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文档简介

1、T ra n s w e ll细 胞 培 养 设 计实验一：探究共培养条件分泌组是否有变化即细胞A 和细胞 B 在共培养条件下其各自分泌组是否受到影响（暂且不讨论谁对谁的影响）。设计实验：1. 使用 Transwell 培养技术，上层培养细胞 A（细胞数设置为 1*105个）下层培养细胞 B（细胞数设置为 2*105 个）共培养 h 小时，从培养液中提取分泌蛋白（记为蛋白） 。Transwell12. 相同培养条件（培养基含量，细胞数，培养时间，温度等）设置两个 Transwell ：上层培养细胞 A（细胞数设置为 1*105 个）下层不放置细胞，上层不放置细胞，下层培养细胞 B（细胞数设置为

2、 2*105 个），培养 h 小时，从培养液中提取分泌蛋白（记为蛋白）。Transwell2- Transwell2- 3. 质谱分析蛋白和蛋白的差别， 初步分析共培养条件下分泌组是否影响。4. 置换细胞 A，细胞 B 培养的上下层条件，相同方法培养细胞，打质谱分析蛋白，分析结果是否与实验一有差别，进一步分析原因。总结：该方法尽可能的同一了共培养和单独培养的差异， 即排除了其他影响条件，只对比在共培养和单独培养条件下分泌组的变化， 从而为得到可信数据提供了条件， 对照分析了在共培养条件下与单独培养条件下分泌组的变化情况。缺点：由于细胞均未标记，即便结果显示共培养和单独培养分泌组确实有变化，仍无法得出两种细胞谁影响谁，由此，可利用标记培养基的方法，继续优化实验。实验二：优化设计，将单独培养的细胞A 培养基用 Leud-d 3 标记，细胞 B 用 Lys-C13 标记，而对共同培养的 Transwell 不做任何标记。如图所示：Transwell1Transwell2- Transwell2- 同实验一，经过相同条件的培养，提取分泌组，质谱分析（另做AB细胞上下层交换的实验） ，对比单独培养并分别标记与共培养但不标记条件下分泌组的变化， 从而得到两种细胞在共

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