CCKB-RmRNA在幼龄厌食大鼠结肠平滑肌细胞中的表达(一).doc

1、CCKB-R mRNA在幼龄厌食大鼠结肠平滑肌细胞中的表达(一)作者：赵琼廖敏丁维俊李秀亮瞿佳【摘要】目的探讨胆囊收缩素受体 CCKB-RmRNA在幼龄厌食大鼠结肠平滑肌细胞中的表达及加减益胃汤对其表达的影响。方法借助特制饲料喂养幼龄厌食大鼠模型，采用RT-PCR技术检测 CCKB-R在幼龄厌食大鼠结肠平滑肌细胞中的表达，并观察加减益胃汤对该模型 CCKB-R表达的影响。结果正常大鼠结肠平滑肌细胞中 CCKB-R有低水平表达，特制饲料喂养造模后其表达水平异常增高，与空白对照组比较有极显著的统计学意义（ P0.001）；加减益胃汤高、中、低剂量组均能显著抑制或下调 CCKB-R的高表达，且有一定

2、的量 -效趋势。结论 CCKB-R基因高表达可能是厌食发生的主要病理环节之一，抑制或下调 CCKB-R基因表达可能是加减益胃汤治疗厌食症的主要作用靶点之一。【关键词】胆囊收缩素受体；厌食Abstract：ObjectiveToinvestigatetheexpressionofCCKB-RmRNAincolonsmoothmusclecellsoftheanorexiapedo-rats,andtheeffectofmodifiedYiWeiDecoctiononit.MethodsTheanorexiaratmodelwasestablisbedbyfeedingratswithspecia

3、llypreparedforage.TheexpressionofCCKB-RmRNAincolonsmoothmusclecellsoftheanorexiapedo-ratswasexaminedbyRT-PCR,andtheeffectofmodifiedYiweidecoctiononitwasobserved.ResultsComparedwithblankcontrol,theexpressionofCCKB-RmRNAinanorexiaratswassignificantlyincreased(P0.001).Highdosage,middledosageorlowdosage

4、ofYiweidecoctionallcouldobviouslydecreasetheexpressionofCCKB-RmRNAascomparedwithmodelgroup(P0.001).ConclusionTheexpressionofCCKB-RmRNAcanbeobviouslyincreasedincolonsmoothmusclecellsoftheanorexiapedo-rats,whichisoneofthemechanismsofanorexia.ModifiedYiweidecoctioncandecreasetheexpressionofCCKB-RmRNAin

5、colonsmoothmusclecellsoftheanorexiarats.Keywords：CCKB-R;Anorexia近年来研究证实胆囊收缩素（CCK）等脑肠肽在小儿厌食症的发病中起着重要的作用，但对其受体表达及进一步的分子信号转导机制还不十分清楚。本研究在近年来中药复方加减益胃汤治疗小儿厌食症取得良好临床疗效和我们前期研究1的基础上，借助特制饲料喂养幼龄厌食大鼠模型，对 CCKB-R在幼龄厌食大鼠结肠平滑肌细胞中的表达及加减益胃汤对其表达的影响进行了初步研究。现报道如下。1 材料与仪器加减益胃汤：北沙参15g，麦冬 10g，乌梅 5g，山药 15g，莲米 15g，生麦芽 15g，生

6、谷芽 15g，藿香 10g 等（由成都中医药大学制剂教研室制备）；阳性对照药：儿宝颗粒（江西清江制药厂产品，产品批号：050411）。抑肽酶（丽珠集团丽宝生物化学制药有限公司产品），50000KIU/支，使用前用生理盐水稀释为25IU/ml； PCR 反应试剂盒：TaKaRaRNAPCRKit(AMV)Ver.3试.0剂盒，宝生物工程（大连）有限公司生产。PCR仪：ThermoHybrid 生产，型号：Px2；凝胶成像系统： BIO-RAD生产，型号： GEL-DOC。2 方法2.1 分组及造模2.1.1 动物及分组实验用 SD大鼠 72 只（成都中医药大学动物实验中心提供，SPF级动物），日

7、龄 4045d，体重（7510）g，随机分为 6 组，即空白对照组、 模型组、阳性对照组、 加减益胃汤高、 中、低剂量组，每组 12 只。2.1.2 造模及给药方法除空白对照组外， 其余各组参考文献 2采取特制饲料喂养 “病因模拟 ”法造模。灌胃给药，实验过程中每日记录动物进食量，实验第 8 天开始灌胃，空白对照组和模型组灌生理盐水，阳性对照组灌服儿宝颗粒，加减益胃汤低剂量组灌服17.5g 生药 /kg，加减益胃汤中剂量组灌服 35g 生药 /kg，加减益胃汤高剂量组灌服 70g 生药/kg，1 次/d 。第 28 天晚 8 时起禁食，第 29 天处死，取标本。2.2 样本提取与保存大鼠处死后， 迅速剪取结肠中段 ,生理盐水洗尽血迹，去除黏膜层 ,取肌层组织并置于液氮中保存待测。2.3RTPCR检测 CCKB-R表达2.3.1 引物设计与合成从美国国立卫生院所维护的国际权威数据库网站获得最新版本的CCKB-R和内参基因-actin 的 mRNA 序列。利用引物设计专业软件PrimerPrimier5.0 设计其引物。然后委托大连宝生物完成引物合成。将引物溶于去离子水之中，终浓度调整为20pmol/ l， 20保存备用。CCKB受体引物：5-CTAAGAACGGTCACCAACG；3-GTGTAAG