限制性核酸内切酶——分子手术刀黏性末端平末端牡丹江一中

1、” IT%f-厂一声ph jr0DNA重组技术的基本工具基因的大小以纳米计算，要对它进行 剪切、拼接等操作，没有非常精细的工具 是不行的。进行基因操作最少需要以下三 种工具：U准确切割DNA的工具（“分子手术刀）2、DNA片段的连接工具（“分子缝合针”）3、基因转移工具（“分子运输车乃）思考在自然界中有一些生物的DNA可能进入另一种生物的细胞中。我们有没有学过相关的实例?现今存在的生物为什么没有在长期的进化 过程中被外源DNA的入侵而灭绝，仍能保 持一种稳定状态？怎样才能使外来的DNA失效从而保护自身?限制性核酸内切酶“分子手术刀”来源:主要是从原核生包中牛讐 种酶。能癇外来的DNA切断，更于

2、这种 切割作用是在DNA分子内部进行的，故 名限制性核酸内切酶。2、种类雷4000种。3、作用识别双链DNA分子的某种長定的越査酸宦 住 S1,并且使每一条链中特定部位的两个孩昔簸之间的越豪二童I断开。4v结果：形成两种末端囂端限制酶切割DNA后形成的末端黏性末端、 平末端是如何形成的？T il- A T I AAI T G c什么叫黏性末端？当限制酶从识别序列的中心轴线两侧切 开时，被限制酶切开的DNA两条单链的切 口，带有几个伸出的核昔酸，他们之间正 好互补配对，这样的切口叫黏性末端。| A A T ；T T A A 什么叫平末端？当限制酶从识别序列的中心轴线处切 开时，切开的DNA两条单

3、链的切口，是平 整的，这样的切口叫平末端。1CCC: G4X CdGGCam1:CCT11GO；c(r申樋lit;切断的DNA片段要与受体细胞的dna连接, 你觉得可以用什么酶？二、DNA连接酶“分子缝合针”DNA聚合酶和DNA连接酶有何 7相同点和不同点?DNA连接酶DNA聚合酶连接DNA链双链单链连接部位在两DNA片 段之间形成 磷酸二酯键 ，两个缺口 同时连接， 不需模板。以一条DNA链为模板, 将单个脱氧核昔酸加 到已存在的核酸片段 的3,末端的羟基上， 形成磷酸二酯键。作用结果形成重组形成与模板链互补的 DNA分子DNA链限制酶切割后有两种不同的结果,一种产生黏性末端，一种产生平末端

4、。那么恢复它们的连接时，所用DNA连接酶是否可以不加选择？来源：大肠杆菌1v E.coliDNA连接酶:I特点：连接黏性末端来源：T4噬菌体2、T4DNA连接酶:特点=连接黏性末端 和平末端三、基因进入受体细胞的载体a;“分子运输车乃要让一个从甲生物细胞内取出来的基因在乙生物体内进行表达，首 先得将这个基因送到乙生物的细胞 内去！能将外源基因送入细胞的工 具就是载体。8DMA心杆Bom界右 大屬杆着矗质粒戟体拮妁櫃武倒8DMA界右 大屬杆着矗质粒戟体拮妁櫃武倒8DMA有切割位点目的尿因 捕入竝点机慄M因竄制JS点有标记基因的存 在，将来可用含 青霉素的培养基 鉴别。能复制并带着插 入的目的基因

5、一 起复制界右 大屬杆着矗质粒戟体拮妁櫃武倒1、作用：将外源基因送入受体细胞2、种类:质粒：是一种裸露的、结构简单、独立于 细菌拟核DNA之外，并具有自我复 制能力的很小的双链环状DNA分子。人噬菌体衍生物:不会使宿主细胞裂解。天然的噬菌体使细胞裂解。动植物病毒：灭毒或减毒的，但保留侵染特性。3、作为载体的必要条件沁胞轆歸翻觀严体DNA上,誌嫩鳩纏鮭外源(4)对受体细胞无害练习|=1、在基因工程中，切割运载体和 含有目的基因的DNA片段，需 使用（）可同种限制酶B 两种限制酶C 同种连接酶 D 两种连接酶练习2、不属于质粒被选为基因运载体的理由是A、能复制(D )B、有多个限制酶切点C、具有标记基因D、它是环状DNA练习3、基因工程是在DNA分子水平上进行设计 施工的。在基因操作的基本步骤中，不进行 碱基互补配对的步骤是(C)A、人工合成目的基因B、目的基因与运载体结合C、将目的基因导入受体细胞D、目的基因的检测和表达 大肠杆菌的一种限制酶(EcoR I