柱色谱分离实验课件

1、柱色谱分离实验课件 柱柱 色色 谱谱 Column Chromatography 柱色谱分离实验课件 了了 解：解： 1. 柱色谱法分离有机物的原理。 2固定相和流动相的选择原则。 掌掌 握：握： 1. 色谱柱的填充方法。 2柱色谱分离的基本操作。 一、实一、实 验验 目目 的的 柱色谱分离实验课件 色色 谱谱 法法 简简 介介 色谱法亦称色层法，色谱法亦称色层法， 层析法等，是层析法等，是分离，纯化分离，纯化 和鉴定和鉴定有机化合物的重要有机化合物的重要 方法之一，还可方法之一，还可定量分析定量分析。 柱色谱分离实验课件 色谱法分类色谱法分类 固定相、流动相的物理状态固定相、流动相的物理状态

2、 操作形式操作形式 分离原理分离原理 液液固色谱法固色谱法 气气固色谱法固色谱法 气气液色谱法液色谱法 液液液色谱法液色谱法 柱色谱法（柱色谱法（column chromatography） 薄层色谱法（薄层色谱法（TLC） 纸色谱法（纸色谱法（paper chromatographypaper chromatography） 气相色谱（气相色谱（GCGC） 高效液相色谱（高效液相色谱（HPLCHPLC） 吸附色谱法吸附色谱法 分配色谱法分配色谱法 离子交换色谱法离子交换色谱法 排阻色谱排阻色谱 操作形式操作形式 柱色谱法（柱色谱法（column chromatography） 二、实二、实

3、验验 原原 理理 柱色谱分离实验课件 柱色谱分离实验课件 柱色谱分离示意图柱色谱分离示意图 混合物混合物 吸附剂吸附剂(固定相固定相) 洗脱剂洗脱剂(流动相流动相) 二、实二、实 验验 原原 理理 柱色谱分离实验课件 柱色谱分离实验课件 二、实二、实 验验 原原 理理 吸附剂的性质：吸附剂的性质：均匀、均匀、 表面积大、不反应、表面积大、不反应、 吸附能力不同吸附能力不同 化合物的结构：化合物的结构：化合化合 物的吸附性和它们的物的吸附性和它们的 极性成正比极性成正比 洗脱剂的极性：洗脱剂的极性：溶解溶解 度适中、不反应、易度适中、不反应、易 获取回收获取回收 影响分离效果主要因素影响分离效果

4、主要因素 柱色谱分离实验课件 柱色谱分离实验课件 柱色谱分离实验课件 柱色谱分离实验课件 柱色谱分离实验课件 柱色谱分离实验课件 柱色谱分离实验课件 柱色谱分离实验课件 柱色谱分离实验课件 柱色谱分离实验课件 柱色谱分离实验课件 柱色谱分离实验课件 柱色谱分离实验课件 和 和 在氧化铝柱子上若分离下列各组混合物，哪一个组分先被洗脱下来？ 柱色谱分离实验课件 三、实三、实 验验 内内 容容 装柱装柱加样加样洗脱洗脱收集收集鉴定鉴定 干法：干法：10g 硅胶硅胶 +乙醇 乙醇 先用乙醇先用乙醇 后用水后用水 操作操作 组分颜色组分颜色 组分颜色组分颜色 1mL样品样品 加样操作加样操作 0.5mL

5、2乙醇洗涤乙醇洗涤 柱色谱操作柱色谱操作： 实实 验验 步步 骤骤: 柱色谱分离实验课件 吸附剂装填紧密，排除吸附剂装填紧密，排除 气泡。最终应使吸附剂的上气泡。最终应使吸附剂的上 端平整，无凹凸面，无断层。端平整，无凹凸面，无断层。 u 干法装柱干法装柱 u 湿法装柱湿法装柱 装装 柱柱 三、实三、实 验验 内内 容容 柱色谱分离实验课件 装柱时应该注意均匀，不能有气泡，裂缝， 否则样品可能顺缝隙流动而不吸附，影响 样品的分离，应用质软的物体如吸耳球等 轻轻敲击柱身，促使吸附剂装填紧密，排 除气泡。最终应使吸附剂的上端平整，无 凹凸面 柱色谱分离实验课件 样品为液体，可直接加样；样品为固体，

6、可选样品为液体，可直接加样；样品为固体，可选 择合适溶剂溶解为液体再加样。加样时，要沿管择合适溶剂溶解为液体再加样。加样时，要沿管 壁慢慢加入至柱顶部，勿使壁慢慢加入至柱顶部，勿使样品搅动吸附剂表面样品搅动吸附剂表面。 加加 样样 三、实三、实 验验 内内 容容 柱色谱分离实验课件 洗洗 脱脱 在柱顶不断加入洗脱剂，使 洗脱剂永远保持有适当的量，不 要让洗脱剂表面流干，使流动相 流速适当。 三、实三、实 验验 内内 容容 柱色谱分离实验课件 洗脱时应注意： （1）向柱内加入95%乙醇溶液洗脱（可以通过注射器沿管壁或安 装滴液漏斗）在恒压或加压条件下进行洗脱。控制流出速度1滴/秒。 逐渐出现色层

7、带分离。 （2）第一色层带到达色谱柱底部时，立即用锥形瓶收集第一色层 的溶液，直到其完全被洗出。【注意】洗脱时切勿使溶剂流干！ （3）然后，改用水溶液作为洗脱剂，当第二色层带到达色谱柱底 部时，立即收集第二色层的的溶液，直到其完全被洗出。 （4）用量筒分别量取所分离出来的两种溶液的体积后，倒入指定 的回收瓶中。 （5）分离结束后，应先让溶剂尽量流干，然后倒置，用吸耳球从 活塞 向管内挤压空气，将吸附剂从柱顶挤压出。使用过的吸附剂倒 入垃圾桶里。 柱色谱分离实验课件 试样有色试样有色，在层析柱上可直接观察。洗脱后，在层析柱上可直接观察。洗脱后 分别收集各个组分。分别收集各个组分。 收收 集集 试

8、样无色，试样无色，收集洗脱液时，多采用等份收收集洗脱液时，多采用等份收 集，每份洗脱剂的体积随所用吸附剂的量及试样集，每份洗脱剂的体积随所用吸附剂的量及试样 的分离情况而定。收集的每份洗脱剂的体积越小，的分离情况而定。收集的每份洗脱剂的体积越小， 分离效果越好。分离效果越好。 三、实三、实 验验 内内 容容 柱色谱分离实验课件 三、实三、实 验验 内内 容容 鉴鉴 定定 试样有色试样有色 依据颜色直接鉴定依据颜色直接鉴定 试样无色试样无色 可结合薄层色谱结果可结合薄层色谱结果 柱色谱分离实验课件 玻砂防堵塞 装柱需紧密 加压不可大 溶剂勿流干 四、注四、注 意意 事事 项项 柱色谱分离实验课件

9、 色谱法在有机化学中的应用: u分离混合物 u精制提纯化合物 u利用比移值(Rf)鉴定化合物 u跟踪反应进程 小小 结结 柱色谱分离实验课件 色谱法的特点: u分离效率高 复杂混合物,同系物,异构体等。 u灵敏度高 可以检测出g g-1(10-6)级甚至ng g-1(10-9) 级的物质量。 u分析速度快 几分钟或几十分钟内可以完成一个试 样分析。 小小 结结 柱色谱分离实验课件 柱色谱法分离甲基橙和甲基蓝柱色谱法分离甲基橙和甲基蓝 柱色谱分离实验课件 实验原理实验原理 甲基橙和亚甲基蓝均为指示剂,它们的结构式如下所示: 甲基橙甲基橙 亚甲基蓝 由于甲基橙和亚甲基蓝的由于甲基橙和亚甲基蓝的结构

10、不同结构不同,极性不同极性不同,吸附剂对它们吸附剂对它们 的吸附能力不同的吸附能力不同,洗脱剂对它们的解析速度也不同洗脱剂对它们的解析速度也不同,极性小、吸附能极性小、吸附能 力弱力弱、解析速度快的解析速度快的亚甲基蓝先被洗脱下来亚甲基蓝先被洗脱下来，而，而极性大、吸附能力强极性大、吸附能力强、 解析速度慢的解析速度慢的甲基橙后被洗脱下来甲基橙后被洗脱下来，从而使两种物质得以分离。本实，从而使两种物质得以分离。本实 验以硅胶为吸附剂，验以硅胶为吸附剂，95%乙醇作为洗脱剂，先洗出亚甲基蓝，再用蒸乙醇作为洗脱剂，先洗出亚甲基蓝，再用蒸 馏水作洗脱剂把甲基橙洗脱下来。馏水作洗脱剂把甲基橙洗脱下来。

11、 柱色谱分离实验课件 三、实三、实 验验 内内 容容 装柱装柱加样加样洗脱洗脱收集收集鉴定鉴定 干法：干法：10g 硅胶硅胶 +乙醇 乙醇 先用乙醇先用乙醇 后用水后用水 操作操作 组分颜色组分颜色 组分颜色组分颜色 1mL样品样品 加样操作加样操作 0.5mL2乙醇洗涤乙醇洗涤 柱色谱操作柱色谱操作： 实实 验验 步步 骤骤: 柱色谱分离实验课件 仪器和试剂仪器和试剂 1.仪器 锥形瓶、玻璃漏斗、色谱柱 2.试剂 柱层析硅胶、脱脂棉、乙醇（95%）甲 基橙、亚甲基蓝。 H2O 95 %乙醇 = 1 1 (A 液) 0. 2mol L -1HCl 95 %乙醇 = 1 1 (B 液) 柱色谱分

12、离实验课件 装置图装置图 装柱装柱 洗脱洗脱 柱色谱分离实验课件 实验步骤实验步骤 装柱装柱： 1、装色谱柱： （1）取一支色谱柱，在柱子的收缩部塞一小团脱脂棉花将色谱柱垂 直固定在铁架台上。 (2) 关闭活塞，向柱中倒入蒸馏水（也是洗脱剂，至柱体积的 1/2） （3）填吸附剂：称取10g 硅胶于小烧杯中 ,加入 15mL 蒸馏水 ,用玻 璃棒调好通过漏斗慢慢装入玻璃柱, 使其逐渐沉入底 部。用洗耳球敲打柱身使硅胶装填紧密，打开活塞，用小锥型 瓶承接, 控制滴速为1 滴秒,装完后在上面加一层脱脂棉（ ，操作时要注意吸附剂始终不能露出液面）。 柱色谱分离实验课件 实验步骤（续）实验步骤（续） 加样：加样：当液面刚好流至脱脂棉平面相切时，立刻关闭活塞， 加入 5mL左右的A 液 ,当 硅胶面又将要露出时 ,关紧活塞 ,用量筒准确加入 0. 50mL 以 A 液做溶剂的混合液(含甲 基橙和亚甲基蓝各为 0. 400 g L -1) 。 洗脱：洗脱：