药物分析_07常见各大类药物的分析

1、 一、药物的鉴别试验 w 药物的鉴别是根据药物的分子结构、理化性 质，采用物理、化学、物理化学或生物学方 法，判断药物的真伪判断药物的真伪。 w 药物鉴别项目 性状检查性状检查 鉴别试验鉴别试验 药物鉴别的内容 w 性状检查检查药物特有的物理性质。 包括：外观性状，如物态、色、臭、味 物理常数，如相对密度、馏程、熔点、凝 点、比旋度、折光率、黏度、酸值、皂化值、羟值、 碘值、吸收系数等。 w 鉴别试验通过化学反应或仪器分析方法来鉴别 药物的真伪。 鉴别试验分类 鉴别试验 一般鉴别试验 特殊鉴别试验 一般鉴别试验是依据某一类药物的化 学结构或理化性质的特征，通过化 学反应来鉴别药物的真伪。 C

2、C C O N O N C O H5C2 H5C2 H H 巴比妥 C C C O N O N C O H5C2 H H 苯巴比妥 C C C O N O N C ONa CH2CHCH2 CH CH3 C3H7 H 司可巴比妥钠 一般鉴别试验定义 w 在药物的鉴别试验中，具有某一类官能团或 者具有某一共同理化性质的药物可以用相同 或类似的方法来测定，也就是多种药物用同 一方法进行鉴别，这样的鉴别试验，称为一 般鉴别试验。 有机氟化物有机氟化物无机酸根无机酸根 托烷生物碱类托烷生物碱类 芳香第一胺芳香第一胺 无机金属盐无机金属盐 有机酸盐有机酸盐 药品药品 一般鉴别试验项目 有机氟化物 氟氟

3、康康 唑唑 【鉴别】【鉴别】 (1)(1)取本品，加乙醇制成每取本品，加乙醇制成每1ml1ml中含中含 200g200g的溶液，照分光光度法的溶液，照分光光度法( (附录附录 A) A)测定，在测定，在 261nm 261nm 与与267nm267nm的波长处有最大吸收，在的波长处有最大吸收，在264nm264nm的波的波 长处有最小吸收。长处有最小吸收。 (2)(2)本品的红外光吸收图谱应与对照品的图谱一本品的红外光吸收图谱应与对照品的图谱一 致。致。 (3)(3)本品显有机氟化物的鉴别反应本品显有机氟化物的鉴别反应( (附录附录)。 有机氟化物 鉴别原理：有机氟化物经氧瓶燃烧法破坏，被碱溶

4、液吸收成 为无机氟化物，与茜素氟蓝、硝酸亚铈在pH4.3溶液中形成 蓝紫色络合物。 有机氟化物 鉴别方法：详见P186-187 有机氟有机氟 氧瓶燃烧氧瓶燃烧 无机氟离子无机氟离子 pH4.3 茜素氟蓝茜素氟蓝硝酸亚铈硝酸亚铈 蓝紫色络合物蓝紫色络合物 丙二酰脲类（巴比妥类药物） 银盐鉴别法：取供试品适量，加碳酸钠试液振摇后 过滤，滤液中逐滴加入硝酸银试液，生成白色沉淀，振 摇即溶解，再继续滴加过量的硝酸银试液，沉淀不再溶 解。 铜盐鉴别法：取供试品适量加吡啶溶液溶解后，加 铜-吡啶试液，即显紫色或生成紫色沉淀。 托烷生物碱类 氢溴酸山莨菪碱氢溴酸山莨菪碱 【鉴别】【鉴别】 (1) (1) 本

5、品显托烷生物碱类的鉴别反应本品显托烷生物碱类的鉴别反应 （附录（附录）。）。 (2) (2) 本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光 谱集谱集287 287 图）一致。图）一致。 (3) (3) 本品的水溶液显溴化物的鉴别反应（附录本品的水溶液显溴化物的鉴别反应（附录 ）。）。 托烷生物碱类 托烷生物碱水解生成莨菪酸，经发烟硝酸加热处理， 转变为三硝基衍生物，再与氢氧化钾的醇溶液作用，转 变成醌型产物而显深紫色。 托烷生物碱类 鉴别方法：P187 生物碱生物碱 水解水解 莨菪酸莨菪酸 发烟硝酸发烟硝酸 三硝基衍生物三硝基衍生物 2-3滴滴 C2H5OH 固

6、体固体KOH 紫色的醌型产物紫色的醌型产物 芳香第一胺类 氨氨 苯苯 砜砜 【鉴别】【鉴别】 (1) (1) 本品显芳香第一胺类的鉴别反应本品显芳香第一胺类的鉴别反应 （附录（附录）。）。 (2) (2) 取本品，加甲醇制成每取本品，加甲醇制成每1ml 1ml 中含中含5g5g的溶液，的溶液， 照分光光度法（附录照分光光度法（附录 A A）测定，）测定， 在在261nm261nm与与296nm 296nm 的波长处有最大吸收。其吸收度分别为的波长处有最大吸收。其吸收度分别为0.350.350.380.38 与与0.590.590.620.62。 芳香第一胺类 原理：芳香第一胺与亚硝酸作用，生成

7、重氮 盐，再与B-萘酚反应，生成橙黄色到猩红色的 偶氮化合物沉淀。 鉴别方法： 供试品供试品 + 稀盐酸稀盐酸 亚硝酸钠亚硝酸钠 碱性碱性 - -萘酚试液萘酚试液 橙黄色橙黄色到到猩红色猩红色 有机酸盐 a.三氯化铁反应 水杨酸的三氯化铁反应在中性或弱酸性条件 下，水杨酸与试液生成配位化合物，在中性时呈红 色，弱酸性时呈紫色。 COOHCOO OHO FeFe + 4FeCl3 ( )2 3 + 12HCl6 有机酸盐 苯甲酸盐的中性溶液，与三氯化铁试液可生成碱 式苯甲酸铁盐的赭色沉淀。 有机酸盐 b.酒石酸盐的银镜反应取供试品的中性溶液， 置洁净的试管中，加氨制硝酸银溶液数滴，水浴加热， 银

8、游离并附在试管内壁形成银镜。 反应原理： 无机金属盐 钠盐、钾盐、钙盐、钡盐、锂盐的焰色反应 无机金属盐 显色或沉淀反应 中国药典收载的无机阳 离子盐的鉴别方法见P188-189. 铵盐的鉴别： 无机阴离子 中国药典附录收载的无机阴离子盐有氯化物、 溴化物、碘化物、硫酸盐、硝酸盐等等。 氯化物的鉴别： 供试液+硝酸+硝酸银白色 白色+氨试液沉淀溶解+硝酸白色 原理： Cl- + Ag+ AgCl 乳白色 Ag+ + 2NH3 Ag(NH3 )2+ 沉淀溶解 无机阴离子 盐酸妥卡尼 【鉴别】(1)(1)取本品约取本品约50mg50mg，加水，加水4ml4ml溶解后，加溶解后，加 盐酸溶液盐酸溶液

9、(9100)1ml(9100)1ml、重氮对硝基苯胺试液、重氮对硝基苯胺试液2ml2ml、氢、氢 氧化钠试液氧化钠试液4ml4ml与正丁醇与正丁醇2ml2ml，振摇，静置俟分层，正，振摇，静置俟分层，正 丁醇层显红色。丁醇层显红色。 (2)(2)本品的水溶液显氯化物的鉴别反应本品的水溶液显氯化物的鉴别反应( (附录附录) 无机阴离子 硫酸盐的鉴别： 供试液+氯化钡白色 白色+硝酸（盐酸）沉淀不溶 反应式： SO42- + Ba2+ BaSO4 白色白色 硝酸盐的鉴别： 棕色环法：取供试品溶液，加浓硫酸和硫酸亚铁溶液，在 浓硫酸和上层溶液的交界处出现棕色环。 3Fe2+ + NO3- + 4H+

10、 3Fe3+ + NO+4H2O Fe2+ + NO Fe(NO) 2+ 棕色 亚硝酰合铁离子 影响鉴别试验的因素 ）溶液的浓度 被鉴别药物的浓度 ）溶液的温度 ）溶液的pH值 生成物稳定和易于观察 ）反应时间 ）干扰成分 专属性更高的鉴别方法 2. 一般杂质检查 一般杂质是指在自然界分布较广泛，在多种一般杂质是指在自然界分布较广泛，在多种 药物的生产和贮藏过程中容易引入的杂质，如酸、药物的生产和贮藏过程中容易引入的杂质，如酸、 碱、水分、氯化物、硫酸盐、砷盐、重金属等。碱、水分、氯化物、硫酸盐、砷盐、重金属等。 w 药物中杂质的检查多数采用限量检查，该检查不 要求测定杂质的含量，而只检查其是

11、否超过限量。 (%) =100% 杂质最大允许量 杂质限量 供试品量 2. 一般杂质检查 氯化物检查法氯化物检查法 原理：中国药典是利用氯化物在硝酸酸性溶液 中与硝酸银试液作用，生成氯化银白色浑浊液， 与一定标准氯化钠溶液在相同的条件下生成的氯 化银浑浊液比较，浊度不得更大。 Cl-+Ag+AgCl 氯化物检查法氯化物检查法 方法：比浊法 lg AgNO . 33, CA HNO A产生 稀 取一定量供试品 产生浑浊 同上处理 液取一定量标准la.CNB 如A浊度比B小则合格 ？加入稀硝？加入稀硝 酸的作用酸的作用 加HNO 3 目的： A、AgCl 不溶于HNO3，可加速 AgCl沉淀的产生

12、； B、在HNO3中产生较好的乳化浑 浊； C、避免弱酸银盐Ag2O，Ag3PO4， Ag2CO3沉淀的干扰。 若供试品有色：若供试品有色： 可采用可采用内消色法内消色法，按中国药典附录规定的方法处理。，按中国药典附录规定的方法处理。 供试品供试品 + AgNO3 放置放置10min10min 澄清溶液澄清溶液 + +标准标准NaClNaCl + +水水 对照溶液对照溶液 供试品供试品 + AgNO3 + +水水 供试品溶液供试品溶液 暗处放置暗处放置 5min5min后比后比 较较 样品的前处理 氯离子的存在状态 w溶于水的药物直接测定 w不溶于水的药物加水振摇，过滤，取滤液检查； 也可采用

13、超声，加热等方法使Cl-溶解，取滤液或上 清液检查 w有机氯有机破坏后测定 硫酸盐检查法 原理：药物中存在的微量硫酸盐与氯化钡在盐酸酸 性介质中生成硫酸钡白色浑浊，与一定量标准硫酸 钾溶液在相同条件生成的浑浊比较，浊度不得更大。 SO42-+Ba2+Ba SO4 方法：比浊法 依法处理依法处理 A、供试品一定量、供试品一定量 产生产生BaSO4 的浑浊的浑浊 HCl，25% BaCl 2 同上同上 B、取一定量、取一定量K2SO4标准液标准液 同上同上 硫酸盐检查法 注意事项注意事项 （1）加适量HCI，防止BaCO 3 ，Ba 3（PO 4 ）2 等 的生成。 （2）适宜比浊的浓度为0.10

14、.5 mgSO4 2- /50 ml。 （3）供试液如需滤过，应先用盐酸使成酸性的蒸馏 水洗净滤纸中硫酸盐。 （4）有色供试品溶液的处理及其他注意事项与氯化 物检查法相同。 氟化物检查 有机氟有机氟 氧瓶燃烧氧瓶燃烧 无机氟离子无机氟离子 pH4.3 茜素氟蓝茜素氟蓝硝酸亚铈硝酸亚铈 蓝紫色络合物蓝紫色络合物 分光光度法，比较氟对照溶液和供试品溶液 在610nm波长的吸光度。 铁盐检查法 原理：中国药典采用硫氰酸铵法。 铁盐在盐酸酸性溶液中与硫氰酸铵生成红色可溶性 硫氰酸铁配位离子，再与一定量标准铁溶液用同法 处理后所呈的颜色比较，颜色不得更深。 Fe3+6SCN-Fe(SCN)63-（红色）

15、 方法：供试液 vs 标准液 注意： 1）加稀盐酸防止铁盐水解； 2）加过硫酸铵 (NH4)2S2O8 氧化剂，氧化供 试品中 Fe2+生成 Fe3+ 。 3）当供试液管与对照溶液管色调不一致，可 分别移入分液漏斗中，加正丁醇或异戊醇提 取，分别取提取液比色。 重金属检查法 重金属是指在实验条件下能与硫代乙酰胺或硫 化钠作用显色的金属杂质，如银、铅、汞、铜、铋、 锡、锌、钴与镍等。 铅为重金属的代表，以铅的限量表示重金属限 度。 中国药典（2005年版）收录了四种重金属 检查方法。 重金属检查法（） 第一法第一法 硫代乙酰胺法硫代乙酰胺法 原理 硫代乙酰胺在弱酸性（pH3.5 醋酸盐缓冲液）条

16、 件下水解，产生硫化氢，与微量重金属离子生成黄色到棕 黑色的硫化物均匀混悬液，与一定量标准铅溶液经同法处 理后所呈现颜色比较，颜色不得更深颜色不得更深。 CH3CSNH2H20 CH3CONH2H2S H2S Pb2 PbS 2H 此法适用于易溶于水、稀酸和乙醇的药物，为最常用 的方法。 pH值的影响 金属离子与硫化氢的呈色受pH值影响 较大。当pH3.0-3.5时，硫化铅沉淀较完全。 酸度增大，呈色颜色变浅，甚至不显色。 w 因此，供试品若用强酸溶解或处理后，在加入硫 代乙酰胺试液前，应先加氨水至溶液对酚酞指示 剂显中性，再加pH3.5醋酸盐缓冲液调节溶液的 酸度。 注意事项： w本法适合的

17、酸度为pH3.0-3.5。 w供试品溶液有色：在对照管中加少量稀焦糖溶液 （也可加其他无干扰的指示剂等），使两管色调 一致，如果外消色法不能消除干扰，可采用内消 色法。 1. 供试品含有微量Fe3+：会氧化H2S析出S，可加 VitC 0.5-1.0g，使Fe3+ Fe2+，同时在对照管中 加等量的VitC，再依法测定。 重金属检查法（） 第二法第二法 炽灼后的硫代乙酰胺法炽灼后的硫代乙酰胺法 适用于含芳环、杂环以及在水、稀酸及乙 醇中难溶的有机药物，如安乃近及盐酸氟奋 乃静中重金属的检查。 原理：将供试品炽灼破坏后 ，加硝酸加 热处理，使有机物分解，破坏完全后，再按 第一法进行检查。 依一法

18、检查 氯化物 残渣置坩埚中样品： 缓冲液 左右调节至、 、炽灼残渣 ml S 0 . 25 . 3pH pH7.0OHNHOHHCl HNO600500 232 3 依一法检查 对照：空坩埚 缓冲液 溶液）（标准、 、 ml0 .25 .3pH NOPbOHOHNH HClHNOSOH 23223 342 操作方法： 重金属检查法（ ） 第三法第三法 硫化钠法硫化钠法 适用于能溶解于碱性水溶液而难溶于稀酸或在稀 酸中即生成沉淀的药物，如磺胺类、巴比妥类药 物等。 原理 在碱性介质中，以硫化钠为显色剂，使 Pb2+ 生成PbS 微粒的混悬液，与一定标准铅溶液 经同法处理后所呈颜色比较不得更深。

19、方法 比色法 重金属检查法（ ） 第四法第四法 微孔滤膜法微孔滤膜法 适用于重金属限量低的 药物（含25g重金属） 的检查。 原理 使重金属生成的 硫化物富集于微孔滤膜上 形成色斑，比较供试品和 一定量的标准铅溶液同法 处理后产生的色斑深浅， 确定重金属是否超过限量 。 微孔滤膜法检查重金属含量装置图 砷盐检查法 砷盐多由药物生产过程中所使用的无机试 剂引入，为毒性杂质，必须严格控制其限量。 砷中毒事件砷中毒事件 1900年英国曼彻斯特因啤酒中添加含砷 的糖，造成6000人中毒和71人死亡。 1955-1956年日本发生的森永奶粉（含As2O3 ）中毒事 件，12100多人中毒，约130人死亡

20、。 2009年报道的孟加拉国的砷污染被WHO称为“历史上 一国人口遭遇到的最大的群体中毒事件”，有两百万人集体 中毒，且已造成多人丧命。 砷盐检查法 ChP采用古蔡法和二乙基二硫代氨基甲酸 银Ag(DDC)法检查药物中微量的砷盐。 (一）古蔡（Gutzeit）法 原理 金属锌与酸作用产生新生态的氢，与 药物中微量砷盐反应生成具有挥发性的砷化氢，遇 溴化汞试纸，产生黄色至棕色的砷斑黄色至棕色的砷斑，与一定量标 准砷溶液所生成的砷斑比较，颜色不得更深。 涉及的反应： As3+ + 3Zn + 3H+ 3Zn+ +AsH3 AsO33- + 3Zn + 9H+ 3Zn+ + 3H2O + AsH3

21、AsH3 + 3HgBr2 3HBr + As(HgBr)3 (黄色黄色) 2As(HgBr)3 + AsH3 3 AsH(HgBr)2 (棕色棕色) As(HgBr)3 + AsH3 3HBr + As2Hg3 (棕黑色棕黑色) 测定装置与试剂 试剂：标准砷溶液试剂：标准砷溶液 碘化钾试液碘化钾试液 酸性氯化亚锡试液酸性氯化亚锡试液 锌粒锌粒 溴化汞试纸溴化汞试纸 供试品溶液经同法处理后，生供试品溶液经同法处理后，生 成的砷斑与标准砷斑比较，不成的砷斑与标准砷斑比较，不 得更深得更深。 注意： KI-SnClKI-SnCl2 2：还原作用，将：还原作用，将AsAs5+ 5+还原成 还原成As

22、As3+ 3+； ； 去极化作用。 去极化作用。 醋酸铅棉花醋酸铅棉花的作用是消除锌粒及供试品中少量的作用是消除锌粒及供试品中少量 硫化物的干扰。硫化物的干扰。 S S2- 2-在酸性条件下产生 在酸性条件下产生H H2 2SS，与溴化汞作用，与溴化汞作用， 生成生成HgSHgS，干扰，干扰测定。测定。 砷盐检查法 （二）二乙基二硫代氨基甲酸银法 简称Ag (DDC)法 本法为ChP和USP收载的方法。不仅可用于砷盐的限量 检查，也可用作微量砷盐的含量测定。 原理 金属锌与酸作用，产生新生态的氢，与微量砷 盐反应，生成具有挥发性的砷化氢；砷化氢遇二乙基二硫 代氨基甲酸银使其还原产生红色的胶态银

23、，用目视比色法 或在510nm 波长处测定吸收度，再以一定量标准砷溶液用 同法处理后得到的有色溶液进行比较。 注意事项： 本反应可逆，可加入有机 碱使与HDDC结合，有利 于反应向右进行完全。常 用有机碱： -吡啶（USP） -三乙胺-氯仿溶液（ChP） 3 3 32 AsHAsOHHClZn 3HDDC6Ag(DDCAs 6Ag(DDC)AsH 3 3 红色） 检砷装置图 药典收录的其他杂质检查项目 w 干燥失重检查 w 易碳化物检查 w 溶液颜色检查 w 炽灼残渣检查 w 残留溶剂测定 干燥失重检查 干燥失重系指药品在规定的条件下，经干燥后所减少的干燥失重系指药品在规定的条件下，经干燥后所

24、减少的 量，以百分率表示。干燥失重主要检查药品中的量，以百分率表示。干燥失重主要检查药品中的水分水分，也包，也包 括其它括其它易挥发性成分易挥发性成分。 w常压恒温干燥法 本法适用于受热较稳定的药物。 w干燥剂干燥法 本法适用于受热分解、或易于挥发的供试品。 干燥剂:（1）硅胶 (使用方便, 价廉, 可以反复使用） （2）硫酸（吸水次于硅胶之，较便宜） （3）五氧化二磷（吸水力强，但价高） w减压干燥法 本法适用于熔点低、受热不稳定或难驱除水分的药物。 易碳化物检查法 易碳化物检查法是检查药物中遇硫酸易碳化或易 氧化而呈色的微量有机杂质。这类杂质多数结构未知， 用硫酸呈色的方法可以简便地控制他

25、们的总量。 w 方法：目视比色法 甲：规定对照溶液 乙：硫酸溶液(95%) w 判断：乙管中所显颜色不得较甲管更深。 +供试品，振摇对比观察 溶液颜色检查法 w 有色杂质可能在药物的生产过程中引入，也可能 由贮藏过程产生。对溶液颜色进行检查，可控制药 物中有色杂质的含量。 w中国药典采用的检查方法有三种。 （一）目视比色法 （二）分光光度法 （三）色差计法 标准比色液： 重铬酸钾 氯化钴 硫酸铜 按一定的比例配成不 同色调的标准比色液 通过色差计直接测定溶 液的透射三刺激值，通 过比较色差值来判断。 炽灼残渣检查法 中国药典和美国药典对炽灼残渣（residue on ignition ）的定义

26、：有机药物经碳化或挥发性无机药 物加热分解后，高温炽灼，所产生的非挥发性无机杂 质的硫酸盐。 英国药典称其为硫酸灰分（sulphated ash）。 炽灼残渣检查用于控制有机药物和挥发性无机药 物中存在的非挥发性无机杂质。 方法 重量分析法，限量一般控制在01-0.2%， 取样量为1-2g。 残留溶剂测定法 药品中的残留溶剂是指在合成原料药，辅料或制 剂生产的过程中使用的，但在工艺中未能完全除去的 有机溶剂。 w 主要检查药物在生产过程中引入的有害的有机溶 剂(如苯、氯仿、二氯甲烷、吡啶、甲苯、环氧乙烷、 二氧六环等）。 残留溶剂测定法 中国药典（2005年版）规定残留溶剂的检查方 法为GC，可采用填充柱，也可采用毛细管柱。检测 器通常使用火焰离子化检测器（FID），对含卤素的 残留溶剂如三氯甲烷等，采用ECD检测器。 色谱系统性试验的要求： (1) 填充柱N1000，毛细管柱