分析化学：第十八章 高效液相色谱法

1、第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法 第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法 high performance high performance liquid chromatographyliquid chromatography；HPLCHPLC 第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法 u经典液相色谱法为基础，经典液相色谱法为基础， u引入气相色谱法的理论和实验技术，引入气相色谱法的理论和实验技术， u高压输送流动相，高压输送流动相， u高效固定相及高灵敏度检测器，高效固定相及高灵敏度检测器， u现代液相色谱分析方法。现代液相色谱分析方法。 第十八章第十八章 高效液

2、相色谱法高效液相色谱法 与经典液相色谱法相比与经典液相色谱法相比 u颗粒极细（一般为颗粒极细（一般为1010 m m以下）、规则均匀的以下）、规则均匀的 固定相，固定相，( (键合相键合相) )传质阻抗小，柱效高，分传质阻抗小，柱效高，分 离效率高；离效率高； u高压输液泵输送流动相，流速快，分析速度高压输液泵输送流动相，流速快，分析速度 快；快； u高灵敏度检测器，灵敏度大大提高。紫外检高灵敏度检测器，灵敏度大大提高。紫外检 测器最小检测限可达测器最小检测限可达1010 9 9g g，而荧光检测器最，而荧光检测器最 小检测限可达小检测限可达1010 12 12g g。 。 第十八章第十八章

3、高效液相色谱法高效液相色谱法 与气相色谱法相比与气相色谱法相比 u不受试样的挥发性和热稳定性的限制，不受试样的挥发性和热稳定性的限制， 应用范围广；应用范围广； u可选用各种溶剂作为流动相，对分离的可选用各种溶剂作为流动相，对分离的 选择性有很大作用，选择性高；选择性有很大作用，选择性高； u一般在室温条件下进行分离，不需要高一般在室温条件下进行分离，不需要高 柱温。柱温。 第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法 第一节第一节 高效液相色谱法的主要类型高效液相色谱法的主要类型 和原理和原理 一、主要类型主要类型 四类基本类型色谱法四类基本类型色谱法 分配色谱法（分配色谱法（partit

4、ion chromatographypartition chromatography） 吸附色谱法（吸附色谱法（adsorption chromatographyadsorption chromatography） 离子交换色谱法（离子交换色谱法（IECIEC） 空间排阻色谱法（空间排阻色谱法（SECSEC） 第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法 第一节第一节 高效液相色谱法的主要类型和高效液相色谱法的主要类型和 原理原理 一、一、主要类型主要类型 四类基本类型色谱法四类基本类型色谱法 分配色谱法（分配色谱法（partition chromatographypartition chr

5、omatography） 吸附色谱法（吸附色谱法（adsorption chromatographyadsorption chromatography） 离子交换色谱法（离子交换色谱法（IECIEC） 空间排阻色谱法（空间排阻色谱法（SECSEC） 化学键合相色谱法化学键合相色谱法 第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法 其他色谱类型其他色谱类型 u亲合色谱法亲合色谱法（affinity chromatographyaffinity chromatography；ACAC） u手性色谱法手性色谱法（chiral chromatographychiral chromatography；C

6、CCC） u胶束色谱法胶束色谱法（micellar chromatographymicellar chromatography；MCMC） u电色谱法电色谱法（electrochromatographyelectrochromatography；ECEC） 第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法 u以化学键合相为固定相的色谱法，简称键合以化学键合相为固定相的色谱法，简称键合 相色谱法相色谱法(bonded phase chromatography(bonded phase chromatography； BPC)BPC) u化学键合相：采用化学反应的方法将官能团化学键合相：采用化学反应

7、的方法将官能团 键合在载体表面所形成的固定相键合在载体表面所形成的固定相 第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法 优点：优点： u固定相的均一性和稳定性好，在使用过程固定相的均一性和稳定性好，在使用过程 中不易流失，使用周期长；中不易流失，使用周期长； u柱效高；重现性好；柱效高；重现性好； u能使用的流动相和键合相的种类多，分离能使用的流动相和键合相的种类多，分离 的选择性高的选择性高 正相（正相（normal phasenormal phase，NPNP）和反相）和反相 （reversed phasereversed phase，RPRP）键合相色谱法）键合相色谱法： 根据化学键合

8、相与流动相极性的相对强弱根据化学键合相与流动相极性的相对强弱 第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法 （一）正相键合相色谱法（一）正相键合相色谱法 u固定相：固定相：极性键合相极性键合相 如氰基（如氰基（CNCN）、氨基（）、氨基（NHNH2 2）或二羟基）或二羟基 键合硅胶。（经典：水饱和的硅胶）键合硅胶。（经典：水饱和的硅胶） u流动相：流动相：非极性或弱极性溶剂加极性调整剂非极性或弱极性溶剂加极性调整剂 如烷烃加醇类。（与水不混溶的溶剂）如烷烃加醇类。（与水不混溶的溶剂） u适用范围：适用范围：溶于有机溶剂的极性至中等极性溶于有机溶剂的极性至中等极性 的分子型化合物的分子型化合物

9、 如一些在硅胶柱上分离的物质如一些在硅胶柱上分离的物质 第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法 正相键合相色谱法正相键合相色谱法 u分离机制？分离机制？ 分配：把有机键合层作为一个液膜看待，溶质在两相分配：把有机键合层作为一个液膜看待，溶质在两相 的溶解的溶解 吸附：溶质与键合极性基团间的诱导、氢键和定向作吸附：溶质与键合极性基团间的诱导、氢键和定向作 用用 u分离选择性分离选择性： 极性强的组分极性强的组分k k大，后洗脱出柱。大，后洗脱出柱。 流动相的极性增强，洗脱能力增加，使组分流动相的极性增强，洗脱能力增加，使组分k k减小，减小， t tR R 减小。减小。 第十八章第十八章

10、 高效液相色谱法高效液相色谱法 （二）反相键合相色谱法（二）反相键合相色谱法 u固定相固定相：非极性键合相：非极性键合相 如十八烷基硅烷（如十八烷基硅烷（C C18 18，ODS ODS）、辛烷基（）、辛烷基（C C8 8）键）键 合硅胶合硅胶 u流动相流动相：水水为基础溶剂，加入一定量与水混溶为基础溶剂，加入一定量与水混溶 的极性调整剂的极性调整剂 常用甲醇水、乙腈水等常用甲醇水、乙腈水等 应用：最广应用：最广 非极性至中等极性的组分，非极性至中等极性的组分， （还有有机酸、碱及盐等）（还有有机酸、碱及盐等） 第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法 保留机制保留机制 疏溶剂疏溶剂 （

11、solvophobic theorysolvophobic theory） 溶质的保留主要是溶质溶质的保留主要是溶质 分子与极性溶剂分子间分子与极性溶剂分子间 的的排斥力排斥力，促使溶质分促使溶质分 子与键合相的烃基发生子与键合相的烃基发生 疏水缔合疏水缔合。 不是溶质分子与键合相不是溶质分子与键合相 间的色散力。间的色散力。 第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法 反相键合相色谱法反相键合相色谱法 u保留行为的主要影响因素保留行为的主要影响因素 1 1、溶质的分子结构（极性）、溶质的分子结构（极性） 极性越弱，疏水性越强，极性越弱，疏水性越强，k k越大，越大，t tR R也越大也越

12、大。 同系物碳数越多，极性越弱，同系物碳数越多，极性越弱，k k越大；越大； 引入极性取代基，降低疏水性，引入极性取代基，降低疏水性，k k值变小。值变小。 第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法 2 2、固定相、固定相 键合烷基的疏水性随键合烷基的疏水性随碳链的延长碳链的延长而增而增 加，溶质的加，溶质的k k也增大。也增大。 硅胶表面硅胶表面键合烷基的浓度越大键合烷基的浓度越大，则溶则溶 质的质的k k越大越大。 反相键合相色谱法反相键合相色谱法 u保留行为的主要影响因素保留行为的主要影响因素 第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法 反相键合相色谱法反相键合相色谱法 u保留

13、行为的主要影响因素保留行为的主要影响因素 3 3、流动相、流动相 极性越强，洗脱能力越弱，使溶质的极性越强，洗脱能力越弱，使溶质的k k越大越大 溶剂种类溶剂种类：水为弱溶剂，醇为强溶剂：水为弱溶剂，醇为强溶剂 溶剂比例溶剂比例：水的比例增加，使：水的比例增加，使k k增大增大 中性盐的加入中性盐的加入：使中性溶质的：使中性溶质的k k增大增大 pHpH：影响弱酸、弱减的离解：影响弱酸、弱减的离解 流动相的流动相的pHpH降低，弱酸降低，弱酸k k增大，增大，t tR R增大；增大； 弱碱弱碱k k变小。变小。 第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法 u离子抑制色谱法（离子抑制色谱法（

14、ion suppression ion suppression chromatographychromatography；ISC ISC ） u用少量弱酸、弱碱或缓冲溶液，调节流动相用少量弱酸、弱碱或缓冲溶液，调节流动相 的的pHpH，抑制有机弱酸、弱碱的离解，增加疏，抑制有机弱酸、弱碱的离解，增加疏 水缔合作用，使水缔合作用，使k k变大。变大。 u适用于适用于3p3pK Ka7a7的弱酸、的弱酸、7p7pK Ka8a8的弱碱的弱碱 反相键合相色谱法反相键合相色谱法 第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法 把离子对试剂加入到含水流动相中，组把离子对试剂加入到含水流动相中，组 分离子在

15、流动相中与离子对试剂的反离分离子在流动相中与离子对试剂的反离 子（子（counter ioncounter ion）生成）生成中性离子对中性离子对， 增加溶质与非极性固定相的作用，使增加溶质与非极性固定相的作用，使k k 增加，改善分离效果。增加，改善分离效果。 （三）反相离子对色谱法（三）反相离子对色谱法 paired ionpaired ionchromatographychromatography；PICPIC ion pair chromatography ion pair chromatography；IPCIPC 第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法 反相离子对色谱法反相

16、离子对色谱法 离子对模型离子对模型 33 + + () + 3s3 ( + 固定相固定相 + () + B) + B + H+BH RSO NaRSO + Na+ BH RSORSO ) BH 离子对 m B + A B A m A ( s m BAm mm s m s B AA AB AB B AB EK 流动相流动相 通式通式 第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法 影响容量因子的因素影响容量因子的因素 离子对试剂的种类和浓度离子对试剂的种类和浓度：碳链长度增加，：碳链长度增加， 溶质的溶质的k k增大；在一定范围内试剂的浓度升高，增大；在一定范围内试剂的浓度升高， 溶质的溶质的k

17、 k增大增大 流动相的流动相的pHpH：有利于组分和离子对试剂离子：有利于组分和离子对试剂离子 化时（离子对的形成），组分的化时（离子对的形成），组分的k k值最大值最大 固定相固定相 、流动相性质、流动相性质（同一般（同一般RP-HPLCRP-HPLC）。）。 第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法 适用范围和离子对试剂的选择适用范围和离子对试剂的选择 u适用范围 适用范围：有机酸、碱、盐，离子型和非离子型化：有机酸、碱、盐，离子型和非离子型化 合物的混合物。合物的混合物。 u分析酸类或带负电荷物质 分析酸类或带负电荷物质：用季铵盐，如四丁基铵：用季铵盐，如四丁基铵 磷酸盐（磷酸盐（

18、TBATBA）和溴化十六烷基三甲基铵（）和溴化十六烷基三甲基铵（CTABCTAB） 等。等。 u分析碱类或带正电荷的物质 分析碱类或带正电荷的物质：用烷基磺酸盐或硫酸：用烷基磺酸盐或硫酸 盐，如正戊烷基磺酸钠（盐，如正戊烷基磺酸钠（PICBPICB5 5）、正己烷基磺酸）、正己烷基磺酸 钠（钠（PICBPICB6 6）。）。 第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法 第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法 u固定相应符合下列要求固定相应符合下列要求： 颗粒细且均匀；颗粒细且均匀； 传质快；传质快； 机械强度高，能耐高压；机械强度高，能耐高压； 化学稳定性好，不与流动相发生化化学稳

19、定性好，不与流动相发生化 学反应。学反应。 第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法 一、化学键合相色谱法的固定相一、化学键合相色谱法的固定相 （一）键合相的种类（一）键合相的种类 非极性键合相非极性键合相 ： 非极性烃基，如非极性烃基，如C C18 18 C C8 8C C1 1与苯基等键合在硅胶表与苯基等键合在硅胶表 面；面； 用于反相色谱；用于反相色谱； 长链烷基可使溶质的长链烷基可使溶质的k k增大，选择性改善，载样量增大，选择性改善，载样量 提高，稳定性更好。提高，稳定性更好。 第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法 键合相的种类键合相的种类 u弱极性键合相：弱极性键合

20、相： 醚基和二羟基等键合相醚基和二羟基等键合相 用于反相或正相色谱用于反相或正相色谱 u极性键合相：极性键合相： 常用氨基常用氨基氰基键合相（氰乙硅烷基氰基键合相（氰乙硅烷基Si(CHSi(CH2 2) )2 2CN)CN) 键合硅胶键合硅胶 一般用于正相色谱一般用于正相色谱 u特殊用途的键合相特殊用途的键合相 第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法 （二）键合相的性质和特点（二）键合相的性质和特点 u键合反应键合反应 硅氧烷（硅氧烷（SiSiO OSiSiC C）型：氯硅烷与硅）型：氯硅烷与硅 胶进行胶进行硅烷化反应硅烷化反应 2 2 SiOHClC H +SiSiSi Cl H 1

21、8 O R 1 18H C 37 37 R R R1 如：如：YWGYWGC C18 18H H3737，无定形硅胶 ，无定形硅胶YWGYWG上键合了上键合了 十八硅烷基；十八硅烷基；Spherisorb ODSSpherisorb ODS，球形硅胶，球形硅胶 Spherisorb Spherisorb 上键合了上键合了ODSODS。 第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法 键合相的性质和特点键合相的性质和特点 u键合相的性质键合相的性质 含碳量：含碳的百分数含碳量：含碳的百分数 覆盖度覆盖度 ：已反应的硅醇基数目占硅胶表面：已反应的硅醇基数目占硅胶表面 硅醇基总数的比例硅醇基总数的比

22、例 封尾（封尾（end-cappingend-capping）：在键合反应后，用）：在键合反应后，用 三甲基氯硅烷等进行钝化处理，减少残余硅三甲基氯硅烷等进行钝化处理，减少残余硅 醇基。醇基。 第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法 u键合相的特点键合相的特点 使用过程中不流失；使用过程中不流失； 化学稳定性好；化学稳定性好； 适于梯度洗脱；适于梯度洗脱； 载样量大载样量大 u注意注意： 流动相的流动相的pHpH一般应在一般应在3-83-8，否则会引起硅，否则会引起硅 胶溶解；胶溶解；( (也有适用宽也有适用宽pHpH范围的键合相范围的键合相) )。 键合相的性质和特点键合相的性质和特

23、点 第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法 二、化学键合相色谱法的流动相二、化学键合相色谱法的流动相 u对流动相的要求：对流动相的要求： 与固定相不发生化学反应。与固定相不发生化学反应。 对试样有适宜的溶解度。使对试样有适宜的溶解度。使k k在在1 11010范围内，范围内， 与检测器相适应。例如用紫外检测器时，选与检测器相适应。例如用紫外检测器时，选 用截止波长小于检测波长的溶剂。用截止波长小于检测波长的溶剂。 纯度高，粘度小。低粘度流动相如甲醇纯度高，粘度小。低粘度流动相如甲醇乙乙 腈等可以降低柱压，提高柱效。腈等可以降低柱压，提高柱效。 第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色

24、谱法 （一）（一）流动相对分离的影响流动相对分离的影响 n n由色谱柱（固定相）性能决定，由色谱柱（固定相）性能决定， 主要受溶剂种类的影响，主要受溶剂种类的影响， k k受溶剂配比的影响。受溶剂配比的影响。 2 2 1 1- 4 n k k R 第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法 （二）流动相的强度和选择性（二）流动相的强度和选择性 u溶剂的极性（强度）溶剂的极性（强度） 正相色谱：溶剂极性越强，洗脱能力越强正相色谱：溶剂极性越强，洗脱能力越强 反相色谱：极性弱的溶剂洗脱能力强反相色谱：极性弱的溶剂洗脱能力强 u溶剂的选择性溶剂的选择性 不同种类的溶剂，分子间的作用力不同，不同种

25、类的溶剂，分子间的作用力不同， 故选择性不同故选择性不同 u混合溶剂混合溶剂（二元或多元流动相）（二元或多元流动相） 第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法 u（一）一）HPLCHPLC中的速率理论中的速率理论 涡流扩散涡流扩散A A=2=2ddp p 球形、小粒度、均匀（球形、小粒度、均匀（RSDRSD5%5%）固定相，）固定相， 匀浆高压填充，以降低匀浆高压填充，以降低A A。 纵向扩散纵向扩散=2=2DDm m 可以忽略 可以忽略。 因为因为D Dl l很小，室温操作，且很小，室温操作，且U U大于大于U U最佳 最佳， ， 第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法 HPL

26、CHPLC中的速率理论中的速率理论 传质阻抗传质阻抗 u固定相传质阻抗固定相传质阻抗C CS S可以忽略可以忽略 ，因，因d df f极极 小小 u流动相传质阻抗流动相传质阻抗C Cm m u要求：要求： d dp p小，小，D Dm m大大 m 2 Pm m D d C 第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法 u静态流动相传质阻抗静态流动相传质阻抗： u由于部分流动相在固定相微孔内的滞留由于部分流动相在固定相微孔内的滞留 u静态流动相传质阻抗系数静态流动相传质阻抗系数C Csm sm uC Csm sm d dp p2 2， C Csm sm 1 1/D/Dm m，而，而D Dm m

27、TT/ / u要求要求: : 固定相固定相d dp p2 2、 流动相流动相都小都小 HPLCHPLC中的速率理论中的速率理论 第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法 H H = =A A + + C Cm mu u + + C Csm smu u 原因原因：化学键合相，液体流动相：化学键合相，液体流动相 结果结果：HPLCHPLC的实验条件应该是：的实验条件应该是： 小粒度、均匀的球形化学键合相；小粒度、均匀的球形化学键合相； 低粘度流动相，流速不宜过快；柱低粘度流动相，流速不宜过快；柱 温适当。温适当。 HPLCHPLC中的速率理论中的速率理论 第十八章第十八章 高效液相色谱法高效

28、液相色谱法 （二）正相键合相色谱法的分离条件（二）正相键合相色谱法的分离条件 u固定相固定相 极性键合相如氰基、氨基键合相极性键合相如氰基、氨基键合相 等等 u流动相流动相 烷烃加适量极性调节剂烷烃加适量极性调节剂 第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法 （三）反相键合相色谱法的分离条件（三）反相键合相色谱法的分离条件 u固定相固定相非极性键合相如非极性键合相如ODSODS u流动相流动相以水为基础溶剂，加入甲醇、以水为基础溶剂，加入甲醇、 乙腈等极性调节剂乙腈等极性调节剂 弱酸、弱碱或缓冲盐作为离子抑制弱酸、弱碱或缓冲盐作为离子抑制 剂剂 加入加入0.1%0.1%1%1%的醋酸盐、磷

29、酸盐可减的醋酸盐、磷酸盐可减 少残余硅醇基的作用少残余硅醇基的作用 第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法 （四）反相离子对色谱法的分离条件（四）反相离子对色谱法的分离条件 u固定相固定相 尽可能选择表面覆盖度高且尽可能选择表面覆盖度高且 疏水性强的非极性键合相，疏水性强的非极性键合相， u离子对试剂离子对试剂 离子对试剂所带的电荷离子对试剂所带的电荷 应与试样离子的电荷相反应与试样离子的电荷相反 u流动相流动相pHpH使试样组分与离子对试剂全使试样组分与离子对试剂全 部离子化部离子化 u有机溶剂及其浓度有机溶剂及其浓度 同一般同一般HPLCHPLC 第十八章第十八章 高效液相色谱法高

30、效液相色谱法 第三节高效液相色谱仪第三节高效液相色谱仪 u组成组成 输液系统输液系统 进样系统进样系统 色谱柱系统色谱柱系统 检测系统检测系统 数据记录处理系统数据记录处理系统 第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法 一、输液系统一、输液系统 u高压输液泵高压输液泵 恒流泵：在输送流动相过程中流量恒流泵：在输送流动相过程中流量 恒定。常用柱塞往复泵恒定。常用柱塞往复泵 双泵：为了克服流量的脉动。双泵：为了克服流量的脉动。 有串联式和并联式有串联式和并联式 第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法 输液系统输液系统 输液泵应具备的性能：输液泵应具备的性能： u流量精度高且稳定流量精

31、度高且稳定 u流量范围宽流量范围宽 u能在高压下连续工作能在高压下连续工作 u液缸容积小液缸容积小 u密封性能好，耐腐蚀密封性能好，耐腐蚀 第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法 输液系统输液系统 输液泵操作注意事项：输液泵操作注意事项： u防止固体微粒进入泵体防止固体微粒进入泵体 u流动相不应含有腐蚀性物质流动相不应含有腐蚀性物质 u防止溶剂瓶内的流动相被用完防止溶剂瓶内的流动相被用完 u不超过规定的最高压力不超过规定的最高压力 u流动相一般应该先脱气流动相一般应该先脱气 第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法 二、分离和进样系统二、分离和进样系统 u进样器进样器 进样阀（六

32、通阀）、自动进样装置进样阀（六通阀）、自动进样装置 u色谱柱色谱柱（columncolumn） 由柱管和固定相组成由柱管和固定相组成 分析柱、制备柱分析柱、制备柱 性能评价性能评价 H H、n n、f fs s、k k和和的重复性，或的重复性，或R R。 第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法 三、检测系统三、检测系统 u（一）检测器（一）检测器(detector)(detector)的主要性能的主要性能 要求要求： 灵敏度（灵敏度（sensitivitysensitivity）高（检测限低）高（检测限低） 噪音（噪音（noisenoise）低）低 线性范围（线性范围（linear r

33、angelinear range）宽）宽 重复性（重复性（repeatabilityrepeatability）好）好 适用范围广（通用型、专属型）适用范围广（通用型、专属型） 第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法 （二）紫外检测器（二）紫外检测器(ultraviolet detector)(ultraviolet detector) u检测原理检测原理： 朗伯比尔朗伯比尔 (Lambert-Beer) (Lambert-Beer) 定律，响应定律，响应 信号（吸光度）与浓度成正比信号（吸光度）与浓度成正比A A= =ClCl u特点特点： 灵敏度较高（灵敏度较高（1010-6 -6

34、 1010-9 -9 g/ml g/ml），噪音低，），噪音低， 线性范围宽，稳定性好，适于梯度，不破坏线性范围宽，稳定性好，适于梯度，不破坏 样品，应用广（分析、制备）。样品，应用广（分析、制备）。 第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法 u局限局限： 只能检测有紫外吸收的物质，流动只能检测有紫外吸收的物质，流动 相的截止波长应小于检测波长。相的截止波长应小于检测波长。 u专属型、浓度型检测器专属型、浓度型检测器 第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法 紫外检测器紫外检测器 u固定波长检测器固定波长检测器 ：254nm254nm u可变波长检测器：可变波长检测器： 光源：氘灯

35、（和钨灯），光源：氘灯（和钨灯）， 200200400400（800800）nmnm， 单色器，流通池（试样），光电管单色器，流通池（试样），光电管 光路系统和紫外分光光度计相似光路系统和紫外分光光度计相似 u光电二极管阵列检测器光电二极管阵列检测器 (photodiode array detector(photodiode array detector； PDAD)PDAD)： 一系列光电二极管，一个二极管对应接受光谱上约一系列光电二极管，一个二极管对应接受光谱上约 1nm1nm谱带宽的单色光谱带宽的单色光 第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法 紫外检测器紫外检测器 u光电二极管阵列检测器光电二极管阵