节 荧光分析法PPT学习教案

1、会计学1 节节 荧光分析法荧光分析法 第1页/共38页 第2页/共38页 第3页/共38页 第4页/共38页 第5页/共38页 第6页/共38页 光吸收过程 失活过程 发光失活 分子间能量转移失活 非辐射失活 荧光 磷光 振动驰豫 内转换 外转换 系间窜跃 第7页/共38页 hc hc hE c c 1 ；， 射线X射线 紫外光 可见光 红外光微波无线电波 /nm 0.01 10 400 760 5105 8105MHz 波长 频率 短 高 长 低 第8页/共38页 吸收 荧光 磷光 激发单重态激发三重态 内转换振动驰豫 系间窜跃 振动驰豫 外转换 基态 第9页/共38页 第10页/共38页

2、第11页/共38页 第12页/共38页 图11-3蒽的激发光谱和荧光光谱 第13页/共38页 图11-4 蒽(乙醇)的激发光谱和不同激发波长下的荧光发射光谱 /nm 第14页/共38页 吸收激发光的光子数 发射荧光的光子数 荧光产率 第15页/共38页 第16页/共38页 第17页/共38页 femex (nm)/(nm)/比较： 苯 205/278/0.11 萘 286/321/0.29 蒽 356/404/0.36 CH2OCOCH3 维生素A ex327nm；em510nm 第18页/共38页 联苯 f0.2 芴f1.0 N OH N O Mg 8-羟基喹啉8-羟基喹啉镁 第19页/共3

3、8页 1-二甲胺基萘-7-磺酸盐 1-二甲胺基萘-8-磺酸盐 f0.75 f0.03 SO3Na N H3C CH3 SO3Na N H3C CH3 第20页/共38页 第21页/共38页 表苯环上取代基对荧光的影响 化合物分子式F/nm相对荧光强度 苯C6H6270-31010 甲苯C6H5CH3270-32017 丙基苯C6H5C3H7270-32017 氟代苯C6H5F270-32010 氯代苯C6H5Cl275-3457 溴代苯C6H5Br290-3805 碘代苯C6H5I-0 苯酚C6H5OH285-36518 苯酚阴离子C6H5O-310-40010 甲氧基苯C6H5OCH3285

4、-34520 苯胺C6H5NH2310-40520 苯胺正离子C6H5NH3+-0 苯甲酸C6H5COOH310-3903 腈基苯C6H5CN280-36020 硝基苯C6H5NO2-0 第22页/共38页 第23页/共38页 NH3 NH2 NH OH H OH H pH值： 13 存在形式：离子 分子 离 子 有无荧光：无 蓝色荧光 无 0 20 10 18 NHHC NHHC OHC OHHC 3562565656 光强度 相对荧 ： 第24页/共38页 第25页/共38页 H3C O N N CH H CH2 HO H H H2SO4H2O1/2 例如：硫酸奎宁在不同波长激发下的荧光光

5、谱 和散射光谱 第26页/共38页 32 0 448 448 36 0 32 0 35 0 40 0 35 0 激发350nm 硫酸奎宁 激发320nm 硫酸奎宁 激发350nm 0.1mol/LH2SO4 激发320nm 0.1mol/LH2SO4 强 度 (a ) 强 度 (b ) /nm /nm /nm /nm 图11-6硫酸奎宁在不同波长激发下的荧光光谱和散射光谱 第27页/共38页 第28页/共38页 KcclIKF cl eIKF eII K IIKF cl cl 0 303. 2 0 303. 2 0 0 3 . 2 05. 0 1 Beer 时，上式简化为当 定律 率为常数，取

6、决于荧光效 0 I I F 荧光分析定量依据： 荧光强度F与浓度c 成线性关系。 第29页/共38页 s s x x x s x s x ss c FF FF c c c FF FF cFF cFF 0 0 0 0 00 0 第30页/共38页 第31页/共38页 荧光分光光度计方框图 光源 第一 单色 器 第二 单色器 检测 器 放大 记录器 I 0 I F 样品 吸收池 第32页/共38页 A 光电荧光计 第一滤光片 第二滤光片 电表 光电管 样品池 狭缝 汞弧灯 样品池 检测器 光源 B 荧光分光光度计 第33页/共38页 SO3Na N=N OH HO ON 8-羟基喹啉 石榴茜素R N OH 第34页/共38页 O O O N O O HO