橡皮树组织培养研究

1、橡皮树组织培养研究 摘要：以橡皮树“黑金刚”茎尖为试材，研究了不同激素水平对橡皮树愈伤组织诱导、丛生芽诱导、增殖和生根的影响，并对橡皮树试管苗的温室移栽技术进行了总结。 关键词：橡皮树；组织培养；试管苗；移栽技术 1材料与方法 1.1材料 材料采自乌鲁木齐市燕儿窝风景管理站温室，挑选健壮、无病害的橡皮树母株，取其嫩枝顶芽和茎段为材料。 1.2试验方法 表面消毒：从橡皮树植株上剪取茎段，剪掉叶片，先用自来水冲洗10min，再用洗洁剂溶液洗涤12次。在无菌条件下，用75%的酒精浸泡50s，再用0.95%的次升汞溶液消毒18min，剪去材料的创伤面，留取0.51.00n长接种于培养基上。 1.3培养

2、基 以ms为基本培养基，附加3%蔗糖及0.6%琼脂，灭菌前ph值调至5.8，按不同的培养目标添加相应的激素，配制成诱导分化、继代增殖、生根成苗培养基，常规方法灭菌。 1.4培养条件 培养温度为（253），光照度为20002500lx，每天光照12h。观察记录愈伤组织或芽的诱导增殖情况。将丛生芽分株转入生根培养基中，培养环境同诱导愈伤组织条件相同，观察生根情况。生根后移栽在泥炭：珍珠岩=3：2的混合基质中。 2培养基的配制 2.1启动培养基 ms+6-ba0.1mg/l+naa0.1mg/l（单位下同）。 ms+6-ba0.5mg/l+naa0.1mg/l。 ms+6-ba1.0mg/l+naa

3、0.1mg/l。 2.2增殖培养基 ms+6-ba1.5+naa0.1mg/l。 ms+6-ba1.5+naa0.05mg/l。 ms+6-ba1.0+naa0.1mg/l ms+6-ba1.0+naa0.05mg/l。 2.3生根培养基 1/2ms+iba0.3mg/l。 1/2ms+iba0.6mg/l。 1/2ms+iba0.9 mg/l。 1/2ms+iba1.2 mg/l。 3结果与分析 3.1光照温度控制 经试验橡皮树组织培养对温度、光照条件的要求不太严，一般在自然散射光照射下，幼苗在玻璃瓶内生长很好，最适宜的温度范围在1828。 3.2芽的启动及增殖培养 将橡皮树的外植体接种于启

4、动培养基中，20天后观察芽丛分化情况。试验结果表明，激素浓度的不同，对橡皮树启动培养基有明显的影响。在naa浓度为一定值的情况下，6-ba设置0.1mg/l、0.5mg/l、1.0mg/l各3种浓度，处理的诱导率最高，为95%；处理的诱导率最低，为80.33%。通过对平均芽数的统计分析可知，处理与间有显著差异，激素浓度的增高有利于芽的生长速度和健壮程度。由此可见，诱导橡皮树不定芽的启动培养基ms+6-ba0.5mg/l+naa0.1mg/l是最佳培养基组合，培养效果见表1。 25天后，切去长约0.5cm、饱满、带有腋芽的茎段，接种到4种培养基上，18d液芽开始萌动，同时在茎段的基部四周出现黄白

5、色较致密的愈伤组织，茎段上端切口处（没与培养基接触）也出现少量黄白色愈伤组织。接种38d观察，茎段基部及上端切口处愈伤组织增多，液芽变长变绿。接种48d观察，液芽处有一对新叶出现，同时在基部增大的较致密的愈伤组织上可看到绿色芽点。这时将外植体取出，将液芽及时转到增殖培养基。接种后第28天观察芽丛分化情况。试验结果表明：6-ba浓度在1.01.5 mg/l和nna浓度在0.050.1 mg/l范围内，不定芽都能增殖，而在ms+6-ba1.0mg/l+naa0.1mg/l的培养基上效果最好，增殖系数可达4.9，增殖培养结果见表2。 3.3不同浓度激素对橡皮树组培苗生根的影响 从橡皮树组培苗上截取长

6、约2cm、粗壮而又生长良好的茎段，接种到4种培养基上，1015d，接种茎段的基部、节间上开始出现不定根。随着时间的推移，根不断加粗增多，长成完整的再生植株，18d后观察生根情况。生根结果见表3。 试验结果表明：在4种生根培养基中均能长出根，即对培养基的要求不严格。但在1/2ms+iba0.5mg/l中，组培苗的长势、生长量、生根的质量为最佳，可长出2.54.0cm长的粗壮根，生根率也达到最高。 3.4橡皮树组培苗的生根 将继代培养基上的无根幼苗，在无菌条件下，转移到生根培养基上培养，约710天即成幼植株。一般在根长0.10.5cm时，将幼苗移到瓶外，把沾带的培养液冲洗干净，然后移栽到经高温消毒

7、的河沙与珍珠岩混合的基质上培养。 3.5生根组培苗的移栽 组培苗生根后先打开瓶口晾23天，洗净琼脂，防止滋生微生物。然后将生根组培苗移栽到含有基质、配比为泥炭土：珍珠岩=3：2的苗床中。组培苗出瓶2个星期后，叶子明显变绿，新根产生，成活率在97.7%（见表4） 4移栽 4.1移栽技术 移植盆外是组织培养的最后一道工序，由瓶内移出瓶外，幼苗所处的环境有很大的变化：由异常到自养；由弱光到光到强光；由无菌到有菌。因此，在移栽时要十分小心，以提高移栽成活率。 培育壮苗。在生根前1次的继代培养过程中，应在配制培养基时适当降低6-ba的浓度，同时掌握继代时间，在幼苗最壮时转移到生根培养基上生根。加强锻炼。

8、打开瓶口的覆盖物，使之逐步适应由无菌到有菌，从高温到低温的变化。过渡培养。如果将生根培养基上的幼苗直接移栽到土壤中，成活率很低，经过在基质上过渡培养后，移栽成活率则提高。通风防病。橡皮树苗期生长缓慢，移栽到营养袋后，要加强管理，特别是在温室中注意通风以防病虫害的发生。 4.2炼苗及移栽 当苗基部诱导出45条不定根且根长2cm左右时，培养瓶移至室温条件下，适应3d后，将培养瓶的薄膜盖掀开。在常温和撒射光下炼苗34d，再从培养瓶中取出培养苗，并洗净根上附着的培养基，移栽于消毒过的基质（1份珍珠岩+1份泥炭）中。塑料大棚上覆盖遮阳网，使苗处于半阴环境。刚移入大棚前2d每天喷雾34次，保持较高的环境温度（85%），大棚温度控制在2025。在大棚中炼苗100d后苗长至20cm高时即可上盆移栽。 5结语 通过橡皮树培养基不同浓度激素的组织培养试验，筛选出适合橡皮树的培养基。结果