重症肌无力患者血清IgG-乙酰胆硷受体抗体亚型研究

1、重症肌无力患者血清IgG-乙酰胆硷受体抗体亚型研究【摘要】目的 探讨重症肌无力(MG)患者血清IgG-乙酰胆硷受体抗体(AChRAb)亚型的分布规律及其临床意 义。方法 采用ABC-ELISA法检测43例MG组和25例临床对照组、20例正常对照组血清中IgG-AChRAb亚 型IgG1-4。结果 MG组与两对照组相比IgG1和IgG4亚型抗体无显著差别，IgG2亚型抗体显著升高(P 0.05)，IgG3亚型抗体显著降低(P0.05)；MG组各临床类型间各亚型抗体无显著 差别。结论 IgG-AChRAb亚型以IgG2活性为主，但未显示与MG临床类型有关。【关键词】 重症肌无力乙酰胆硷受体抗体Ig

2、G亚型 Study on the subclasses of IgG-AChR antibodies in serum in patients with myasth enia g ravisLi JiminLiu DaokuanL Chuanzhenet al（Department of Neurology, Brain Hospital Affiliated to Nanjing Medical University,Nanjing 210029）【Abstract】Objective To investigate the role and its clinical signific an

3、ce on the subclasses of IgG-AChR ant ibodies in serum in patients with myasthenia gravis.Methods ABC-ELISA technique was used to detect the subclasses IgG1-4 of IgG-AChR antibodies in sera from 43 patients w ith MG, 25 clinical controls and 20 normal controls.ResultsThe re was no obvious difference

4、on IgG1 and IgG4 subclass antibodies b etween MG group and two control groups.IgG2 subclass antibodies increased significantly (P0.05), IgG3 sub class antibodies decreased significantly(P0.05).There were no di fferences the various subclass antibodies among various clinical types in MG gro up.Conclu

5、sion IgG-AChR antibodies subclasses might take IgG2 activity as the dominant facto r,but there was no any correlation with the clinical types of the disease.【Key words】 Myasthenia gravisAcetylcholine receptor antibodyIgG subclass重症肌无力(MG)是目前论证最清楚的自身免疫性疾病。乙酰胆硷受体抗体(AChRAb)被认为是 MG主要的致病因子。IgG型AChRAb是ACh

6、RAb的主要抗体，IgG是由IgG1-44种亚型组 成，故有必要进一步研究IgG-AChRAb亚型抗体。我们采用ABC-ELISA法检测了43例MG患者 血清中IgG-AChRAb亚型，以探讨其在MG中的分布规律及在MG发病机理中的意义。1资料与方法1.1一般资料MG组43例，男26例，女17例，年龄563岁，平均33.8岁。依据病史、体征 和疲劳试验、新斯的明试验诊断，部分病人经肌电、胸腺影像学检查、AChRAb检测进一步 证实。根据Osserman法分型：型20例，a型11例，b型5例，型4例，型2例和型1 例。临床对照组25例，男11例，女14例，年龄1665岁，平均35.8岁，均为同期

7、住院病人 ，多发性硬化17例，癫痫7例，多发性肌炎1例。正常对照组20名，男8名，女12名，年龄22 43岁，平均34岁，均为正常献血员。1.2方法均取外周静脉血3 ml，分离血清，-30保存备用。IgG-AChRAb亚型抗体测定 采用ABC-ELISA法。首先将5 g/ml的-银环蛇毒素(广西医学院蛇毒研究所提供)按 每孔100 l 包板(聚苯乙烯微量反应板，上海塑料三厂生产)，37，2小时，加10%小牛血 清封 板，4过夜；加1:25稀释肌肉粗提液(按Lindstnom法1改良提取)，37，2小时 ；加1:10稀释待测血清，37，1小时；加1:400鼠抗人单克隆IgG1-4(Sigma公司

8、生 产)，37，1小时；加1:1000辣根过氧化物酶联羊抗鼠IgG(Sigma公司生产)，37，1小时 ，加邻苯二胺为底物显色，室温5分钟，用4N硫酸终止反应后立即在511酶标仪(上海分析仪 器三厂生产)上比色，波长为429 nm，自动打印结果。直接以实际测得的OD值为各标本的结 果。1.3统计学处理各组检测数据用方差分析进行处理。2结果2.1MG组及临床对照组、正常对照组血清IgG-AChRAb亚型抗体检测结果见表1。 表1 3组IgG-AChRAb亚型抗体检测结果(s) 例数IgG-AChRAb亚型抗体IgG1IgG2IgG3IgG4MG组430.07820.02790.18300.160

9、9*0.05220.0140*0.08950.0951临床对照组250.08150.02270.07980.01710.07660.02330.07210.0284正常对照组200.07730.01630.07190.01400.08080.02500.07370.0131 与正常对照组比较*P0.05)，而MG组组内 4种亚型抗体有极显著性差别(P0.05)，而IgG2和IgG3两种亚型抗体组间均有显 著性差别(P0.05)。2.2MG组临床各型IgG-AChRAb亚型抗体检测结果见表2。各型之间均无显著差别(P 0.05)。表2 MG组临床各型间IgG-AChRAb亚型抗体检测结果(s)

10、例数IgG-AChRAb亚型抗体IgG1IgG2IgG3IgG4型200.07250.02590.17860.15970.05080.01270.08740.0838a+b型160.08230.03020.18540.16810.05330.01390.09070.0981+型70.08510.03180.19010.17320.05370.01510.09280.10823讨论 MG病人AChRAb的特性是多克隆性或异质性。这主要体现在下列几个方面：(1)分型：AChRA b极大部分是IgG型抗体，其在MG病人血清中检出阳性率为63%93%26，但也存 在其它类型的抗体。Lefvert5发现

11、2例MG病人在疾病的早期IgG型抗体出现之前有 IgM型抗体存在；Tindall7发现92例MG中有5例IgM型抗体阳性，48例中有2例IgA 型抗体阳性，但同时都伴有IgG型抗体存在；乔健等8报道96例MG检出IgM型抗体 阳性18例。(2)IgG亚型：根据IgG分子主链(r链)抗原性差别及二硫键数目和位置的不同可 将IgG分为IgG144个亚型，它们在正常人体 中含量分别为65%、23%、8%和4%左右。在MG的各个病例中AChRab也是由不同的IgG亚型组 成的7，9，10，其中以IgG1和IgG2占优势。有研究表明IgG亚型与全身型M G病人的各种 临床状态以及与不同的AChR来源之间

12、不存在相关性，但在眼肌型MG中IgG3亚型抗体显著增 高 ，且这些抗体对从眼肌和正常肢体肌来源的AChR的反应较去神经来源的AChR明显11 。在日 本人MG患者IgG亚型分析中12，发现极大部分为IgG1抗体，而IgG2和IgG3 活性很低。(3) 抗-BGT(-Bungarotoxin)结合位点抗体：Whiting等13应用含有饱和-BG T的人AChR亲和层析柱分离出抗 -BGT结合位点抗体和结合在AChR其它位点的抗体，并发现分离到的2例病人的抗-BGT 结 合位点抗体全部为IgG3型抗体。(4)单克隆抗体(mAbs)：应用杂交瘤技术已能产生对人ACh R的mAbs14，应用抗主要免疫

13、源区域的mAbs直接注入动物可诱导出实验性自身免 疫性MG15。本研究结果表明，中国人MG患者AChRAb亚型分布明显以IgG2为主，IgG1和IgG4活性一 般，而 IgG3活性明显低于正常，这与国外及日本人的报道不完全一致，可能提示MG的AChRab亚 型 分布存在有种族差异。4种亚型抗体在MG各临床分型间无明显差异，说明IgG亚型抗体与MG 的临床表现无明显的相关性，与国外报道结果相一致。至于IgG3活性明显降低，可能提示 少数MG患者存在IgG3量的不足或缺乏。作者单位：李继民（南京医科大学附属脑科医院神经内科210029）刘道宽（上海医科大学华山医院神经病学研究所）吕传真（上海医科大

14、学华山医院神经病学研究所）蒋雨平（上海医科大学华山医院神经病学研究所）肖保国（上海医科大学华山医院神经病学研究所）乔健（上海医科大学华山医院神经病学研究所）参 考 文 献1，Lindstrom JM,Lambert EH.Content of acetylcholine receptor and antibodies bound to receptor in myasthenia gravis,experimental autoimmune myasthenia gravis,and Eaton-Lambert syndrome.Neurology, 1978,28:1302，Lindstro

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