【doc】猴头菌液体培养复因子筛选

1、猴头菌液体培养复因子筛选中国食用蓠ediblefung1ofchinavo1.10,no.3猴头菌液体培养复因子筛选乔德生李绍木吕翠兰赵洪斌吴甲初解思泌张长铠(山东惠民地区农科所256615)(山东农科院济南)(山东大学济南)自t0yew于1968年发明了在液体培养基质里培养真菌菌丝体的技术以来,食用菌的液体培养发展很快,其用途越来越广泛.但名贵食用菌猴头的复因子液体培养,未见报道.为探讨影响猴头菌敞体培养产量的主要因子和筛选高产组合,拟采用正交试验.已获得了培养8天,生物量占菌液32.95%的高产组合.现汇综如下t一,材料与方法(一)培养基.斜面培养基为pda另加0.5%的蛋白胨,ph6.5

2、.摇瓶培养基.a1玉米粉2%,a2黄豆粉2%,a3玉米粉,黄豆粉各1%混合,a4麸皮5%,均过60目筛.辅料皆为葡萄糖2%,蛋白胨o.2%,酵母粉0.2oi,kh2po40.15%.mgsol0.075%.(二)试验设计:按混合水平l8(4x2)设计四水平一因素及二水平三因素试验.8个组合,两次重复,随机置于wdp型微生物多用培养箱摇求内培养.因素水平见1.表1试验因素及水平表水j3d索abcd培养疑菌种接种量(m1)pha1a2a3a4b1b2c1(1o)c2(5)d1(7?0)d2(5.0):l引j中国扳科院土肥所b2引自黑龙江黑河农科所(三)培养条件:摇瓶培养基各主料均煮沸3o钟.6层纱

3、布过滤,取滤液补足水加辅料,按设计调ph,摇瓶培养基装量150ml/500ml,6层纱布封口,1.2kg/cm压力灭菌3o分钟.选优良猴头斜面母种,在无菌条件下刮取菌苔和少量培养基,每支用10ml无菌水制成菌悬液,摇匀后照设计接种.尔后恒温穗置24小时,摇床转速为180rpm,t=250.5,培养192小时取样.(四)测定方法:菌球密度的测定:用扩口式大吸管吸取5ml菌液注入内径为9.3cm的培养皿内,加等量水摇匀.皿下放一张划有若干红色0.25cm方格的黑色底纸,置双目解剖镜下统计,梅花形五点取样,每点四格,n为2o格菌球数,按2.718n求取菌球密度,测量四次取平均值.同时用1/2mm测尺

4、测量菌球直径,方法同前.生物量测定:吸取10ml均匀菌液,置3000转/分离心10分钟,得湿重,再于105烘至恒重,用千分之一天平称千重,生物量皆为两次测定结果的平均值.以各试验菌球密度,湿墼的最大值分别为5o分,则y=(组合菌球密度/同次试验最大密度+组合湿重/同次试验最大湿重)50,综合评分.y值大产量高.(五)验证试验.选正交试验直观分析结果r值最大的a因素的四种培养基,分别和k值较大的菌种b2,接种量c1,ph值d2组成理论新组合,重复三次,随机排列.二,试验结果(一)试验因素主次分析;从表2直观分析中看出,四因素极差r值均大于re值,表明试验结果可靠.而且a因素r值为46.17,显着

5、大于其他三因素b,c,d的r值,说明因素a在猴头液体培养中效应最大,对猴头产量影响起主要作用.其主次顺序为因素a>b>c>d.(=)试验组合培养观察.试验得知,培养192小时,a2,a3,al三种培养基组合均表现菌液粘稠,黄棕色,均匀,满布菌球,菌球颜色较醪液色浅,芳香味浓郁,ph降至3.84.4.而培养基at虽满布菌球,但菌液清稀,粘度差,颜色较前三种浅,ph值降至4.35.1,较aha3,a4微高.四种培养基较培养前菌液颜色均变深.但培养前ph值为7.o的其菌液颜色又均深于ph值为5.o的颜色,从直观分析结果中(表2)看出,麸皮培养基al菌球直径大,密度高,菌丝生物量重,

6、同玉米培养基a-相比差异明显.表明猴头菌在液体培养中适当营养对产量影响显着.(三)直观分析:从表2得知,各因素中最大的水平为a4=88.62(a2为86.82),b2=80.461=79.46,d2=78.86,所以本次试验表明,猴头菌液体培养的高产组合应是a,b2,c和d2,其次是a22,c1和d:组合.其他因子结果关系详见图示.第10卷第3期中国食用菌edibiefungiofchina表2l8(42)正交表猴头液体培养结果直观分析因素组abcde随箩直径菌球密度湿xs干重y(ram)!延堡!g11l1111110.40.084.791.1540.08203.4733.9133?69212

7、2220.40.085352.1920.14752.475o.0051?243211220.4土0.0713863.0770.16692.7094?4903?604222110.4土0.0713002.3730.13278.0182.0980?c55312120.40.0811112.2570.11972.2471.4971.876321210140.0813722.9980.158g1.019208701?947412210.50.0912202.4610.15i79.9277.3978.66842l12054-00814523.2590.20598.1693.c58?6142.4669.5

8、479.4671.0571.08k86.8280.4670?4578?8678?8381.9088.63r46.1711.0i9.0i7.8i7?76嘲囊对嘏丛生长t的彩喃(四)组合问差异显着性测验:表3中组合间差异显着性测验表明,以第8号组合为最优,产量最高.其次是第3号组合.第8号组合由培养基a.菌种bz,接种量c1,ph值d.组成.这同直观分析结果相比除d因素不同外,其他完全一致,也表明ph值在猴头液体培养r1对产量影响不是主要因素.因此可用试验最佳ph值dz配成新高产组合.其他组合详见表3.表5组合差异显着性测验注:s=1.1336表4方差分析表水平xa4a2a3a188.6386.8

9、281.e042.46显着性0.050.01aabc注:s=0?80j6(五)方差分祈及a因素测验,从表4中看出,正交试验中因素a,b,c,d的f值均大于fo.0l值,表明四因素水平问的差异均达极显着.因素a有四个水平,故再进一步比较.表5表明培养基a.,a2两水平较优与a3,al呈极显着差异.这同直观分析是一致的.表明在液体培养中a.,az是适合猴头生长的培养基.它对生物量的提高起着重要作用.另则菌种b2,接种量c1,phd2分别极显着优于b1c2d2,因此方差分析所得高产组合仍是a4bzc1和d2,其次是a4b2c1d2.(六)验证试验分析.把三次霓复试验结果取平均数列入表6,按其产量出高

10、到低排列位次.从表六中看出,验证试验的菌球密度,菌球工径部干,湿重等指标均同正交试验结果趋向一致,且平22中国食用菌ediblefiing!ofchinavo1.10.no.3木屑栽培香菇高产技术研究陈秀炳(稿建省尤溪林业科学研究所)刘叶高(福建省尤溟县食用茁开发办公室)摘要本文对木屑栽培香菇优质,高产,稳产技术进行初步研究,得出l(1)cr20,cro4,l26,0.87,l7等五个菌株是木屑栽培香菇高产优质的苗抹;(2)以问叶树木屑76,麦皮2o,蔗糖1.5%,碳酸钙2%,过磷酸钙0.2,尿素0.3%为较佳配方,生物效率高速15o%;(3)装袋前培养料先堆剞发酵处理是控制污染的最有效方法;

11、(4)茵袋喷施浓度25ppmfi柠檬酸,10ppm的三干烷醇,20ppm赤霉素溶液,能促进香菇子实体原基分化,增产效果显着.近年来,福建省在实施星火计划中,把发展木屑袋栽香菇作为主要的项目来抓.但由于袋栽香菇历史较短,经验不足,特别是如何根据香菇的生物学特性进行科学管理,缺乏一整套相应的技术,表现在产量上的变幅较大,每袋产鲜菇0.251.5公斤不等(生物学效率在25-100%).为了提高栽培技术.推动香菇生产的进一步发展,笔者对木屑栽培香菇中高产技术问题进行了一些初步的研究,现报告如下.一,材料与方法(一)供试蓖株:cr20,cr04,l26,l7,087,cr02.(二)培养基组成,(1)母

12、种培养基pda,(2)原种培养基常规,即培养基配方一i(3)袋栽培养料配方设计(表1).(三)杂菌防治试验:先将配方额定木屑与麦皮加水拌匀,料水比为1:1.2.堆积发酵,待温度升到6o后,再翻堆发酵,连继翻堆2次,使发酵均匀,温度下降56后,加适量糖和碳酸钙并调节水和ph值后立即装袋.并且对发酵前后的培养成分进行测定,其测定方法按常规分析法,ca,k,mg用子吸收光谱法.(四)激素增产试验;选用25ppm柠檬酸,loppm三十烷醇和20ppm赤霉素,对香菇喷施.设3个重复,每个重复5o袋,共15o袋,用清水作对照.htj,喷壶每个理每次喷1000ppm,每次喷洒3天后开始浇水管理.每收完一潮菇

13、后让菌袋干燥一周左右,然后在消水中浸泡24小时,又分剖重复喷珐同等量!硷法.表1培养基不同配方设计培养基干料组成(%)配方木屑麦皮蔗糖尿素碳酸钙过磷酸钙(2ii)试验设置:分为菌株筛选,培养基配方组合,杂菌防治和采用激素提高出菇产量四个步骤进行.二,试验结果一一(一)菌株筛选试验:从1986年开始,先后从各地引进1o个袋栽香菇优良菌株,经过初筛后,选出6个菌株在木屑培养基上进行生产性能比较试验.1.各菌株菌丝生长情况比较.采用等量的斜面培养基,常规木屑袋栽培养基(配方1),常规操作.试验结果cr20菌株的菌丝生长抗杂力优于其他菌株,在pda培养基上,cr20菌株9天满管,而其他菌株要1o一13天.原种的长势也强于其他菌株,菌丝粗壮洁白,抗杂能力强.2.各菌株产量比较;各菌栋原种长满瓶后约7均产量(高于正交试验结果.证明正交试毪可靠.各组合位次也表明麸皮培养基组合(a4b2cld2)最好,其次是黄豆粉培养基组合(a2b2cld2),玉米粉培养基组合较差.这同正交试验结果是一致的.表6验证试验结果表(重复三次)培养基菌球密度菌球直径湿重千重一位(a)(个/m1)叉s(mm)(g/lom1)(g/m1)三,小结与讨论猴头液体培养中,培养基,菌种,接种量ph值适当时,对产量影响均有显着促进作用.在选定适宜猴头生长的培养基后,选接优良菌株和加大接种量对提