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文档简介

1、实验五血红蛋白含量的测定血型鉴定1 实验五 血红蛋白含量的测定、血 型鉴定 实验五血红蛋白含量的测定血型鉴 定2 实验目的 l掌握血红蛋白的测定方法; l学习鉴定血型的基本方法,观察红 细胞凝集现象,掌握ABO血型鉴定的 原理。 实验五血红蛋白含量的测定血型鉴 定3 测定血红蛋白的意义 n人血红蛋白参考值 成年男性:13-15克/dl ;成年女性:11-14克/dl ; 儿童:(依年龄而异)12-14克/dl。 n临床意义:大致与红细胞增减相似。高原地区居民的血红蛋白浓度一般 比平原居民为高,这是机体对低气压环境的一种适应现象。一般来说, 在疾病状况下,血红蛋白的增减是与红细胞的改变相平行的,

2、即引起红 细胞增多的疾病,也会使血红蛋白含量增加。使红细胞减少的疾病,也 使血红蛋白含量减少。在贫血时,血液中的红细胞数量和血红蛋白浓度 都有不同程度的下降,但不一定按相同的比例变化。有时红细胞数量可 以减少很多,而血红蛋白的浓度的降低却相对地不那么显著,见于大细 胞性贫血,由于单个红细胞所含的血红蛋白量较正常者为多。相反,也 有的红细胞减少得不很多,而血红蛋白浓度却显著降低,例如缺铁性贫 血,这是由于每个红细胞的血红蛋白含量比正常明显减少,故血红蛋白 减低的程度较红细胞减少更为显著。 依据检验结果,分析病因,做到准 确的诊断和治疗都是很必要的。 实验五血红蛋白含量的测定血型鉴 定4 基本原理

3、基本原理 n血红蛋白是红细胞的主要成分,在正常情况下,每个红细胞均含 有一定量的血红蛋白。血红蛋白是由珠蛋白和亚铁血红素组成的 结合蛋白质。血红蛋白除能与氧结合形成氧合血红蛋白外,尚能 与某些物质作用形成多种血红蛋白衍生物。它们具有特定的色泽 和吸光谱,在临床上,可用以诊断某些变性血红蛋白血症和血红 蛋白的定量测定。 n测定血红蛋白含量的方法很多,实验常用比色法。其原理是在一 定量的血液中,血红蛋白经少量盐酸的作用,使亚铁血红素变成 高铁血红素,呈现较稳定的棕色。用水稀释后与标准色比较,求 出每100ml血液中所含的血红蛋白克数。正常成年男子每100ml血 液平均含14.4g,女子为13.1g

4、。 实验五血红蛋白含量的测定血型鉴 定5 实验原理-血型鉴定 n血型一般指红细胞的血型,是根据红细胞 膜外表面存在的特异性抗原(镶嵌于红细 胞膜上的糖蛋白和糖脂)来确定的,这种 抗原或凝集原是由遗传决定的。 n抗体或凝集素存在于血清中,与红细胞的 不同抗原起反应,产生凝集,最后溶解, 由于这种现象,临床上在输血前必须注意 鉴定血型,以确保安全输血。 实验五血红蛋白含量的测定血型鉴 定6 ABO血型鉴定实验原理 n抗原抗体反应在ABO血型系统中,红细胞 膜上抗原分A和B两种抗原,而血清抗体分抗A 和抗B两种抗体。A抗原加抗A抗体或B抗原加抗 B抗体,则产生凝集现象从而测知受试者红 细胞膜上有无A

5、或/和B抗原判断血型 n抗体在相邻的红细胞表面抗原决定簇之间搭桥抗体在相邻的红细胞表面抗原决定簇之间搭桥 形成肉眼可见的颗粒状凝集团块形成肉眼可见的颗粒状凝集团块.见图见图 实验五血红蛋白含量的测定血型鉴 定7 IgM抗体凝集红细胞示意图 实验五血红蛋白含量的测定血型鉴 定8 IgM抗体凝集红细胞示意图 IgGM在盐水介质中产生凝集 实验五血红蛋白含量的测定血型鉴 定9 实验材料 n血红蛋白计、血红蛋白计、0.1mol/L0.1mol/L盐酸溶液;盐酸溶液; n载玻片、刺血针、牙签、一次性采血管、载玻片、刺血针、牙签、一次性采血管、 A A型和型和B B型标准血清、生理盐水、酒精棉型标准血清、

6、生理盐水、酒精棉 球等。球等。 实验五血红蛋白含量的测定血型鉴 定10 方法与步骤-血红蛋白测定 n于测定管内加入0.1mol/L盐酸溶液至百分刻度20处。 n取20l被检血液, 迅速将吸血管插入测定管底部盐酸 液中,缓慢挤出血液,再吸取上部清液,反复冲洗 吸血管23次,并混匀,静置10min。 n沿着管壁加入蒸馏水,逐步稀释至与标准色柱色调 一致后,读取重量(或百分)刻度值报告结果。 v 标准制换算:血红蛋白标准制换算:血红蛋白(g/L)=血红蛋白血红蛋白(g/dl)10 实验五血红蛋白含量的测定血型鉴 定11 方法与步骤方法与步骤- -血红蛋白测定血红蛋白测定 n血红蛋白计包括 标准比色架

7、,架的两侧镶有 两个棕色标准玻璃色柱。 血红蛋白稀释管,有方形也 有圆形的。两侧有刻度,一侧 以g为计数单位,对侧以百分 率计,按我国情况,是以每 100ml血液内含血红蛋白14.5g 为100%。20mm3血红蛋白吸 管,还有玻璃棒、滴管。 n用滴管加0.1mol/LHCl于血红 蛋白稀释管内,到刻度10处。 n用刺血针刺破指尖采血,血滴 宜大些。用血红蛋白吸管的尖 端接触血滴,吸血至刻度20ul 处(0.02ml)。 实验五血红蛋白含量的测定血型鉴 定12 方法与步骤方法与步骤- -血红蛋白测定血红蛋白测定 n用滤纸片或棉球擦净吸管口周围的血液,将吸管插入血红 蛋白稀释管的盐酸内,轻轻吹出

8、血液至管底部,反复吸入 并吹出稀释管内上层的盐酸,洗涤吸管多次,使吸管内的 血液完全洗入稀释管内。摇匀或用小玻璃棒搅匀后,放置 10min,使盐酸与血红蛋白充分作用。 n把稀释管插入标准比色架两色柱中央的空格中,使无刻度 的两侧面位于空格的前后方,便于透光和比色。 n用滴管向稀释管内逐滴加入蒸馏水(每加一滴要搅拌), 边滴边观察颜色,直至颜色与标准玻璃色柱相同为止。稀 释管上液面的刻度读数即为每100ml血液血红蛋白的克数。 实验五血红蛋白含量的测定血型鉴 定13 n从指尖或耳垂取血一滴,加入含1ml生理 盐水的小试管内,混匀,即得约5红细 胞悬液。采血时应注意先用75酒精消毒 指尖或耳垂。)

9、(取少量受检者红细胞(约 0.20.5 ml)用生理盐水洗涤3次,然后 加入适量生理盐水调配成5%浓度。 方法与步骤-血型鉴定 实验五血红蛋白含量的测定血型鉴 定14 方法与步骤-血型鉴定 n(1) 取双凹玻片一块,用干净纱布轻拭使之洁净, 在玻片两端用记号笔标明A及B,并分别各滴入A及B标 准血清一滴。 n(2) 用滴管吸取红细胞悬液,分别各滴一滴于玻片 两端的血清上,注意勿使滴管与血清相接触。 n(3) 竹签两头分别混合,搅匀。用两根 分别用来 混合A型和B型标准 (4)观察结果。如有凝集反应可见到呈红色点状或小 片状凝集块浮起。先用肉眼看有无凝集现象,肉眼不 易分辨时,则在低倍显微镜下观

10、察,如有凝集反应, 可见红细胞聚集成团。 n(5) 判断血型 根据被试者红细胞是否被A,B型标准 血清所凝集,判断其血型。 实验五血红蛋白含量的测定血型鉴 定15 血型判定 正定型正定型反定型反定型 结果结果 抗抗A A 抗抗B BA A型型RBC BRBC B型型RBC ORBC O型型RBCRBC - -+ + - O + - + - A - + + - - B + +- - - AB 实验五血红蛋白含量的测定血型鉴 定16 注意事项注意事项 n吹血液入稀释管及洗净吸管时,不宜用 力过猛。 n蒸馏水需逐滴加入,多做几次比色,以 免稀释过量。每次比色时,应将搅拌用 的玻璃棒取出,以免影响比色。 n由于操作过程过长而造成吸管内血液凝 固,堵塞管孔时,则要按下列溶液的顺 序重复冲洗吸管,即用水95%酒精乙 醚或丙酮。 实验五血红蛋白含量的测定血型鉴 定17 五 注意事项 n玻片、试管都要标记!玻片、试管都要标记!, A及B标准血清绝对不能相混,不 要依靠用染料颜色标记血清。工作中要形成自己的习惯! n所用玻片、试管实验前必须清洗干净,以免出现假凝集现象。 n红细胞悬液滴管头不能接触标

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