第5章 致病菌的检验6——革兰氏阴性微需氧和厌氧菌

1、 第第1212章章 革兰氏革兰氏阴性阴性微需氧和厌氧菌微需氧和厌氧菌 n本属菌共包括本属菌共包括8个属和个属和1个科：个科：1、弯曲杆菌属弯曲杆菌属，2、 水螺菌属，水螺菌属，3、螺菌属，、螺菌属，4、固氮螺菌属，、固氮螺菌属，5、海洋、海洋 螺菌属，螺菌属，6、蛭弧菌属，、蛭弧菌属，7、吸血弧菌属，、吸血弧菌属，8、螺杆螺杆 菌属菌属，以及拟杆菌科。，以及拟杆菌科。 n在医学检疫上有意义的是在医学检疫上有意义的是弯曲杆菌弯曲杆菌和和螺杆菌属螺杆菌属。 第第1节节 弯曲杆菌属弯曲杆菌属 Campylobacter 一类呈逗点状或一类呈逗点状或S形的革兰氏阴性杆菌，广泛分布于动物界，其中形的革兰

2、氏阴性杆菌，广泛分布于动物界，其中 有些可引起动物和人类腹泻、胃肠炎和肠道外感染。有些可引起动物和人类腹泻、胃肠炎和肠道外感染。 目前弯曲菌属有目前弯曲菌属有18个种（含亚种），对人类致病的主要是个种（含亚种），对人类致病的主要是空肠弯空肠弯 曲菌曲菌和和胎儿弯曲菌胎儿弯曲菌的胎儿亚种，前者引起人类急性腹泻，后者的胎儿亚种，前者引起人类急性腹泻，后者 在免疫功能低下时可引起败血症、脑膜炎等，其次是在免疫功能低下时可引起败血症、脑膜炎等，其次是胎儿弯曲胎儿弯曲 菌菌和和大肠弯曲菌大肠弯曲菌等。等。 1983年分离的年分离的幽门弯曲菌幽门弯曲菌则与慢性胃炎和则与慢性胃炎和 胃溃疡、十二指肠溃疡有关

3、。胃溃疡、十二指肠溃疡有关。 兽医临床上常见的有五个种（含亚种）：空肠弯曲杆菌、胎儿弯兽医临床上常见的有五个种（含亚种）：空肠弯曲杆菌、胎儿弯 曲杆菌（胎儿亚种和性病亚种）、小肠弯曲杆菌、幽门弯曲菌。曲杆菌（胎儿亚种和性病亚种）、小肠弯曲杆菌、幽门弯曲菌。 其中以其中以空肠弯杆菌最多见空肠弯杆菌最多见，胎儿亚种次之。，胎儿亚种次之。 弯曲杆菌属弯曲杆菌属 一、形态与染色一、形态与染色 1、0.2-0.41.5-3.0m； G-, 呈呈弧形、弧形、S形或海鸥形或海鸥 展翅状展翅状，不易着色；，不易着色； 2、无芽孢，一端或两端、无芽孢，一端或两端 各有一根鞭毛，运动活各有一根鞭毛，运动活 泼，形

4、态似霍乱弧菌；泼，形态似霍乱弧菌； 3、从微需氧到厌氧，、从微需氧到厌氧， CO2有利于其生长有利于其生长。 二二 培养特性培养特性 n微需氧，最适生长环境微需氧，最适生长环境: 氧气氧气5、二氧化碳、二氧化碳10、氮、氮 气气85；通常；通常42初分离空肠弯和大肠弯曲菌，其他初分离空肠弯和大肠弯曲菌，其他 菌株菌株37生长良好。生长良好。 n营养要求高，普通培养基不生长，常用营养要求高，普通培养基不生长，常用含头孢哌酮的含头孢哌酮的 选择性培养基，选择性培养基，以抑制肠道正常菌群。含血的以抑制肠道正常菌群。含血的Skirrow 培养基、头孢哌酮培养基、头孢哌酮-万古霉素万古霉素-两性霉素琼脂

5、培养基两性霉素琼脂培养基 （CVA）和不含血的碳）和不含血的碳-头孢哌酮头孢哌酮-去氧胆酸盐去氧胆酸盐 （CCDA）、碳基选择性培养基（）、碳基选择性培养基（CSM）和半固体动）和半固体动 力培养基等常用于分离该属的细菌。力培养基等常用于分离该属的细菌。 三三 生化特性生化特性 氧化酶和触酶阳性，可还原硝酸盐，氧化酶和触酶阳性，可还原硝酸盐，不分解、不发酵各种糖类不分解、不发酵各种糖类，不分解尿素。，不分解尿素。 四四 抵抗力抵抗力 本属细菌抵抗力弱，对一般消毒剂敏感，但耐寒，本属细菌抵抗力弱，对一般消毒剂敏感，但耐寒， 在在4冰箱或水中可存活冰箱或水中可存活4周周。 本菌具有本菌具有粘附定居

6、粘附定居和和入侵上皮细胞入侵上皮细胞的能力，通过产生的能力，通过产生 的的肠毒素、细胞毒素肠毒素、细胞毒素和和内毒素内毒素等多种毒力因子致病，等多种毒力因子致病， 病变部位通常在空肠和回肠，也可蔓延至结肠。病变部位通常在空肠和回肠，也可蔓延至结肠。 五五 毒力毒力 六六 致病性致病性 可引起人畜急性传染病可引起人畜急性传染病弯曲杆菌病弯曲杆菌病。 1、带菌者：动物和人类，经肠道或生殖道排出；、带菌者：动物和人类，经肠道或生殖道排出； 2、感染：经口、感染：经口(污染的食物或水污染的食物或水)；经产道感染婴儿；经产道感染婴儿； 3、临床症状：潜伏期、临床症状：潜伏期1-10d，一般，一般3-5d

7、。 （1）肠炎：肠炎：腹泻、腹痛、呕吐及发热等，初为水样，继而转腹泻、腹痛、呕吐及发热等，初为水样，继而转 为粘液便，少数呈脓血便。为粘液便，少数呈脓血便。 （2）肠道外感染：肠道外感染：可致菌血症、心内膜炎、脑脊髓膜炎、血可致菌血症、心内膜炎、脑脊髓膜炎、血 栓性静脉炎、关节炎、肺脓肿和腹膜炎等。栓性静脉炎、关节炎、肺脓肿和腹膜炎等。 （3）母畜感染：母畜感染：上呼吸道症状、肺炎、发热及菌血症；死胎上呼吸道症状、肺炎、发热及菌血症；死胎 或流产；新生畜败血症及或流产；新生畜败血症及脑脊髓膜炎脑脊髓膜炎。 七七 微生物学检查微生物学检查 1. 标本采集标本采集 采集采集粪便及剩余食物粪便及剩余

8、食物， 立即送检，或将标立即送检，或将标 本接种于本接种于卡卡-布运送布运送 培养基培养基中送检；中送检； 对于高烧和脑膜炎者，对于高烧和脑膜炎者， 于用药前抽取于用药前抽取静脉静脉 血或脑脊液血或脑脊液，注入，注入 布氏肉汤送检。布氏肉汤送检。 2. 细菌检验细菌检验 （1）显微镜检查）显微镜检查 悬滴法动力检查：显微镜下观察有无螺旋状或投标样运悬滴法动力检查：显微镜下观察有无螺旋状或投标样运 动，动，脑脊液标本脑脊液标本经离心沉淀后再制成经离心沉淀后再制成悬滴标本悬滴标本检查；检查； 染色标本检查：取新鲜粪便或脑脊液染色标本检查：取新鲜粪便或脑脊液离心沉淀物涂片离心沉淀物涂片、 革兰氏染色

9、，找革兰氏阴性、弯曲呈革兰氏染色，找革兰氏阴性、弯曲呈S状或螺旋状杆菌，鞭毛状或螺旋状杆菌，鞭毛 染色染色见一端或两端单根鞭毛见一端或两端单根鞭毛； （2）分离培养分离培养 将标本直接接种于选择性培养基上，也可将标将标本直接接种于选择性培养基上，也可将标 本过滤后培养，本过滤后培养，弯曲菌形成的菌落为灰色、扁平、表面湿润、弯曲菌形成的菌落为灰色、扁平、表面湿润、 圆形凸起、边缘不规则，常沿穿刺线蔓延生长，血平板不溶圆形凸起、边缘不规则，常沿穿刺线蔓延生长，血平板不溶 血，布氏肉汤中呈均匀混浊血，布氏肉汤中呈均匀混浊。 3. 细菌鉴定细菌鉴定 n弯曲菌属的鉴定较复杂，必须综合多种试验确定。通常弯

10、曲菌属的鉴定较复杂，必须综合多种试验确定。通常氧化酶氧化酶 阳性、革兰染色阴性、弯曲呈阳性、革兰染色阴性、弯曲呈S形或螺旋形形或螺旋形，进一步鉴定试验：，进一步鉴定试验： 马尿酸盐水解试验：鉴别空肠弯曲菌马尿酸盐水解试验：鉴别空肠弯曲菌空肠亚种空肠亚种和和多氏亚种多氏亚种的重的重 要试验；前者阳性，后者阴性。要试验；前者阳性，后者阴性。 醋酸吲哚水解试验：空肠弯曲菌为阳性而胎儿弯曲菌为阴性。醋酸吲哚水解试验：空肠弯曲菌为阳性而胎儿弯曲菌为阴性。 萘啶酸、头孢噻吩耐药试验：萘啶酸、头孢噻吩耐药试验： 空肠弯曲菌和大肠弯曲菌对萘啶酸敏感，对头孢噻吩耐药；空肠弯曲菌和大肠弯曲菌对萘啶酸敏感，对头孢噻

11、吩耐药； 胎儿弯曲菌对萘啶酸耐药而对头孢噻吩敏感。胎儿弯曲菌对萘啶酸耐药而对头孢噻吩敏感。 近来出现了对萘啶酸耐药的空肠弯曲菌，应结合醋酸吲哚水解试近来出现了对萘啶酸耐药的空肠弯曲菌，应结合醋酸吲哚水解试 验进行鉴定。验进行鉴定。 八、治疗八、治疗 弯曲菌感染大多呈轻症和自限性，一般不需特异性治疗。弯曲菌感染大多呈轻症和自限性，一般不需特异性治疗。 体外试验体外试验显示，显示，头孢菌素和青霉素耐药，环丙沙星治头孢菌素和青霉素耐药，环丙沙星治 疗弯曲菌感染疗弯曲菌感染对绝大多数弯曲菌对绝大多数弯曲菌非常有效非常有效，但近年出，但近年出 现了不少耐药菌株。现了不少耐药菌株。 空肠弯曲菌通常空肠弯曲

12、菌通常对红霉素敏感，耐药率小于对红霉素敏感，耐药率小于5；而而80 以上的大肠弯曲菌对红霉素耐药。胎儿弯曲菌引起以上的大肠弯曲菌对红霉素耐药。胎儿弯曲菌引起 的全身感染可用红霉素、氨苄西林、氨基糖苷类和氯的全身感染可用红霉素、氨苄西林、氨基糖苷类和氯 霉素治疗。霉素治疗。 第第2节节 螺杆菌属螺杆菌属 Helicobacter n螺杆菌属（螺杆菌属（Hilicobacter）是一群氧化酶和触酶阳性、微）是一群氧化酶和触酶阳性、微 需氧、需氧、37生长、生长、25和和42均生长不良的革兰阴性弯均生长不良的革兰阴性弯 曲菌。曲菌。 n本属细菌最早根据形态染色、培养条件等归于弯曲菌属，本属细菌最早根

13、据形态染色、培养条件等归于弯曲菌属， 1989年年Goodwin根据其超微结构、酶活性、脂肪酸序列、根据其超微结构、酶活性、脂肪酸序列、 生长特性等的不同，建议将其从弯曲菌属中划分出来而生长特性等的不同，建议将其从弯曲菌属中划分出来而 成立一个新的属成立一个新的属Hilicobacter（螺杆菌属）。（螺杆菌属）。 n本属中现已鉴定的有本属中现已鉴定的有19个种，研究得最多、最常见的是个种，研究得最多、最常见的是 幽门螺杆菌幽门螺杆菌(H. pylori，Hp)。 幽门螺杆菌幽门螺杆菌 一、形态与染色一、形态与染色 革兰氏阴性、无芽孢、呈螺旋革兰氏阴性、无芽孢、呈螺旋 状弯曲，杆状，尤其在胃粘

14、膜状弯曲，杆状，尤其在胃粘膜 环境中，幽门螺杆菌具典型螺环境中，幽门螺杆菌具典型螺 旋形或弯曲形，但在旋形或弯曲形，但在陈旧培养陈旧培养 物中菌体可呈圆球状物中菌体可呈圆球状；多数细；多数细 菌具有位于菌体一端的多根菌具有位于菌体一端的多根带带 鞘鞭毛鞘鞭毛，运动活泼。，运动活泼。 二二 培养特性培养特性 n微需氧，有氧及无氧环境均不生长，潮湿，微需氧，有氧及无氧环境均不生长，潮湿，37，5-10 O2、5-12CO2生长良好，生长良好，5-10H2可刺激其生长；可刺激其生长； 最适温度最适温度35-37，30和和42均生长不良，此点可与其均生长不良，此点可与其 他弯曲菌区别他弯曲菌区别，生长

15、，生长pH5.5-8.5。 n普通培养基不生长，需补充血、血清、淀粉、活性炭等。普通培养基不生长，需补充血、血清、淀粉、活性炭等。 常用常用心脑浸出液琼脂、布氏琼脂、哥伦比亚琼脂心脑浸出液琼脂、布氏琼脂、哥伦比亚琼脂等。等。 n选择性培养基：改良的选择性培养基：改良的Skirrow琼脂培养基加入万古霉琼脂培养基加入万古霉 素、两性霉素和头孢磺啶。素、两性霉素和头孢磺啶。 n血平板：经血平板：经3-5d形成形成小的半透明灰色菌落，有微弱的溶小的半透明灰色菌落，有微弱的溶 血环，革兰氏染色浅血环，革兰氏染色浅。 三三 生化反应生化反应 n生化反应不活泼，氧化酶和触酶阳性，生化反应不活泼，氧化酶和触

16、酶阳性，不分解任何糖类，不分解任何糖类， 脲酶强阳性，可与本属其他细菌区别脲酶强阳性，可与本属其他细菌区别，也是检测，也是检测HP的的 快速诊断方法之一。快速诊断方法之一。 四四 抵抗力抵抗力 n对酸敏感对酸敏感，尿素可保护该菌，尿素可保护该菌，1胆盐可抑制其生长。胆盐可抑制其生长。 n耐药性：耐药性：对多粘菌素、三甲氧苄氨嘧啶、磺胺、万古对多粘菌素、三甲氧苄氨嘧啶、磺胺、万古 霉素和萘啶酸天然耐药。霉素和萘啶酸天然耐药。 n在体外药敏试验中，在体外药敏试验中，该菌对不少抗生素敏感，但体内该菌对不少抗生素敏感，但体内 用药效果不佳用药效果不佳，主要因为该菌寄生在粘液层下的胃上，主要因为该菌寄生

17、在粘液层下的胃上 皮细胞表面，皮细胞表面，抗生素不能渗入胃粘膜深层抗生素不能渗入胃粘膜深层。 n临床上治疗该菌的药物有阿莫西林、甲硝唑、克拉霉临床上治疗该菌的药物有阿莫西林、甲硝唑、克拉霉 素、四环素、呋喃唑酮等。素、四环素、呋喃唑酮等。 五五 致病因子与致病性致病因子与致病性 n该菌有较强的该菌有较强的鞭毛鞭毛动力，对胃粘膜有较强粘附力，在接近中性的动力，对胃粘膜有较强粘附力，在接近中性的 粘膜层定植，产生强活性粘膜层定植，产生强活性尿素酶尿素酶以分解尿素，在菌体周围形成保以分解尿素，在菌体周围形成保 护性氨环境，以抵抗胃粘膜上皮细胞分泌的胃酸；该菌产生的护性氨环境，以抵抗胃粘膜上皮细胞分泌

18、的胃酸；该菌产生的蛋蛋 白酶白酶能有效分解粘液蛋白，提供营养。能有效分解粘液蛋白，提供营养。 n幽门螺杆菌在胃内定植后，粘附于胃粘膜上皮细胞、通过幽门螺杆菌在胃内定植后，粘附于胃粘膜上皮细胞、通过胃肠激胃肠激 素刺激素刺激和细胞壁和细胞壁脂多糖中脂质脂多糖中脂质A的致炎作用、产生的致炎作用、产生多种酶多种酶(尿素酶、尿素酶、 蛋白酶、过氧化氢酶、脂酶和磷脂酶等蛋白酶、过氧化氢酶、脂酶和磷脂酶等)以及以及细胞毒素细胞毒素，共同作，共同作 用导致临床疾病的发生。用导致临床疾病的发生。 n主要主要引起消化性溃疡引起消化性溃疡（十二指肠溃疡、胃溃疡）、慢性活动性胃（十二指肠溃疡、胃溃疡）、慢性活动性胃 窦炎等，长期感染易发展为窦炎等，长期感染易发展为萎缩性胃炎、胃腺癌萎缩性胃炎、胃腺癌和胃粘膜淋巴组和胃粘膜淋巴组 织淋巴瘤。织淋巴瘤。 六六 微生物学诊断微生物学诊断 六六 微生物学诊断微生物学诊断 1. 标本采集标本采集 采集胃和十二指肠粘膜新鲜标本，置2ml无菌生理盐水，运输 途中不超