六种常见口腔微生物培养

1、常见口腔微生物培养【摘要】变形链球菌、血链球菌、乳杆菌、粘性放线菌、中间普氏菌、白色念珠菌是常 见的口腔致龋菌。 本实验主要作为大实验的一部分， 以标准株为培养对象， 设置了各种细菌 的普通培养法以及外加原卟啉的培养基培养法。【关键词】变形链球菌 血链球菌 乳杆菌 粘性放线菌 中间普氏菌 白色念珠菌 培养1 材料与仪器菌株选择变形链球菌 ATCC 25175血链球菌 ATCC 105561嗜酸乳杆菌 ATCC 435613粘性放线菌 ATCC 159872中间普氏菌 ATCC 256112白色念珠菌 ATCC 90038试剂与培养基磷酸缓冲液 PBS无原卟啉培养液：BHI液体培养基：将粉末溶于

2、 100ml纯水中，待溶解后调，高压灭菌，4 C冰箱保存备用。 3BHI平板：BHI粉末、 琼脂溶解于100ml纯水中，待溶解后调，高压灭菌，4C冰箱保存备用。MRS液体培养基：MRS粉末溶解于100ml纯水中，调pH，高压灭菌，4C保存备用。3MRS平板：MRS粉末溶解于100ml纯水中，加入2g琼脂，调pH，高压灭菌，4C 保存备用。SDA培养基：蛋白胨 1g,葡萄糖4g,琼脂2g加蒸馏水至100mL,调节至 左右，121 C高压蒸汽灭菌15min，冷却后加青霉素（50卩g/ml）,倒板，置 4 C备用。YPD液体培养基：蛋白胨2g,葡萄糖2g,酵母粉1g加蒸馏水至100mL，调节至 12

3、1 C高压蒸汽灭菌 15min，冷却后加青霉素（50卩g/ml）,置4 C备用。 加原卟啉培养液：取原卟啉1X（亦可以换成锌原卟啉或者原卟啉二钠盐等形式）56，加水定容到500ml，配制成 1g/L 的溶液在以上各种液体培养基中再加入，1g/L的原卟啉溶液配成约 3用/L的培养基。【注：BHI配方表：每100ml水加入牛心浸出液 25ml，牛脑浸出液20ml，胰蛋白胨， 酵母提取物，葡萄糖，盐酸半胱氨酸溶液，VPI盐液，刃天青（）。2MRS培养液配方：每100ml纯水加入胰蛋白胨，牛肉膏，酵母提取物，柠檬酸铵，葡 萄糖，醋酸钠，磷酸氢二钾，硫酸镁，硫酸锰，加入吐温 -80 ， ml.3本实验采

4、用简易的混合粉直接配制。 】培养环境无菌、厌氧（85%Nz, 10%H2、5%CQ） ,37C 主要仪器厌氧培养箱（ Bugboxdual， America ）无菌操作台2 培养变形链球菌培养用固体培养基分离纯化用接种环取变形链球菌 ATCC 25175接种于BHI固体培养基，37C培养24小时。 扩大培养挑取单菌种分别接种到无原卟啉的BHI液体培养基与含原卟啉的BHI液体培养基，37 C恒温培养 24 小时。血链球菌培养分离提纯并扩大培养血链球菌ATCC 10556步骤同。粘性放线菌培养分离提纯并扩大培养粘性放线菌ATCC 15987步骤同。中间普氏菌培养分离提纯并扩大培养中间普氏菌ATCC

5、 25611步骤同。乳杆菌培养用固体培养基分离纯化用接种环取。扩大培养挑取单菌种分别接种到无原卟啉的MRS液体培养基与含原卟啉的MRS液体培养基，37C恒温培养24小时。白色念珠菌培养用固体培养基分离纯化用接种环取白色念珠菌ATCC 90038接种于SDA固体培养基，37C培养24小时。扩大培养挑取单菌种分别接种到无原卟啉的YPD液体培养基与含原卟啉的YPD液体培养基，37 C恒温培养24小时。【参考文献】1 陶睿.Pleurocidin及其优化多肽抑制常见致龋菌的研究D.第四军医大学,2012.2 杨嗥.茶多酚联用奥硝唑对牙周可疑致病菌的体外抑菌活性研究D.重庆医科大学，2012.3 王勤花.乳酸杆菌对变形链球菌体外作用研究D.重庆医科大学,2012.4 郑璐.白色念珠菌生物被膜体外模型的建立及分析D.重庆医科大学,2010.5 王自明，张阳德，何剪太，林伶.药物诱导大鼠大肠癌组织原卟啉区积聚的定量分析J.