36结论结论 apex apex prosep preseparationprosep preseparation inlet inlet behaves as a chromatographic zone inlet systembehaves as a chromatographic zone inlet system performs separations in performs separations in arge arge olume olume nlet mode

11、snlet modes increased analytical integrity, lowered column and detector maintenance, etc.increased analytical integrity, lowered column and detector maintenance, etc. work with authentic samples and a wide variety of matrices work with authentic samples and a wide variety of matrices has shown the h

12、as shown the prosepprosep to be very reproducible and robust. to be very reproducible and robust. injection (1 to 125 injection (1 to 125 ulul) is rapid so sample throughput is high. ) is rapid so sample throughput is high. 36362021年10月11日choose view, header and footer to enter text here37水产品中土霉素、四环

13、素、金霉素残留量水产品中土霉素、四环素、金霉素残留量的测定方法的测定方法本方法为hplc方法，最低检出浓度为0.05mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg。原理：原理： 样品经提取，spe纯化，微孔膜过滤，直接进样，用反相色谱分离，uv检测，外表法定量。出峰顺序为土霉素、四环素、金霉素。2021年10月11日choose view, header and footer to enter text here38样品预处理样品预处理，称取称取5.00g肉样于肉样于50ml离心管中离心管中加入5高氯酸溶液20ml，匀浆10分钟，振荡提取10分钟，以4000r/min离心10分钟，取上清液用

14、0.45um滤膜过滤,在离心管残渣中再加入5%高氯酸溶液10ml,重复操作一次,合并.上清液上清液2021年10月11日choose view, header and footer to enter text here39上清液上清液过sep-c8柱(10ml甲醇、10ml 15edta2na溶液、20ml蒸馏水活化）过30ml蒸馏水洗去杂质，10ml甲醇洗脱洗脱液洗脱液40水浴中氮气吹，浓缩至1ml0.45um滤膜过滤样品溶液样品溶液2021年10月11日choose view, header and footer to enter text here40分析条件分析条件仪器条件仪器条件：h

15、p1100 uv 检测器色谱条件：色谱条件：柱zobrbax sb18，4.6mm x 250mm,ods-c18(hp) 检测波长:355nm 柱温:37 流速:0.8ml/min 进样量: 30ul 流动相: 乙晴/0.01m/磷酸二氢钠溶液(用磷酸调节ph2.5) 26:74 (v/v)2021年10月11日choose view, header and footer to enter text here41酸水解植物蛋白调味液中三氯丙醇的测定酸水解植物蛋白调味液中三氯丙醇的测定1. 三氯丙醇问题的提出三氯丙醇问题的提出: - 1988年年velisek等在酱油中发现一种有机成分等在酱油

16、中发现一种有机成分-氯丙醇以来氯丙醇以来, 引起了食品学界的高度重视引起了食品学界的高度重视. - 1991年年collier等对氯丙醇的形成机理做了进一步的研究等对氯丙醇的形成机理做了进一步的研究; - 1993年世界卫生组织对氯丙醇的毒性提出了警告年世界卫生组织对氯丙醇的毒性提出了警告; - 1995年欧共体委员会食品科学分年欧共体委员会食品科学分(ecscff)对氯丙醇的毒理作了对氯丙醇的毒理作了 评价评价,并指出氯丙醇作为一种致癌物并指出氯丙醇作为一种致癌物,其最低阀值应为不检出为宜其最低阀值应为不检出为宜.2021年10月11日choose view, header and foot

17、er to enter text here422.氯丙醇的来源氯丙醇的来源一一.脂质脂质: 蛋白质水解可用酸水解和碱水解,但是碱水解会引起精氨酸、胱氨酸及部分赖氨酸被破坏，因此工业上是采取浓盐酸水解植物蛋白质或动物蛋白质的方法来生产的。在原料植物/动物蛋白质中有脂质,主要有三酰甘油酯类和甘油磷酯类,而这些脂质在浓盐酸中会发生水解反应,产生氯丙醇.二二.某些环氧树脂某些环氧树脂: 以表氯丙醇为单体制成的环氧树脂已广泛地应用在涂料,粘结剂及乙烯树脂的稳定剂,环氧树脂是目前食品工业中的主要包装材料之一,而表氯丙醇可水解为3-氯丙醇.三三.其他来源其他来源: 袋泡茶的包装袋;以含氯的凝聚剂作为水的净化

18、剂;以3-氯-1,2-环丙烷来加工的变性淀粉.酸水解植物蛋白调味液中三氯丙醇的测定酸水解植物蛋白调味液中三氯丙醇的测定2021年10月11日choose view, header and footer to enter text here43 国别 资料来源 1,3-二氯-2-丙醇 2,3-二氯-1-丙醇 2-氯-1,3-丙醇 3-氯1,2 丙醇 德国标准 sks 0.05ppm 0.1 ppm 未提及 0.05ppm美国食品 fcc 0.05ppm 未提及 未提及 1ppm用化学品法规(fcc) 英国食品 fac 0.05ppm 未提及 未提及 0.01ppm 顾问委员会fac瑞士 0.05

19、ppm 未提及 未提及 10ppm 中国 未提及 未提及 未提及 1ppm* 部分国家对部分国家对3-氯丙醇的限量氯丙醇的限量2021年10月11日choose view, header and footer to enter text here44酱油中酱油中3-氯丙醇的分析方法氯丙醇的分析方法 酱油是微生物发酵产物，成分很复杂，国外普遍采用毛细管色谱法进行测定，即使这样也会因为分离效果不好而影响分析结果的可靠性。通过研究发现，将样品用苯基硼酸衍生化处理，转化为易挥发的物质，正己烷抽提后，用气相色谱-质谱联用仪的选择离子监测方法测定，提高了分辨率，且干扰少，灵敏度高，操作简单，结果准确可靠。

20、2021年10月11日choose view, header and footer to enter text here45实验部分实验部分1.试剂试剂衍生化试剂配制：称取10g苯基硼酸，溶于38ml丙酮和2ml蒸馏水的混合液中。标准试剂配制：称取25mg 3-氯-1，2-丙二醇，用200g/l nacl溶液定容至250ml，得到100mg/l的标准溶液。然后分别移取0.1ml，1ml，10ml至100ml容量瓶中，用200g/l nacl溶液定容至刻度，即得0.1，1，10mg/l标准溶液。 苯基硼酸，丙酮，正己烷，氯化钠均为分析纯。2021年10月11日choose view, heade

21、r and footer to enter text here46 取样品或标准溶液5.0ml 置于10ml 带塞试管中，加入1.0ml 衍生化试剂，摇匀后，置于90恒温箱中反应20 min，停止加热，冷却后加入3.0ml 正己烷，强力振荡1min，离心，取上层清夜进行gc/ms分析。2样品衍生化处理样品衍生化处理2021年10月11日choose view, header and footer to enter text here47 气相色谱：hp6890气相色谱，hp-1的30m250m0.1m石英毛细管柱，载气为高纯氦气，柱温100，升温速率15/min升至250，进样口温度250，柱

22、前压50kpa。 质谱：hp5973 gc/ms气相色谱-质谱联用仪，ei离子源，电子能量70 ev，离子源温度230，四极杆温度150，接口温度280，电子倍增器电压2100 v，检测方式sim监测离子 m/z 147。气相色谱气相色谱-质谱测定条质谱测定条件件2021年10月11日choose view, header and footer to enter text here48 3-cpd产生机理：在酸水解法生产酱油的过程中，植物蛋白酸水解时伴随发生脂肪水解而产生丙三醇，丙三醇在盐酸作用下继续反应形成3-氯-1，2-丙二醇 植物蛋白 3.结果与讨论结果与讨论hclch2chch2oho

23、hohhclohoh2chch2chcl2021年10月11日choose view, header and footer to enter text here49按上述实验条件分别进行标准溶液及样品溶液分析，以外标法计算3-cpd含量。3-氯-1，2-丙二醇苯基硼酸衍生物的质谱图见图1。其基峰为m/z 147。我们选择m/z 147进行sim法，可获得满意的分离效果，其色谱总离子流图见图，保留时间为3.31min 的峰即为3-氯-1，2-丙二醇苯基硼酸衍生物。我们分析了几种市面上的国产酱油，测定结果见表。可以看出，大部分酱油的3-cpd含量大大高于1.010-6，严重影响人体健康。样品名称

24、3-cpd含量(/10-6)样品名称 3-cpd含量(/10-6) 生抽a 0.4 老抽a 0.5 生抽b 82.5 老抽b 125.8 生抽c 220.7 老抽c 158.52021年10月11日choose view, header and footer to enter text here50405060708090100110120130140150160170180190200210020000400006000080000100000120000140000160000180000200000220000240000260000m/z-abundancescan 1156 (3.255 min): 071718.d (-)147911041967751431176313115913