药物分析第六章

1、School of Pharmacy Jiamusi University Room of Pharmaceutical analysis School of Pharmacy Jiamusi University Room of Pharmaceutical analysis 典型药物的结构与性质典型药物的结构与性质 鉴别试验鉴别试验 特殊杂质及其检查法特殊杂质及其检查法 含量测定含量测定4 1 2 3 体内药物分析体内药物分析5 School of Pharmacy Jiamusi University Room of Pharmaceutical analysis 熟悉熟悉: : 主要芳

2、酸类非甾体抗炎药物杂质的 结构,危害,检查方法与限度 了解了解: : 影响芳酸类非甾体抗炎药物稳定性 的主要因素,体内样品与临床监测 掌握掌握: : 芳酸类非甾体抗炎药的结构和性质 主要芳酸类药物的鉴别,检查和含 量测定的原理与特点 School of Pharmacy Jiamusi University Room of Pharmaceutical analysis 概述 结构特点结构特点药物特点药物特点理化特性理化特性分析方法分析方法 作用作用 临床临床 基本基本 结构结构 基本基本 性质性质 鉴别鉴别,检查检查 含量测定含量测定; 体内分析体内分析 l抗炎抗炎, 抗风湿抗风湿, 止痛止

3、痛, 退热退热 l关节炎关节炎, 发热发热, 慢性疼痛慢性疼痛 l芳基取代羧酸芳基取代羧酸 l游离羧基和苯环游离羧基和苯环 l酸性酸性; 水解性水解性; 光谱特性光谱特性 l基团基团(酚酚)/元素元素 (硫硫)特性特性 lFe3+; UV, IR, LC l中间体或水解产物中间体或水解产物 l酸碱滴定酸碱滴定; UV; HPLC l体内过程与分析体内过程与分析 COOR1 RR n R School of Pharmacy Jiamusi University Room of Pharmaceutical analysis 一、典型药物与结构特点一、典型药物与结构特点 羧基状态 游离游离: 水

4、杨酸水杨酸,阿司匹林阿司匹林,双水杨酯双水杨酯,二氟尼柳二氟尼柳, 甲芬那酸甲芬那酸,布洛芬布洛芬,酮洛芬酮洛芬,萘普生萘普生,吲哚美辛吲哚美辛 盐盐/酯酯:双氯芬酸钠双氯芬酸钠,双水杨酯双水杨酯 酰胺酰胺: 吡罗昔康吡罗昔康,美洛昔康美洛昔康 OH OHO CH3O OHO O O OHO OOH FOH OH O F 水杨酸水杨酸 阿司匹林阿司匹林 双水杨酯双水杨酯 二氟尼柳二氟尼柳 COOR1 RR n R School of Pharmacy Jiamusi University Room of Pharmaceutical analysis 二、主要理化性质 (一) 酸性 l较强酸性

5、较强酸性: 原料药可在中性乙醇或甲醇原料药可在中性乙醇或甲醇,丙酮等丙酮等 水溶性有机溶剂中水溶性有机溶剂中,用氢氧化钠直接滴定用氢氧化钠直接滴定 l双氯芬酸,布洛芬,酮洛芬,萘普生,吲哚美辛: 羧基不与苯环直接相连羧基不与苯环直接相连, 酸性较弱酸性较弱 l吡罗昔康,美洛昔康,尼美舒利,对乙酰氨基酚: 酰胺结构酰胺结构, 无明显酸性无明显酸性 pKa = 3.49 2.95 4.26 OH OHO CH3O OHO O OHO School of Pharmacy Jiamusi University Room of Pharmaceutical analysis (二) 水解性 l酯键酯键

6、:阿司匹林阿司匹林/双水杨酯双水杨酯 l酰胺键酰胺键:吲哚美辛吲哚美辛,吡罗昔康吡罗昔康,美洛昔康美洛昔康,尼美舒利尼美舒利, 对乙酰氨基酚对乙酰氨基酚 l水解反应及其产物的特性反应水解反应及其产物的特性反应鉴别鉴别 l水解可快速水解可快速,定量定量含量测定含量测定(剩余碱量法剩余碱量法) l美洛昔康 定过量的氢氧化钠水解定过量的氢氧化钠水解 剩余的氢氧化钠用盐酸回滴定剩余的氢氧化钠用盐酸回滴定 美洛昔康 S N N H OH CH3 OO O S N CH3 School of Pharmacy Jiamusi University Room of Pharmaceutical analys

7、is (三) 吸收光谱特性 l紫外特征光谱紫外特征光谱 : 鉴别鉴别;含量均匀度含量均匀度,溶出度溶出度/释放度释放度 l红外特征光谱红外特征光谱 : 鉴别鉴别 酮洛芬 l酚羟基酚羟基:对乙酰氨基酚对乙酰氨基酚,水杨酸与水杨酸与Fe3+显色显色鉴别鉴别 l二苯甲酮二苯甲酮:酮洛芬与苯肼缩合显色酮洛芬与苯肼缩合显色鉴别鉴别 l硫硫:美洛昔康热分解后产生的硫化氢美洛昔康热分解后产生的硫化氢 与醋酸铅生成黑色硫化铅与醋酸铅生成黑色硫化铅鉴别鉴别 (四) 基团/元素特性 CH3 O OH O School of Pharmacy Jiamusi University Room of Pharmaceu

8、tical analysis 第二节 鉴别试验 一、与三氯化铁反应一、与三氯化铁反应 二、缩合反应二、缩合反应 三、重氮化三、重氮化-偶合反应偶合反应 四、氧化反应四、氧化反应 五、水解反应五、水解反应 六、特征元素反应六、特征元素反应 七、光谱法七、光谱法 八、色谱法八、色谱法 School of Pharmacy Jiamusi University Room of Pharmaceutical analysis n 中性或弱酸性中性或弱酸性(pH值值46)条件下进行条件下进行, 强酸性强酸性 溶液中配位化合物分解溶液中配位化合物分解 l阿司匹林阿司匹林 加水煮沸加水煮沸 l双水杨酯双水杨

9、酯 在氢氧化钠试液中煮沸在氢氧化钠试液中煮沸 p水解生成水杨酸水解生成水杨酸, 与三氯化铁试液显紫堇色与三氯化铁试液显紫堇色 n二氟尼柳二氟尼柳 于乙醇中与三氯化铁试液呈深紫色于乙醇中与三氯化铁试液呈深紫色 +FeCl3 O OH OH + Fe O O O OH H2O+3HCl 一、与三氯化铁反应一、与三氯化铁反应 School of Pharmacy Jiamusi University Room of Pharmaceutical analysis n对乙酰氨基酚对乙酰氨基酚:水溶液加三氯化铁试液显蓝紫色水溶液加三氯化铁试液显蓝紫色 n吡罗昔康吡罗昔康(三氯甲烷三氯甲烷): 与三氯化铁

10、显玫瑰红色与三氯化铁显玫瑰红色 n美洛昔康显淡紫红色美洛昔康显淡紫红色 l烯醇式羟基具有酚羟基性质烯醇式羟基具有酚羟基性质,与与FeCl3生成红色配位生成红色配位 化合物化合物 3 NHCOCH3 OH + FeCl3 NHCOCH3 O- 3 Fe + 3HCl School of Pharmacy Jiamusi University Room of Pharmaceutical analysis 二、缩合反应 n 酮洛芬的二苯甲酮酮洛芬的二苯甲酮, 在酸性下与二硝基苯肼缩在酸性下与二硝基苯肼缩 合生成橙色偶氮化合物沉淀合生成橙色偶氮化合物沉淀 CH3 O OH ONH-NH2 NO2 N

11、O2 N H O2N NO2CH3 O OH N + H2SO4 -H2O School of Pharmacy Jiamusi University Room of Pharmaceutical analysis 三、重氮化-偶合反应 NHCOCH3 + HCl + H2OHO HONH2HCl + CH3COOH HONH2HCl +HNO2HON2+Cl- + 2H2O HON2+Cl- + OH + NaOH NN OH OH + NaCl + H2O School of Pharmacy Jiamusi University Room of Pharmaceutical analys

12、is 四、氧化反应 l 甲芬那酸甲芬那酸: 溶于硫酸溶于硫酸, 被重铬酸钾氧化显深蓝被重铬酸钾氧化显深蓝 色色随即变为棕绿色随即变为棕绿色 l 吲哚美辛吲哚美辛: 溶液在硫酸酸性下与重铬酸钾溶液溶液在硫酸酸性下与重铬酸钾溶液 共热共热, 被氧化显紫色被氧化显紫色 l在盐酸溶液中与亚硝酸钠溶液反应显绿色在盐酸溶液中与亚硝酸钠溶液反应显绿色, 放置后放置后 渐变黄色渐变黄色 School of Pharmacy Jiamusi University Room of Pharmaceutical analysis 五、水解反应 l 阿司匹林阿司匹林, 水解得水杨酸钠与醋酸钠水解得水杨酸钠与醋酸钠,

13、酸化生酸化生 成水杨酸白色沉淀成水杨酸白色沉淀; 并发生醋酸的臭气并发生醋酸的臭气 l 双水杨酯水解后酸化双水杨酯水解后酸化, 生成白色水杨酸沉淀生成白色水杨酸沉淀; COOH OCOCH3 COONa OH + Na2CO3 + CH3COONa + CO2 COOH OH COONa OH 2 + H2SO42+ Na2SO4 2 CH3COONa + H2SO4 2 CH3COOH +Na2SO4 School of Pharmacy Jiamusi University Room of Pharmaceutical analysis 六、特征元素的反应 l 氯的鉴别氯的鉴别与碱共热分解

14、产生氯化物与碱共热分解产生氯化物, 显氯显氯 化物的鉴别反应化物的鉴别反应 u双氯芬酸钠双氯芬酸钠: 与碳酸钠炽灼灰化与碳酸钠炽灼灰化, 加水煮沸加水煮沸, 滤过滤过, 滤液显氯化物鉴别反应滤液显氯化物鉴别反应 l 硫的鉴别硫的鉴别经高温分解产生硫化氢气体经高温分解产生硫化氢气体, 遇遇 醋酸铅生成硫化铅黑色沉淀醋酸铅生成硫化铅黑色沉淀 u美洛昔康美洛昔康: 试管中炽灼试管中炽灼, 产生的气体使湿润的醋酸产生的气体使湿润的醋酸 铅试纸显黑色铅试纸显黑色 School of Pharmacy Jiamusi University Room of Pharmaceutical analysis 七

15、、光谱法 (一一) 紫外紫外-可见分光光度法可见分光光度法 最大吸收波长法最大吸收波长法: 双氯芬酸钠溶液双氯芬酸钠溶液: 276nm有最大吸收有最大吸收 吡罗昔康片吡罗昔康片,含量测定溶液含量测定溶液: 243与与334nm最大吸收最大吸收 最大与最小吸收波长法最大与最小吸收波长法: 布洛芬及制剂氢氧化钠溶液布洛芬及制剂氢氧化钠溶液: 265,273nm最大吸收最大吸收 245,271nm最小吸收最小吸收 259nm肩峰肩峰 School of Pharmacy Jiamusi University Room of Pharmaceutical analysis (一一) 紫外紫外-可见分光

16、光度法可见分光光度法 吸光度法吸光度法: 甲芬那酸盐酸甲芬那酸盐酸-甲醇溶液甲醇溶液: 279与与350nm最大吸收最大吸收 吸光度吸光度(20g/ml)分别分别: 0.690.74与与0.560.60 吸光度比值法吸光度比值法: 二氟尼柳盐酸二氟尼柳盐酸-乙醇溶液乙醇溶液: 251与与315nm最大吸收最大吸收 吸光度比值应为吸光度比值应为4.24.6 School of Pharmacy Jiamusi University Room of Pharmaceutical analysis (二二) 红外分光光度法红外分光光度法 阿司匹林阿司匹林 峰位峰位(cm-1)归属归属 3300230

17、0vO-H(羧基羧基) 1760, 1690vC=O(羧酸酯和羧酸羧酸酯和羧酸) 1610, 1570, 1480, 1460 vC=C(苯环苯环) 1310, 1230, 1180 vC-O(羧酸酯和羧酸羧酸酯和羧酸) 775Ar-H(邻位取代苯环邻位取代苯环) 33002300 1760,169016101460 13101180 775 School of Pharmacy Jiamusi University Room of Pharmaceutical analysis 八、色谱法 (一一) 薄层色谱法薄层色谱法 个别药物制剂采用溶剂提取法去除辅料后个别药物制剂采用溶剂提取法去除辅料

18、后IR鉴别鉴别; 部分药物制剂采用部分药物制剂采用TLC鉴别鉴别: 二氟尼柳二氟尼柳, 美洛昔康等美洛昔康等 (二二) 高效液相色谱法高效液相色谱法 随着随着HPLC在药物制剂含量测定中的大量应用在药物制剂含量测定中的大量应用, 更多更多 应用应用HPLC进行制剂的鉴别进行制剂的鉴别: 阿司匹林等多种制剂均直接取含量测定项下记录的阿司匹林等多种制剂均直接取含量测定项下记录的 HPLC色谱图进行鉴别色谱图进行鉴别 School of Pharmacy Jiamusi University Room of Pharmaceutical analysis 药物名称药物名称特殊杂质特殊杂质 游离水杨酸

19、与有关物质游离水杨酸与有关物质/FeCl3 阿司匹林/双水杨酯 甲芬那酸 二氟尼柳 第三节 特殊杂质及其检查法 2.3-二甲基苯胺 有关物质 6-甲氧基-2-萘乙酮 氨基酚和对氯苯乙酰胺 A.TLC; B.HPLC GC 萘普生 对乙酰氨基酚 School of Pharmacy Jiamusi University Room of Pharmaceutical analysis 一、阿司匹林与双水杨酯 (一一) 阿司匹林与双水杨酯的合成阿司匹林与双水杨酯的合成 ONaONa COOH H + OH COOH OH COOH (CH3CO)2O OCOCH3 COOH OH HOOC O CO

20、OH OOH CO2 CH3COOH HOH School of Pharmacy Jiamusi University Room of Pharmaceutical analysis (二二) 阿司匹林中游离水杨酸与有关物质阿司匹林中游离水杨酸与有关物质 COOH OH O O COOH OH HO COOH O O HO OH COOH O O COOH HO O COOH O COOH + HO -O O+ COOH O COOH 或 1. 游离水杨酸游离水杨酸: 酚羟基易被空气酚羟基易被空气(氧氧)逐渐氧化逐渐氧化 生成淡黄生成淡黄,红红 棕至深棕色棕至深棕色 醌型化合物醌型化合物 S

21、chool of Pharmacy Jiamusi University Room of Pharmaceutical analysis 1. 游离水杨酸游离水杨酸: l ChP 用水杨酸与用水杨酸与 Fe3+ 生成紫堇色配离子的生成紫堇色配离子的 原理原理, 用稀硫酸铁铵溶液显色法检查用稀硫酸铁铵溶液显色法检查 p 供试品溶液制备过程中阿司匹林水解供试品溶液制备过程中阿司匹林水解 l ChP2010采用采用1%冰醋酸甲醇溶液制备供试冰醋酸甲醇溶液制备供试 品溶液品溶液(防阿司匹林水解防阿司匹林水解); 并用并用RP-HPLC检查检查 School of Pharmacy Jiamusi Un

22、iversity Room of Pharmaceutical analysis 2. 有关物质有关物质: l阿司匹林中阿司匹林中“有关物质有关物质”系指除系指除“游离水杨游离水杨 酸酸”外的合成原料外的合成原料(苯酚苯酚)及副产物及副产物 OHOH COOHCOO OH COO OCOCH3 OH CO COOH OCO OCOCH3COOH O COO OHOH COCOO OCOCH3OCOCH3 CO OCOCH3 OH OH COOH OH COOH (CH3CO)2O (CH3CO)2O 醋酸苯酯 水杨酸苯酯乙酰水杨酸苯酯 水杨酰水杨酸乙酰水杨酰水杨酸 水杨酸酐 (CH3CO)2O

23、 乙酰水杨酸酐 (CH3CO)2O 苯酚水杨酸 CO2 School of Pharmacy Jiamusi University Room of Pharmaceutical analysis 阿司匹林阿司匹林 水杨酸水杨酸 乙酰水杨酰水杨酸乙酰水杨酰水杨酸 a:阿司匹林供试品阿司匹林供试品(10mg/ml)； b:0.5%自身对照自身对照(50 g/ml)； c: 0.05%自身对照自身对照(灵敏度试验灵敏度试验5 g/ml)； d:水杨酸对照水杨酸对照(10 g/ml)； e:空白空白 School of Pharmacy Jiamusi University Room of Pharm

24、aceutical analysis (三三) 双水杨酯中游离水杨酸双水杨酯中游离水杨酸 利用水杨酸与三价铁生成有色配离子的原理利用水杨酸与三价铁生成有色配离子的原理, 用硝酸铁溶液显色用硝酸铁溶液显色, 在在530nm的波长处测定的波长处测定 吸光度吸光度, 限度为限度为0.5%; 双水杨酯片同法检查双水杨酯片同法检查, 限度为限度为1.5% School of Pharmacy Jiamusi University Room of Pharmaceutical analysis 二、萘普生 (一一) 合成工艺合成工艺 原料原料(I) : 2-萘甲醚萘甲醚 中间体中间体(II): 6-甲氧基

25、甲氧基-2-乙酰萘乙酰萘(6-甲氧基甲氧基-2-萘乙酮萘乙酮) 中间体中间体(III): 2-羟基羟基-2-(6-甲氧基甲氧基-2-萘基萘基)丙酸丙酸 产品产品(IV): 萘普生萘普生 MeOMeO CH3 O MeO CH3 OH COOH MeO CH3 COOH 酰化 羧化 催化氢化 School of Pharmacy Jiamusi University Room of Pharmaceutical analysis (二二) 6-甲氧基甲氧基-2-萘乙酮及其它有关物质萘乙酮及其它有关物质 1. 溶液制备溶液制备 l 供试品溶液供试品溶液: 0.5mg/ml流动相溶液流动相溶液 l

26、对照品溶液对照品溶液: 6-甲氧基甲氧基-2-萘乙酮萘乙酮(杂质杂质I), 50g/ml l 对照溶液对照溶液: 供试品溶液供试品溶液1ml + 对照品溶液对照品溶液2ml200ml 2. 限度限度 n 杂质杂质I: 不得大于杂质不得大于杂质I峰面积峰面积(0.1%) n 其他单个杂质其他单个杂质: 不得大于杂质不得大于杂质I峰面积的峰面积的2倍倍(0.2%) n 各杂质总量各杂质总量: 不得大于对照溶液中萘普生峰面积不得大于对照溶液中萘普生峰面积(0.5%) School of Pharmacy Jiamusi University Room of Pharmaceutical analys

27、is 第四节 含量测定 一、酸碱滴定法一、酸碱滴定法 二、紫外二、紫外-可见分光光度法可见分光光度法 三、高效液相色谱法三、高效液相色谱法 School of Pharmacy Jiamusi University Room of Pharmaceutical analysis 一、酸碱滴定法 酸碱酸碱 滴定法滴定法 水解后剩余量滴定法 阿司匹林阿司匹林 USP, BP, JP 非水溶液滴定法 吡罗昔康吡罗昔康 具有吡啶环具有吡啶环, 显碱性显碱性, 可在冰醋酸溶液中用可在冰醋酸溶液中用 高氯酸滴定液滴定高氯酸滴定液滴定 剩余量滴定法 美洛昔康美洛昔康 水及与水混溶的有机溶水及与水混溶的有机溶

28、 剂中难溶剂中难溶,溶于氢氧化溶于氢氧化 钠滴定液后盐酸回滴定钠滴定液后盐酸回滴定 直接滴定法 水杨酸水杨酸,阿司匹林阿司匹林,双水双水 杨酯杨酯,二氟尼柳二氟尼柳,甲芬那甲芬那 酸酸,布洛芬布洛芬,酮洛芬酮洛芬,萘普萘普 生生,尼美舒利尼美舒利 School of Pharmacy Jiamusi University Room of Pharmaceutical analysis (一一) 直接滴定法直接滴定法 1. 测定法测定法 本品约本品约0.4g, 精密称定精密称定, 加中性乙醇加中性乙醇(对酚酞指示液显中对酚酞指示液显中 性性)20ml溶解后溶解后,加酚酞指示液加酚酞指示液3滴滴,

29、 用氢氧化钠滴定液用氢氧化钠滴定液 (0.1mol/L)滴定滴定 T=18.02mg 2. 讨论讨论 滴定在不断振摇下稍快进行滴定在不断振摇下稍快进行, 防阿司匹林水解防阿司匹林水解 受阿司匹林的水解产物水杨酸及醋酸的干扰受阿司匹林的水解产物水杨酸及醋酸的干扰 3. 应用应用 水杨酸水杨酸,阿司匹林阿司匹林,双水杨酯双水杨酯,二氟尼柳二氟尼柳,甲芬那酸甲芬那酸,布洛芬布洛芬, 酮洛芬酮洛芬,萘普生及尼美舒利萘普生及尼美舒利 COOH OCOCH3 COONa OCOCH3 + NaOH + H2O School of Pharmacy Jiamusi University Room of Ph

30、armaceutical analysis (二) 剩余量滴定法 1. 原理原理 美洛昔康含有与羰基共轭的烯醇式羟基美洛昔康含有与羰基共轭的烯醇式羟基, 具有羧酸性质具有羧酸性质, 可用氢氧化钠滴定液滴定可用氢氧化钠滴定液滴定 本品甲醇本品甲醇,乙醇乙醇,丙酮及水中难溶丙酮及水中难溶, 定量过量的氢氧化钠滴定量过量的氢氧化钠滴 定液溶解后定液溶解后, 用盐酸滴定液回滴定用盐酸滴定液回滴定 2. 测定法测定法 本品约本品约0.4g, 精密称定精密称定, 精密加氢氧化钠滴定液精密加氢氧化钠滴定液(0.1mol/L) 25ml, 微温溶解微温溶解, 加中性乙醇加中性乙醇(对溴麝香草酚蓝指示液对溴麝香

31、草酚蓝指示液 显中性显中性)100ml与指示液与指示液10滴滴,用盐酸滴定液用盐酸滴定液(0.1mol/L) 滴定滴定; T=35.14mg School of Pharmacy Jiamusi University Room of Pharmaceutical analysis (三) 水解后剩余量滴定法 1. 原理原理 2NaOH + H2SO4Na2SO4 + 2H2O 2. 测定法测定法(USP32-NF27) 本品约本品约1.5g,精密称定精密称定,加氢氧化钠滴定液加氢氧化钠滴定液(0.5mol/L) 50.0ml,缓缓煮缓缓煮 沸沸10min,放冷放冷,加酚酞指示液加酚酞指示液,用硫酸滴定液用硫酸滴定液(0.25mol/L)滴定滴定; T=45.40mg COOH OCOCH3 COONa OH + 2 NaOH + CH3COONa School of Pharmacy Jiamusi University Room of Pharmaceutical analysis 3. 两步滴定法两步滴定法水解后剩余量滴定法的改进水解后剩余量滴定法的改进 阿司匹林片剂阿司匹林片剂: 水解产物水杨酸及醋酸水解产物水杨酸及醋酸;稳定剂酒石酸或枸橼酸稳定剂酒石酸或枸橼酸 两步滴定法两步滴