血红蛋白电泳报告单

1、血红蛋白电泳报告单 ：血红蛋白 电泳 报告单 地贫筛查结果怎么看 贫血看血常规哪个项目 平均血红蛋白浓度偏低 篇一：血红蛋白电泳 血红蛋白电泳检查（电泳法） 1. 原理 血红蛋白是由两对多肽链组成的复杂分子。每一条链含有血红素和络合铁原子的卜啉。所有血红蛋白的血红素部分都是相同的。所测定的血红蛋白的蛋白部分称之为珠蛋白。正常人血红蛋白多肽链包括、和。血红蛋白的结构、分子特性取决于形成其肽链的氨基酸顺序和性状。氨基酸不同可形成不同的血红蛋白，其表面电荷不同，在电场中的泳动率不同。本实验在碱性（ph=8.60）条件下，以琼脂糖凝胶电泳的方法进行，对红细胞洗涤后造成溶血，电泳分离血红蛋白后以氨基黑染

2、色。多余的染色液用酸性液体洗去。待琼脂糖凝胶板干燥后，肉眼可直接判别有无电泳条带异常。运用光密度扫描仪检测准确定量分析电泳条带异常情况。血红蛋白异常有二种类型：血红蛋白性质或结构的异常称之为血红蛋白病。血红蛋白中的一条链合成减少引起血红蛋白性质异常，称之为地中海贫血。 2. 标本采集 2.1 标本采集前病人准备：受检者应空腹。 2.2 标本种类：抗凝血 2.3 标本要求：抗凝剂选用edta，柠檬酸或肝素均可，避免碘乙酸。常规静脉采血1.8ml，加入含有109mmol/l枸橼酸钠溶液0.2ml的干燥。清洁试管中，充分混匀。 4. 标本储存：储存于2-8冰箱中，5天。 5. 标本运输：储存于2-8

3、状态下的冰壶或泡沫箱密封运输。 6. 标本拒收标准：细菌污染、溶血或脂血标本不能作测定。 7. 试剂 7.1 试剂名称：血红蛋白电泳检查试剂 7.2 试剂生产厂家：法国sebia公司 7.3 包装规格：150tests 7.4 试剂盒组成 琼脂糖凝胶 10块 溶血素 1瓶 缓冲液条带 10包2条 薄滤纸 110张 氨基黑（浓缩液）1瓶100ml点样模具滤纸 10条1盒7.5 试剂储存条件及有效期：贮存于室温（1530）或冰箱（28），不能冷冻。有效期两年。 8. 仪器设备 8.1 仪器名称：sebia电泳仪 8.2 仪器厂家：法国sebia公司 8.3 仪器型号：hydrasys 9. 操作步

4、骤 9.1 血红蛋白液制作：抗凝血离心，5000rpm，5分钟，去掉血浆，用10倍体积的生理盐水洗涤红细胞3次，若红细胞体积小于10ul，需特别小心。取10ul红细胞加入130ul溶血液造成溶血。震荡混匀10秒钟，室温下培育5分钟待测。 9.2 启动电泳仪 9.3 将加样器放在一平板上，有数字的一端向上。各加样孔加入10ul溶血的样品，2分钟内加样完毕。将加样器放入保湿盒内，齿端向上（转运时用塑料齿保护架）。等待5分钟，使样品扩散至齿端。打开电泳仪盖，抬起电极和加样器支架。 9.4 使用hydragel 15 hemoglobince时选择仪器的“hbtotal”程序（位于链盘左侧）。 9.5

5、 从包装袋内取出缓冲条，拿出末端的塑料片，将缓冲条两端塑料片固定在电极支架背侧的钉上，塑料片应紧贴支架。 9.6 取出凝胶板。将薄的滤纸轻轻吸去凝胶板表面的多余液体，然后立即丢弃滤纸。在电泳仪温度控制板表面的边线内加200ul蒸馏水或去离子水。凝胶面朝上，放置凝胶板，边缘对齐边线。略略将凝胶弯曲，然后放平，使水均匀分布在凝胶板下面而不含气泡。 9.7 降低支架，使缓冲条不接触到凝胶板。 9.8 从保温盒里取出加样器。取时拿保护框。折断加样器齿端保护框。将加样器放在4号位置。 9.9 关上电泳仪盖子，按下键盘左侧的绿色箭头“start”键，电泳开始。 9.10 凝胶染色扫描 9.10.1打开盖子

6、 9.10.2取出并丢弃加样器9.10.3升高两个支架，握住塑料端取出并丢弃缓冲条。 9.10.4打开凝胶托架，平放，将干燥的凝胶片放入两层间，然后关上托架。 9.10.5将凝胶支架放入染色池 9.10.6取出凝胶支架，打开盖子，取出干燥的凝胶片。 9.10.7在光密度仪的570nm处或以黄色滤光片扫描测定。使用hydrys，dvse或preference光密度仪时，使a2片段的标记置于扫描板5mm的标志处。 10. 结果判断与参考范围 扫描得到的只是每种血红蛋白条带的相对浓度值。取出胶片后，首先清洁胶片的背面。判断溶血液的浓度是否合适，主要看基质带的浓度，如基质带浓度过淡，说明溶血液的浓度太

7、淡。正常时a2浓度大约为基质带浓度的1-2倍。 半岁-成人:hba94.5,hbf2.0,hba23.5 1个月：hba 12-40,hbf 60-93,hba2 0.1-1.0 6个月：hba 86-98,hbf 0.84-10.7,hba2 0.87-2.9 脐带血：hba 4-40,hbf 30-96,hba21.0 11. 质量控制 建议测定每一批样本时都附有一控制品或含有血红蛋白a,f,c和s的血样本。 12. 临床意义 12.1 检测-地中海贫血 12.1.1轻型：hba2轻度升高，大多在4-8 12.1.2中间型：hba1a2缺如，hbf可达10 12.1.3重型：hbf：30-

8、90，hba多低于40或甚至0 12.2 检测-地中海贫血 12.2.1标准型-地中海贫血：新生儿期hbbarts可达5-15，几个月后消失。经煌焦油蓝温育后，少数红细胞内有h包涵体。血红蛋白电泳无异常发现。 12.2.2血红蛋白h病：hbh在ph8.6或8.8电泳时，向阳极方向移动，泳速快于hba;在ph6.5电泳时，仍向阳极方向移动。 12.2.3血红蛋白bart胎儿水肿综合症：hb barts占80-100，可有少量hbh。hba、a2及f均缺如。 12.3 检测血红蛋白病：引起临床注意的异常血红蛋白有四种：s，c，e和d。12.3.1血红蛋白s：在碱性缓冲条件下血红蛋白s的条带位于a和

9、a2片段之间 12.3.2血红蛋白c：在碱性缓冲条件下血红蛋白c，e和a2的条带重叠在一起。若这一片段15，应怀疑有血红蛋白c或e的异常。 12.3.3血红蛋白e：与血红蛋白c不同的是，e在酸性凝胶电泳中不与a2分离。 12.3.4血红蛋白d：在碱性缓冲条件下，血红蛋白d和s的条带重叠在一起，但d在酸性凝胶电泳中不与a2分离。 13. 操作性能：灵敏度高、特异性强、操作简便，重复性好。 14. 注意事项： 14.1 试剂贮存于室温（1530）或冰箱（28）内，不能冷冻。 14.2 不要应用溶血标本 14.3 若检测到异常血红蛋白，而又与常见的异常血红蛋白s,c,d或e不同，可使用其他方法（如球

10、蛋白链电泳）检测，或求助于有关专门实验室。 14.4 hbf小于全部血红蛋白的2-3时，扫描检测hbf（或其它一些较少见的血红蛋白）只是半定量的，结果不十分准确。 14.5 对于中度或重度贫血的病例，点样量应增大为15ul或20ul，其结果不受影响。 14.6 电泳过程中不能打开盖子。在染色脱色以及干燥过程中，仪器的一些程序处于锁定状态。 14.7 最后染色后立即扫描测定。若欲保存，可用一保护物覆盖后置于干燥、暗处，避免受热，可保存约3个月 临床意义 (1)hba2增高是轻型海洋性贫血最重要的诊断依据； (2)hbs病、链异常的不稳定hb病及某些巨幼细胞性贫血患者hba2也可增高； (3)缺铁

11、性贫血时，hba2常降低，可与轻型海洋性贫血鉴别； (4)正常人hb电泳后，一般只见两条区带(hba和hba2)，若出现新的区带，则可能为异常hb，应进一步检查。篇二：911例血红蛋白电泳结果分析 911例血红蛋白电泳结果分析 【关键词】 血红蛋白电泳；地中海贫血；基因诊断 摘 要 目的：探讨血红蛋白电泳在地中海贫血(地贫)筛查中的作用。方法：对9 315例育龄人群初筛出红细胞脆性降低者，应用法国sebia全自动电泳分析系统进行血红蛋白电泳，通过自动扫描系统分析,检测hb各组分的含量，初步分为属于地贫或地贫，再通过基因诊断确诊。结果：在9 315例育龄人群中,红细胞脆性降低者911例（9.78

12、）。进一步通过血红蛋白电泳分为地贫表型阳性727例，阳性率7.8，地贫表型阳性177例，阳性率1.9。基因诊断结果显示，地贫初筛符合率60.5，地贫初筛符合率80。结论：血红蛋白电泳能够定量检测hba、hbf、hba2含量，将地贫进行初步分类为地贫或地贫，有效地筛查出高危夫妇，为进一步进行基因诊断和遗传咨询提供基础。关键词 血红蛋白电泳；地中海贫血；基因诊断 血红蛋白电泳能够定量检测hba、hbf、hba2含量以及其他异常血红蛋白，常用于诊断地中海贫血(地贫)和血红蛋白病。地贫是我国长江以南发病率最高,危害最大的一种遗传病。据广东省流行病学调查地贫杂合子为7.3%,地贫携带者为1.83%3.3

13、6%,合计近10%，对人们的健康和优生构成了很大的威胁。现把我们自2003年3月至2006年3月利用血红蛋白电泳进行地贫筛查的情况报道如下。 1 对象与方法 1.1 对象 深圳市宝安区育龄人群，2003年3月至2006年3月共筛查9 315人。其中男4 120人，年龄21岁50岁，平均27.5岁；女5 195人，年龄21岁43岁，平均26.8岁。 1.2 方法 1.2.1 地贫初筛 采用中山医科大学遗传教研室推荐的红细胞脆性一管定量法作为筛查方法，正常参考值为溶血百分率69%。 1.2.2 血红蛋白电泳 对于初筛红细胞脆性降低者，应用全自动蛋白电泳分析系统(hydrasys，法国sebia)进

14、行hb电泳，按操作说明进行点样、电泳、染色、脱色、烘干，再通过自动扫描系统分析hb各组分含量，打印出扫描图谱。 1.2.3 正常参考值成人男女hba2为2.03.5并且没有出现异常血红蛋白带。如hba23.5，或出现异常血红蛋白带（hbh、hbbarts），判为地贫表型阳性；如hba23.5%或出现异常血红蛋白带（hbf2.0%），则判为地贫表型阳性。 1.2.4 基因诊断 采用深圳亚能公司试剂，提取外周血白细胞dna后，珠蛋白基因分析先行pcr扩增再进行琼脂糖电泳检测，可以同时检测三种最常见的缺失型（sea、3.7、4.2）。珠蛋白基因分析先行pcr扩增再结合反向点杂交，可以检测常见的17种

15、突变型。 2 结果 2.1 初筛结果 9 315例筛查对象中红细胞脆性降低者为911人，阳性率9.78。 2.2 血红蛋白电泳结果 对911例红细胞脆性降低者进行血红蛋白电泳分析，hba23.5者173例，检出hbh带11例，其中6例同时出现hbbarts带，2例同时出现hbcs带；检出hbf带67例；检出hbe带4例；检出hbg带3例。按上述判断标准，可分为地贫表型阳性727例，阳性率 7.8（727/9 315），地贫表型阳性177例，阳性率1.9（177/9 315）。结果见表1。表1 9 315例地中海贫血血红蛋白筛查结果（略）注：*其他血红蛋白病：hbe 4例，hbg 3例。 2.3

16、 基因诊断结果 在911例红细胞脆性降低者中对202例进行了基因诊断。162人进行了地贫基因诊断，检出地贫98例，初筛符合率60.5，其中5例血红蛋白h病有4例得到确诊；40人进行了地贫基因诊断，检出地贫32例，初筛符合率80。见表2。表2 地中海贫血基因诊断结果（略） 3 讨论 地贫是由于某一种或几种珠蛋白肽链合成障碍，以致珠蛋白肽链合成失平衡而导致的溶血性贫血,也称珠蛋白合成障碍性贫血，在我国南方比较常见。本文的筛查结果显示，在深圳市宝安区户籍人口育龄人群中地中海贫血初筛阳性率为9.78，其中地贫为7.8，地贫为1.9，具有较高的发病率。本文的基因诊断结果也显示，地贫初筛符合率较低，只有6

17、0.5，地贫初筛符合率达到80。主要由于其他少见的小细胞低色素性贫血如血红蛋白病、非缺失型地中海贫血、某些慢性内科疾病等，也可引起mcv的下降和红细胞脆性的降低1，表现为初筛阳性，而地贫表型阳性的判断标准中也包括血红蛋白电泳结果正常者。同时也因为本文的基因诊断只能检出缺失型地贫，不能检出突变型地贫。目前，国内外用于明确诊断地中海贫血的是聚合酶链反应（pcr）技术结合其他分子生物学手段检测、地贫基因的方法2,3，但分子生物学技术要求条件高，方法烦琐，尚不能广泛应用于各级医院特别是基层医院。因此，常用简单、方便的血液学方法进行地中海贫血的筛查，包括平均红细胞参数（mcv、mch、mchc）、红细胞

18、脆性、血红蛋白电泳等4,5。其中血红蛋白电泳在地中海贫血的筛查中起到非常重要的作用。通过血红蛋白电泳能够定量检测hba、hbf、hba2含量，可将地中海贫血进行初步分类为地贫或地贫，可以有效地筛查出高危夫妇（夫妇是同型地贫者），同时还可筛查出各种异常血红蛋白，如hbh、hbe、hbg、hbd、hbk等，有助于临床确诊，为进一步进行基因诊断和遗传咨询提供基础。由于对地中海贫血目前尚无有效的治疗方法，因此，建立有效的检测方法,在育龄人群中开展地贫筛查,预防重型地贫儿的出生，是行之有效的预防措施。 参考文献： 1bessman jd,glimer pr,frank h,et al.improved

19、classification of anemias by mcv and rdwj.am j clin pathol,1983,80:322326. 2陈萍.地中海贫血分子基础与临床研究现状j.广西医学,2004,26(5):619621.3李林海,李明.地中海贫血的分子杂交诊断技术及其进展j.中国优生与遗传杂志,2001,9(5):113,108. 4邓捷,刘新质,刘颖琳,等.应用平均红细胞体积测定法及红细胞脆性一管定量法筛查地中海贫血j.中华妇产科杂志,2000,35(10):610612. 5何雅军,杨小华,马福广,等.红细胞平均体积和脆性及血红蛋白电泳联合检测在地中海贫血诊断中的价值j

20、.中华检验医学杂志,2005,28:244246.篇三：血红蛋白电泳检查(电泳法) 血红蛋白电泳检查（电泳法） 1. 原理 血红蛋白是由两对多肽链组成的复杂分子。每一条链含有血红素和络合铁原子的卜啉。所有血红蛋白的血红素部分都是相同的。所测定的血红蛋白的蛋白部分称之为珠蛋白。正常人血红蛋白多肽链包括、和。血红蛋白的结构、分子特性取决于形成其肽链的氨基酸顺序和性状。氨基酸不同可形成不同的血红蛋白，其表面电荷不同，在电场中的泳动率不同。本实验在碱性（ph=8.60）条件下，以琼脂糖凝胶电泳的方法进行，对红细胞洗涤后造成溶血，电泳分离血红蛋白后以氨基黑染色。多余的染色液用酸性液体洗去。待琼脂糖凝胶板

21、干燥后，肉眼可直接判别有无电泳条带异常。运用光密度扫描仪检测准确定量分析电泳条带异常情况。血红蛋白异常有二种类型：血红蛋白性质或结构的异常称之为血红蛋白病。血红蛋白中的一条链合成减少引起血红蛋白性质异常，称之为地中海贫血。 2. 标本采集 2.1 标本采集前病人准备：受检者应空腹。 2.2 标本种类：抗凝血 2.3 标本要求：抗凝剂选用edta，柠檬酸或肝素均可，避免碘乙酸。常规静脉采血1.8ml，加入含有109mmol/l枸橼酸钠溶液0.2ml的干燥。清洁试管中，充分混匀。 3. 标本储存：储存于2-8冰箱中，5天。 4. 标本运输：储存于2-8状态下的冰壶或泡沫箱密封运输。 5. 标本拒收

22、标准：细菌污染、溶血或脂血标本不能作测定。 6. 试剂 6.1 试剂名称：血红蛋白电泳检查试剂 6.2 试剂生产厂家：法国sebia公司 6.3 包装规格：150tests 6.4 试剂盒组成 琼脂糖凝胶 10块 溶血素 1瓶 缓冲液条带 10包2条 薄滤纸 110张 氨基黑（浓缩液）1瓶100ml点样模具滤纸 10条1盒 6.5 试剂储存条件及有效期：贮存于室温（1530）或冰箱（28），不能冷冻。有效期两年。 7. 仪器设备 7.1 仪器名称：sebia电泳仪 7.2 仪器厂家：法国sebia公司7.3 仪器型号：hydrasys 8. 操作步骤 8.1 血红蛋白液制作：抗凝血离心，500

23、0rpm，5分钟，去掉血浆，用10倍体积的生理盐水洗涤红细胞3次，若红细胞体积小于10ul，需特别小心。取10ul红细胞加入130ul溶血液造成溶血。震荡混匀10秒钟，室温下培育5分钟待测。 8.2 启动电泳仪 8.3 将加样器放在一平板上，有数字的一端向上。各加样孔加入10ul溶血的样品，2分钟内加样完毕。将加样器放入保湿盒内，齿端向上（转运时用塑料齿保护架）。等待5分钟，使样品扩散至齿端。打开电泳仪盖，抬起电极和加样器支架。 8.4 使用hydragel 15 hemoglobince时选择仪器的“hbtotal”程序（位于链盘左侧）。 8.5 从包装袋内取出缓冲条，拿出末端的塑料片，将缓

24、冲条两端塑料片固定在电极支架背侧的钉上，塑料片应紧贴支架。 8.6 取出凝胶板。将薄的滤纸轻轻吸去凝胶板表面的多余液体，然后立即丢弃滤纸。在电泳仪温度控制板表面的边线内加200ul蒸馏水或去离子水。凝胶面朝上，放置凝胶板，边缘对齐边线。略略将凝胶弯曲，然后放平，使水均匀分布在凝胶板下面而不含气泡。 8.7 降低支架，使缓冲条不接触到凝胶板。 8.8 从保温盒里取出加样器。取时拿保护框。折断加样器齿端保护框。将加样器放在4号位置。 8.9 关上电泳仪盖子，按下键盘左侧的绿色箭头“start”键，电泳开始。 8.10 凝胶染色扫描 8.10.1 打开盖子 8.10.2 取出并丢弃加样器 8.10.

25、3 升高两个支架，握住塑料端取出并丢弃缓冲条。 8.10.4 打开凝胶托架，平放，将干燥的凝胶片放入两层间，然后关上托架。 8.10.5 将凝胶支架放入染色池 8.10.6 取出凝胶支架，打开盖子，取出干燥的凝胶片。 8.10.7 在光密度仪的570nm处或以黄色滤光片扫描测定。使用hydrys，dvse或preference光密度仪时，使a2片段的标记置于扫描板5mm的标志处。 9. 结果判断与参考范围 扫描得到的只是每种血红蛋白条带的相对浓度值。取出胶片后，首先清洁胶片的背面。判断溶血液的浓度是否合适，主要看基质带的浓度，如基质带浓度过淡，说明溶血液的浓度太淡。正常时a2浓度大约为基质带浓

26、度的1-2倍。 半岁-成人:hba94.5,hbf2.0,hba23.5 1个月：hba 12-40,hbf 60-93,hba2 0.1-1.0 6个月：hba 86-98,hbf 0.84-10.7,hba2 0.87-2.9 脐带血：hba 4-40,hbf 30-96,hba21.0 10. 质量控制 建议测定每一批样本时都附有一控制品或含有血红蛋白a,f,c和s的血样本。11. 临床意义 11.1 检测-地中海贫血 11.1.1 轻型：hba2轻度升高，大多在4-8 11.1.2 中间型：hba1a2缺如，hbf可达10 11.1.3 重型：hbf：30-90，hba多低于40或甚至0 11.2 检测-地中海贫血 11.2.1 标准型-地中海贫血：新生儿期hbbarts可达5-15，几个月后消失。经煌焦油蓝温育后，少数红细胞内有h包涵体。血红蛋白电泳无异常发现。 11.2.2