植物细胞培养的基本技术

1、 灭菌效果最好，但去除也最困难， 且灭菌时间不宜过长，以免损伤或杀死植物 细胞。 作为休眠种子的灭菌剂最为理想， 适用浓度为0.1%，灭菌时间一般为 210min，用于有较厚种皮的休眠种子灭菌 时，可延长到20min或更长时间。 MS、N6、B6、LS、RM-1964、B5、 White等。 MS培养基是Murashige（穆拉希吉）和 Skoog（斯科格）于1962年为烟草细胞培养设 计的，其特点是无机盐和离子浓度较高，是较稳 定的离子平衡溶液，它的硝酸盐含量高，其养分 的数量和比例合适，能满足植物细胞的营养和生 理需要，因而适用范围比较广，多数植物组织培 养快速繁殖用它作为培养基的基本培养

2、基。 B5含有较低的盐离子，这个成分可能对很多 培养物的生长有抑制作用。 White的无机盐含量较低，适于生根培养。 常常使用的碳使用的碳源：源： 糖类、肌醇糖类、肌醇 有时也用甘油等物质代替有时也用甘油等物质代替 ： 是用于调节植物生长发育的一类药剂，包括 人工合成的具有天然植物激素相似作用的化 合物和从生物中提取的天然植物激素。 植物细胞植物细胞/ /组织培养方法分类：组织培养方法分类： 原生质体培养原生质体培养 按按 培养对象培养对象 分分 单倍体细胞培养单倍体细胞培养 固体培养固体培养 按按 培养基类型培养基类型 分分 液体培养液体培养 悬浮细胞培养悬浮细胞培养 按按 培养方式培养方式

3、 分分 固定化细胞培养固定化细胞培养 定义：定义： 把把细胞或生物体的一部分，置于液体培养基中使其细胞或生物体的一部分，置于液体培养基中使其 发育，并不断振荡，使之均匀地在悬浊液中进行培发育，并不断振荡，使之均匀地在悬浊液中进行培 养的一种养的一种方法。方法。 液体培养系统液体培养系统包括：包括： 小规模的悬浮培养；小规模的悬浮培养； 大规模的成批培养；大规模的成批培养； 半连续培养；半连续培养； 连续培养。连续培养。 悬浮培养指悬浮培养指的的是一是一种在受到不断搅动或种在受到不断搅动或 摇动的液体培养基里，培养单细胞及小细胞摇动的液体培养基里，培养单细胞及小细胞 团的组织培养系统，是非贴壁依

4、赖性细胞的团的组织培养系统，是非贴壁依赖性细胞的 一种培养方式。一种培养方式。 悬浮培养可分为悬浮培养可分为静止静止和和振荡振荡两类。两类。 成批培养法成批培养法 半连续培养法半连续培养法 连续培养法连续培养法 固定化培养法固定化培养法 将愈伤组织培养在一定容积的密闭容器中，将愈伤组织培养在一定容积的密闭容器中， 最后一次收获的培养方式。最后一次收获的培养方式。 成批成批培养特点：培养特点： 培养基培养基体积固定培养过程中，细胞体积固定培养过程中，细胞生长，其生长，其 数目不断发数目不断发 生变化，呈生变化，呈S S增长。增长。 成成批培养意义批培养意义： 它是进行细胞生长和细胞分裂的生理它是

5、进行细胞生长和细胞分裂的生理 生化研生化研 究常用的培养方法。究常用的培养方法。 但要进行下一批培养，则生长一定但要进行下一批培养，则生长一定时间后时间后， 需要继代转移。需要继代转移。 在反应器中投料和接种培养一段时间后，在反应器中投料和接种培养一段时间后， 将部分培养液和新鲜培养液进行交换的培将部分培养液和新鲜培养液进行交换的培 养方法养方法 将愈伤组织培养在一个恒定溶剂的流动系将愈伤组织培养在一个恒定溶剂的流动系 统中，以使培养系统中的细胞数量和营养统中，以使培养系统中的细胞数量和营养 状态保持稳定。状态保持稳定。 流动系统：流动系统：一方面以一定速率不断地加入一方面以一定速率不断地加入 新的培养基，另一方面又以相同的速率流新的培养基，另一方面又以相同的速率流 出培养物出培养物 连续培养连续培养意义：意义： 植物细胞代谢调节的研究植物细胞代谢调节的研究( (某种生长限某种生长限 速浓速浓 度度- -细胞生长的影响细胞生长的影响); ); 次生物质的大量生产。次生物质的大量生产。 采用的固定化反应器有网状多孔板、尼龙网套和采用的固定化反应器有网状多孔板、尼龙网套和 中孔纤维膜等多种类型中孔纤维膜等多种类型 固定化培养法固定化培养法突出优点：突出优点： 细胞位置固定，细胞位置固定， 易于获得高密度细胞群体及维持细胞间物易于获得高密度细胞群体及维