银杏黄酮对力竭小鼠心肌抗氧化的效用

1、银杏黄酮对力竭小鼠心肌抗氧化的效用 摘要 目的:通过建立小鼠力竭游泳模型,观察腹腔注射银杏黄酮对小鼠心肌自由基代谢的影响,探讨银杏黄酮抵抗力竭运动急剧产生的自由基的效用。方法:将40只雄性昆明小鼠随机分成空白组、对照组、低浓度给药组300 mg/(kgd)和高浓度给药组600 mg/(kgd),给药10 d后,通过建立小鼠力竭游泳模型,于力竭运动后检测小鼠心肌的sod与mda浓度。结果:银杏黄酮在300 mg/(kgd)和600 mg/(kgd)的浓度下,低浓度给药组与高浓度给药组sod与mda与对照组比较,差异无统计学意义(p0.05)。结论:银杏黄酮不能显著降低心肌内由于力竭运动所产生的自

2、由基。 关键词 银杏黄酮;力竭运动;心肌氧化损伤 中图分类号 r282.71文献标识码a 文章编号1673-7210(2010)05(c)-023-02 effects of ginkgo biloba extract on antioxidant effect of mice with exhausted mouse heart qiu yaoyu1, lin mi1, huang ronghui1, chen lihua1, zhong ming1, chen shaoqiang2 (1.school of basic medical sciences, fujian medical un

3、iversity, fuzhou 350108, china; 2.department of human anatomy and histoembryology, fujian medical university, fuzhou 350005, china) abstract objective: to observe and study the effects of ginkgo biloba extract (gbe), which is injected into abdominal cavity, on myocardial metabolism of free radicals,

4、 which are rapidly generated by exhaustive exercise in mice through the animal model by exhaustive swimming. methods: 40 male kunming mice were randomly divided into blank group, control group, low concentration treatment group 300 mg/(kgd) and high concentration treatment group 600 mg/(kgd). gbe wa

5、s injected into abdominal cavity. administered 10 days later, exhaustive swimming was conducted to establish mice model, then mice myocardial sod and mda concentration were measured after exhaustive exercise. results: it was found that at the 300 mg/(kgd) and 600 mg/(kgd) of gbe, the activity of sod

6、 and the content of mda in the low and high gbe groups were not significantly different (p0.05) compared with those of control group. conclusion: gbe can not significantly reduce the free radicals in myocardium generated by exhaustive exercise. key words ginkgo biloba extract; exhaustive exercise; m

7、yocardial oxidative damage 大量研究表明,力竭运动可引起体内自由基急剧增加,从而造成运动损伤。自由基不仅是体内最重要的凋亡诱因,而且还可以引发脂质过氧化反应1。脂质过氧化反应增强,氧化攻击和抗氧化能力失衡,造成氧化应激损伤。力竭运动可因此造成心肌损伤2,使心肌肌原纤维排列紊乱,心肌收缩力下降3-4。银杏黄酮是银杏叶中特有的活性物质,具有捕获自由基、抑制血小板活化因子、促进血液循环及新陈代谢等功效5-6,但是有关银杏黄酮对活体内心肌抗自由基的研究却少有报道。因此,本实验通过建立小鼠力竭运动模型,对银杏黄酮对心肌抗氧化作用的效用进行探讨。 1 材料与方法 1.1 材料 1

8、.1.1 动物雄性昆明小鼠40只,体重1820 g,由福建医科大学动物中心提供。 1.1.2 试剂超氧化物歧化酶(sod)试剂盒、丙二醛(mda)试剂盒、考马斯亮蓝试剂盒均由南京建成生物工程公司生产。银杏黄酮由西安小草植物科技有限责任公司生产,含量24%,符合cp2005标准。 1.1.3 仪器unic 7200分光光度计,hh-2数显恒温水浴锅,80-2型离心机。 1.2 实验方法 1.2.1 给药方法将40只小鼠随机分成空白组、对照组、低浓度给药组和高浓度给药组,空白组(10只)腹腔注射等容生理盐水;对照组(10只)腹腔注射等容生理盐水;低浓度给药组(10只)腹腔注射银杏黄酮300 mg/

9、(kgd);高浓度给药组(10只)腹腔注射银杏黄酮600 mg/(kgd)。各组均连续给药10 d。 1.2.2 运动方法第9天对对照组、低浓度给药组和高浓度给药组的小鼠进行力竭游泳预适应,负重体重的7%游泳,下沉5 s不能浮起为标准,捞起后休息恢复。第10天对对照组、低浓度给药组和高浓度给药组的小鼠进行力竭游泳预适应,负重体重的7%游泳,下沉7 s不能浮起为标准,捞起后休息恢复。第11天对对照组、低浓度给药组和高浓度给药组的小鼠进行力竭游泳操作,负重体重的7%游泳,下沉10 s不能浮起,捞起后处死,取心室肌。空白组在安静状态下处死,取心室肌。用预冷生理盐水将心室肌匀浆制成10%匀浆液。 1.

10、2.3 测试指标和方法sod与mda的测试均为南京建成生物工程研究所生产,依照说明书以unic 7200分光光度计进行检测。 1.3 统计学方法 所有数据由excel建立原始数据库,数据处理均由spss 12.0软件完成,数据以均数标准差(xs)表示,组间比较采用t检验,p 2 结果 与空白组比较,进行力竭运动后的对照组sod活性显著降低(p 表1各组小鼠心肌的sod与mda的测定结果(xs) tab.1activity of sod and content of mda of the mice myocardium in each group (xs) 与空白组比较,*p compared

11、with blank group, *p 3 讨论 sod是体内一种可以消耗超氧化物自由基的酶,对于氧自由基的清除具有重要的作用,可作为评定机体消除自由基能力的指标。其活力受多种因素的影响,如规律、适度的体育锻炼可以使体内sod活力增高7,但过度的运动可使体内自由基急剧增加1,造成抗氧化系统和活性氧的平衡破坏,从而对细胞的膜脂质、蛋白及核酸造成氧化损伤8,并可以造成心肌肌原纤维排列紊乱,心肌收缩力下降3-4。mda是脂质过氧化物的代谢产物,其产生的量与氧自由基的量及脂质过氧化的程度呈正相关,故mda可作为评定自由基水平及其对膜脂质双层结构破坏程度的指标9。 银杏黄酮是银杏叶所含的主要活性物质,

12、是一类衍生于母体化合物黄酮的一类低分子量化合物,以糖苷和甲基化形式存在,现已知的银杏黄酮类化合物共35种10。银杏黄酮类分子结构中含有多个还原性羟基(-oh)功能基团,可直接清除各种活化氧,从而抑制mda的中间产物生成,同时可以调高sod的活性11,从而从生成和消除两个方面降低体内自由基。 银杏黄酮虽然清除自由基的功效已被证实12,然而本实验数据显示,银杏黄酮对力竭运动模型的小鼠心肌自由基并没有显著降低。力竭运动可引起机体no下降,内皮素含量明显增多,长时间大强度的运动应激可以造成机体内no与内皮素之间的失衡,引起运动过程中冠状动脉持续收缩,诱发心肌缺血而导致心肌损伤13。另外,力竭运动还会造

13、成肾素-血管紧张素系统(raas)失衡,导致ace分泌增加,引起心肌的缺血损伤14。力竭运动过程中生成的大量ace可以造成心肌供血不足,使心肌持续低氧而产生了一定数量的氧自由基。银杏黄酮可以通过降低内皮素、提高no水平来扩张血管15,在体外还可以抑制血管紧张素的活性15-16,但是在活体内却因大部分ace以膜结合的形式存在,可能在空间结构上阻碍了银杏黄酮对ace的抑制作用17,导致氧自由基大量增加。这部分自由基产生的氧化作用抵消了银杏黄酮分子对sod的活化作用,使得对照组和给药组的sod无显著差异。同时氧自由基引发的脂质过氧化损伤也加剧,脂质过氧化的中间产物mda也随之增高,使对照组与给药组无

14、显著差异。 综上所述,在活体内,300600 mg/(kgd)银杏黄酮的给药浓度不能显著降低心肌内由于力竭运动所产生的自由基。 参考文献 1金其贯,邓荣华,李宁川,等.过度训练对大鼠心肌细胞凋亡的影响j.中国运动医学杂志,2000,19(41):356-359. 2张钧,许豪文,郭勇力,等.力竭运动对大鼠心肌线粒体游离钙及磷脂酶a2的影响j.中国运动医学杂志,1998,7(1):26-27,40. 3赵敬国,王福文.力竭性运动后不同时相大鼠心肌形态结构的改变观察j.中国运动医学杂志,2001,20(3):316-317. 4tibbts gf. regulation of myocardial

15、 contractility in exhaustive exercise j. med sci spoerts exerc,1985,17(5):29-37. 5方晓江,沈琴,戴瑞鸿.银杏提取物对心血管的作用j.中成药,1998,20(10):43-44. 6kudolo gb, wang w, barrientos j, et al. the ingestion of ginkgo biloba extract (egb761) inhibits arachidonic acid-mediated platelet aggregation and thromboxane b2 produc

16、tion in healthy volunteers j. j herb pharmacother,2004,4(4):13-26. 7metin g, atukeren p, ahurfan aa, et al. lipid peroxidation, erythrocyte superoxide-dismutase activity and tracemetals j. j epidemiol,2002,12:14-21. 8horakova l, licht a, sandig g, et al. standardizedextracts of tlavonoids increase t

17、he viability of pc12 cell treated with hydrogen peroxide: effects on oxidative injury j. arch toxicol,2003,77(1):22. 9hara h, sukamoto t, kogure k. mechanism and pathogenesis of ischemia-induced neuronal damage j. prog neurobiol,1993,40(6):645-670. 10王桂英,高英梅,郝玉杰.银杏叶提取物药理作用的研究进展j.河北中医,2009,31(6):944-

18、946. 11顾学裘.银杏药学研究与临床开发m.北京:中国医药科技出版社,2004. 12akiba s, kawauchi t, oka t, et al. inhibitory effect of the leaf extract of ginkgo biloba on oxidative stress induced platelet aggregation j. biochem mol biol int,1998,46(6):1243-1248. 13王福文,胡志力,李杰.力竭性运动致运动性心肌损伤的产生机制j.中国临床康复,2005,9(8):144-146. 14wilcox cs. oxidative stress and nitric oxide deficiency in the kidney: a criti