原发性干燥综合症患者血清IL

1、原发性干燥综合症患者血清IL 作者：袁双龙, 蒋莉, 张晓莉, 李舒帆, 段宏梅, 王晓非【关键词】 原发性干燥综合症;,甲状腺功能减退症;白细胞介素Serum IL21 level in patients with primary Sjgrens syndrome and clinical significance of IL21Abstract AIM: To investigate the relation between the change of serum IL21 level and other laboratory indexes by detecting serum IL21

2、 level from patients with primary Sjgrens syndrome (pSS) and explore the role of IL21 in pSS. METHODS: The level of serum IL21 from 40 pSS patients diagnosed according to 2002 revised international classification criteria for pSS and 30 healthy persons were detected by enzymelinked immunosorbent ass

3、ay(ELISA) respectively. Meanwhile, FT3, FT4, TSH, TgAb, TPOAb were detected by Immunochemiluminescent technique. Double diffusion method, Westergren and automatic gel method detected antSSA and antSSB antibody, ESR and serum protein electrophoresis respectively. The relationship between serum IL21 l

4、evel and other clinical symptom of the patients was analyzed. RESULTS: The level of serum IL21 in patients with pSS (1051335) ng/L was obviously higher than that in healthy control (46690 ng/L), (P0.05). The levels of serum IL21 in the selfantibody positive group, parotid gland swelling pain group,

5、rash group and incorporating hypothyroidism group were higher than those in their negative control groups, and there were significant differences(P0.05). In addition, The level of serum IL21 level in pSS patients showed positive correlation with globulin (r=0.719, P0.05) and ESR level(r=0.745, P0.05

6、). CONCLUSION: The evident increase of serum IL21 level in pSS patients has positive correlation with the levels of globulin and ESR, which suggests that IL21 may play a critical role in the pathogenesis of pSS.Keywordsprimary Sjgrens syndrome; hypothyroidism; interleukin21(IL21)摘 要 目的: 通过检测原发性干燥综合症

7、（pSS）患者血清白细胞介素21（IL21）的表达水平, 探讨其水平变化与pSS患者其他实验室检测指标关系以及其在pSS发病中的作用。方法: 选取符合2002年修订的pSS国际分类标准的40例初诊pSS患者。采用双抗体夹心ELISA方法检测该组患者及30例正常对照者血清中IL21的水平。同时, 采用免疫化学发光法检测患者的甲状腺情况包括FT3、 FT4、 TSH、 TgAb、 TPOAb。抗SSA和抗SSB抗体、 ESR、 血清蛋白电泳检测分别采用免疫双扩散法、 魏氏法、 全自凝胶法。并与患者的其他临床表现进行统计学分析。结果: pSS患者血清IL21水平为（1051335）ng/L, 明显高

8、于正常对照组水平（46690）ng/L, P005。特别是pSS患者中抗体阳性组、 有腮腺肿痛组、 皮疹组、 合并甲状腺功能减退组血清IL21水平均高于各自阴性对照组, 差异具有统计学意义（P005）。而且pSS患者中IL21水平与球蛋白及血沉存在明显正相关（r=0715, P005; r=0740, P005）。结论: pSS患者血清IL21水平明显升高, 且与球蛋白及血沉存在明显正相关, 提示IL21可能参与pSS的发病过程。关键词原发性干燥综合症; 甲状腺功能减退症;白细胞介素21原发性干燥综合症（primary Sjgrens syndrome, pSS）是一种主要累及外分泌腺体尤以唾

9、液腺和泪腺为主的自身免疫性疾病, 可同时累及甲状腺、 肺脏、 肝脏、 肾脏等多种器官出现多种临床表现。病理上表现为唾液腺呈灶性CD4+T淋巴细胞浸润, 而且B淋巴细胞高反应性成为其最突出的免疫学特征之一, 临床上可以看到多数pSS患者体内存在着高免疫球蛋白血症。近年来ParrishNovak等1发现的白细胞介素21（IL21）主要由活化的CD4+T细胞产生, 可促进T、 B淋巴细胞增殖。因此, 推测IL21可能在pSS的发病中起一定的作用。本试验我们检测了pSS患者血清IL21水平, 探讨与其他临床指标之间的关系, 为了解pSS的发病机制提供新的理论试验基础。1 对象和方法1.1 对象 选择在

10、中国医科大学第一临床学院200410/200601住院的未经治疗的初诊pSS患者40例, 诊断均符合2002年修订的pSS国际分类标准, 并排除糖尿病、 高血压、 感染等疾病, 其中女38例, 男2例, 平均年龄3812（1962）岁, 平均病程4.572.31年（4个月16年）。其中按照免疫指标的异常及是否存在皮疹、 腮腺肿痛、 甲状腺功能减退进行分组。30例正常健康对照者均来自我院体检中心健康体检者, 其中女28例, 男2例, 平均年龄3413（2058）岁。各组在年龄、 性别构成上均无统计学差异。1.2 方法 采清晨空腹静脉血3 mL, 离心后取上清, 置PC管中-20保存, 同批检测。

11、血清IL21水平测定采用双抗体夹心ELISA法, 试剂盒由美国RapidBio Lab提供, 严格按照试剂盒说明书的程序进行操作。酶标仪（帝肯公司Rainbow型, 瑞士）450 nm处测A值, 绘制标准曲线, 计算IL21浓度值。甲状腺检查包括FT3、 FT4、 TSH、 抗甲状腺球蛋白抗体（TgAb过去称TGA）、 抗甲状腺髓过氧化物酶抗体（TPOAb过去称TMA）通过美国雅培i2000免疫化学发光检测仪进行检测, 异常判定均参考同期该项检查的正常值。抗SSA和抗SSB抗体、 ESR、 血清蛋白电泳检测分别采用免疫双扩散法、 魏氏法、 全自凝胶法。并收集整理患者其他临床资料。 1.3 统计

12、学处理 所有数据均采用 xs表示, 试验数据采用SPSS12.0统计软件包进行分析, 在比较不同组间的血清IL21水平时采用t检验, IL21水平与pSS患者其他实验室指标之间关系分析采用直线相关分析并计算Pearson相关系数r, 以P0.05为具有统计学意义。2 结果2.1 甲状腺功能及抗体检查情况 40例pSS患者中, 结合临床表现11例（275%）患者FT3和/或FT4水平降低出现甲状腺功能减退, 其中6例（455%）TSH升高, 2例（50%）FT3、 FT4正常而单纯TSH升高表现为现亚临床甲状腺功能减退。40例患者中, 21例（525%）抗甲状腺抗体水平升高, 其中9例（225%

13、）TgAb升高（826251）kU/L,19例（475%）TPOAb升高（342102）kU/L, TgAb、 TPOAb同时升高7例（表1）。表1 pSS患者其他临床指标水平（略）Tab 1 The level of other clinical indexes in pSS2.2 pSS患者及正常对照组血清IL21水平 pSS患者血清IL21水平显著高于正常对照组; 抗SSA和/抗SSB阳性组血清IL21水平明显高于阴性对照组（P0.05, 表2）。2.3 pSS患者中有其他表现者血清IL21水平 有皮疹组血清IL21水平较对照组水平显升高（P0.05）; 伴腮腺肿痛组血清IL21水平明显

14、高于对照组（P0.05）; 合并甲状腺功能减退组血清IL21水平与对照组水平相比差异有统计学意义（P0.05, 表2）。表2 pSS患者及正常对照组血清IL21水平（略）Tab 2 Serum level of IL21 in pSS and control groupaP0.05 vs control; cP0.05 vs negative control group respectively.2.4 pSS患者血清球蛋白、 ESR测定及其与血清IL21水平之间的相关性 40例pSS患者球蛋白和ESR明显升高, 且经过Pearson相关系数分析发现IL21水平与球蛋白、 ESR成明显的正相关

15、（r=0.715, P0.05; r=0.740, P0.05, 表1, 图1）。图1 血清IL21水平与球蛋白、 ESR的相关关系（略）Fig 1 Correlation between serum level of IL21and globulin, ESRA: There was positive correlation between serum IL21 level and globulin(r=0.719, P0.05); B: There was positive correlation between serum IL21 level and ESR(r=0.745, P0.0

16、5).3 讨论ParrishNovak 等1从活化的人CD3+T细胞中成功克隆出IL21基因, 并发现IL21主要表达于经PMA、 ionomycin或抗CD3和CD28单克隆抗体（mAb）活化后CD4+T细胞, 其中经抗CD3和CD28 mAb活化后的CD4+T细胞表达显著增高, 而CD8+T细胞、 B细胞及单核细胞则不表达IL21。多数学者研究表明, IL21及其受体在许多自身免疫性疾病的发病机制中起着重要作用2, 3, 但在pSS中的研究报道尚不多见。我们通过检测pSS患者血清IL21水平初步探讨其在pSS发病中的作用。本研究中我们发现pSS患者血清IL21水平显著高于正常人水平, 且与

17、球蛋白、 ESR呈明显正相关, 特别是自身抗体阳性组血清IL21水平显著高于阴性对照组。表明IL21在pSS患者体内是促进B细胞增殖的,并在调节免疫球蛋白的产生过程中起重要作用4。而且IL21在腮腺肿痛组明显高于阴性对照组, 推测在免疫紊乱的pSS患者体内, 大量CD4+T淋巴细胞浸润唾液腺体, 随着IL21水平的升高, 致使B淋巴细胞反应性增高, 多克隆B淋巴细胞激活使体内产生大量器官特异性及非特异性自身抗体并可出现高球蛋白血症, 更加剧了自身免疫反应及腺体内外损伤。但也有动物实验表明IL21诱导静止期及活化的原始B细胞凋亡5。这种差异可能与活化的B淋巴细胞所处的环境不同, 而使IL21所诱

18、导的信号传递不同所致, 不同的活化信号决定了IL21是诱导B细胞协同刺激、 生长停滞还是Bim依赖的凋亡6。虽然尚没有试验表明IL21与皮疹的发生有直接关系, 但皮疹组IL21水平显著高于对照组, 这可能与IL21引起的显著高球蛋白血症有关。同时本研究也显示11例pSS患者合并临床甲减, 2例合并亚临床甲减, TPOAb和TgAb的阳性率分别为475%和22.5%和国内外报道基本相近7, 8。而且合并甲减组血清IL21水平显著高于非甲减组。干燥综合征合并甲状腺病变以自身免疫性甲状腺功能异常为主, 多表现为慢性淋巴细胞性甲状腺炎, 甲状腺功能减退, 也有甲状腺功能亢进的报道。目前对pSS患者中合

19、并甲状腺功能异常是其腺体外损伤亦或二者并存尚存在争论。然而, 二者都存在异常的体液及细胞免疫。甲状腺表现为慢性炎症过程大量Th1细胞因子如IFN、 TNF等增多9。而干燥综合征患者腺体中IL2、 IFN表达增加提示亦有类似Th1反应。Strengell 等10研究发现IL21可以上调Tbet基因合成进而增强Th1细胞免疫反应。同时, B淋巴细胞被激活体内产生以上各种自身抗体并与抗原结合沉积于腺体内进一步激活淋巴细胞并浸润腺体, 使其功能受损。由此我们可以看出二者之间存在着共同的发病机制。以往研究表明pSS患者体内CD8+T细胞数量减少11, 这样其对CD4+T细胞的抑制功能减弱, 表现为CD4

20、+T细胞功能亢进, 活化的CD4+T细胞产生的大量IL21激活T、 B淋巴细胞, 促进免疫球蛋白的产生引起腺体及腺体外的损伤。然而是否唾液腺等受累靶器官局部IL21和或IL21R过渡表达, 促进其他细胞因子的释放从而导致器官损伤, 以及IL21在pSS患者体内激活何种信号传导途径促进B淋巴细胞增殖均尚有待进一步研究。同时也提示我们, IL21可能在以CD4+T细胞活化为主的自身免疫性疾病的发病过程中起重要作用, 为我们今后深入研究提供了新的方向。 参考文献:1 ParrishNovak J, Dillon SR, Nelson A, et al. Interleukine21 and its

21、receptor are involved in NK cell expansion and regulation of lymphocyte functionJ. Nature, 2000, 408(6808): 57-63.2 Ozaki K, Spolski R, Ettinger R, et al. Regulation of B cell differentiation and plasma cell generation by IL21, a novel inducer of Blimp1 and Bcl6J. J Immunol, 2004, 173(9): 5361-5371.

22、3 King C, Ilic A, Koelsch K, et al. Homeostatic expansion of T cells during immune insufficiency generates autoimmunityJ. Cell, 2004, 117(2): 265-277.4 Ozaki K, Spolski R, Feng CG, et al. A critical role for IL21 in regulating immunoglobulin productionJ. Science, 2002, 298(5598): 1630-1634.5 Mehta DS, Wurster AL, Whitters MJ, et al. IL21 induces the apoptosis of resting and activated primary B cellsJ. J Immunol, 2003, 170(8): 4111-4118.6 Jin H, C