DOC microRNA在卵巢癌中的研究进展

1、microrna在卵巢癌中的研究进展蚌埠医学院2012年1月第37卷第1期文章编号1000-2200(2011)01-0119-04microrna在卵巢癌中的研究进展陈军莹综述,姚德生审校关键词卵巢肿瘤;微小rna;肿瘤促进因子;肿瘤抑制因子;综述中国图书资料分类法分类号r730.2文献标识码arna在生物体中广泛存在并具有重要的生物学功能.近年研究发现,rna的功能不只局限在蛋白质合成,还具有其他重要的生物学功能,如参与基因的表达调控,rna的定点修饰以及染色质的结构组织等,其中小分子rna(microrna,mirna)更是备受关注.mirna长度约为2123个核苷酸,是参与基因转录后水

2、平调控的非编码小分子单链rna,能通过与靶mrna特异性的碱基配对引起对靶mrna的降解,抑制或活化其翻译,从而对基因进行转录(或)转录后调控.mirna基因以单拷贝,多拷贝或基因簇等多种形式存在于内含子和(或)外显子或基因间隔区,约70%的mirna位于有意义的转录单位(transcriptionunit,tu).生物信息学预测人类mirna基因大约有1000多个,一个mirna可调控多个mrna,至少1/3以上的人类基因受到mirna的调控.多年来的相关研究均表明,mirna可以调控细胞的发育,分化,增殖及凋亡.通过大规模的基因组分析,mirna的各种功能角色和相应机制在不断报道中j.1卵

3、巢癌中mirna的变化和其他类型肿瘤一样,卵巢癌mirna也表达有其特殊的异常.研究者们不断地进行探索和研究.2006年,zhang等检测了227个卵巢,乳腺,黑素瘤标本中283个已知mirna基因,发现卵巢癌中有37.1%mirna基因位点有改变.2007年,iorio等通过研究证实mirna表达谱可以区分正常组织和卵巢癌组织.明显上调的是mir.200a,mir一141,mir一200c和mir一200b,而mir.199a,mir一140,mir.145和mir-125bl明显下调.同时,ovcar3卵巢癌细胞经过5一氮一2脱氧胞苷甲基化处理后,能够上调mir-21,mir.203和mi

4、r-205;这些都是在卵巢癌中过表达的mirna.这个结果提示,microrna基甲基化是其在卵巢癌中异常表达的一个可能机制.2008年,dahiya等.使用mirna芯片,在34例卵巢癌患者(包括31例浆液性癌,1例交界性浆液性癌,2例透明细胞癌)中寻找异常表达的mirna.结果:mir一221在卵巢癌中异常高表达,mir一21和几个let-7家族成员低表达.值得收稿日期2010-0912作者单位广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科,广西南宁530021作者简介陈军莹(1979一),女,博士研究生,主治医师.通讯作者姚德生,博士,教授,博士研究生导师.119?综述?注意的是,mir一21在多种肿瘤

5、中如乳腺癌,胶质母细胞瘤,肺癌,前列腺癌中均为过表达,一般认为其靶基因有抑癌基因bcl2,pten,pdcd4,而这个研究却显示mir-21在浆液性卵巢癌中明显低表达,提示mirna在不同的组织中可能履行不同的功能,是具有高度组织特异性的.giannakakis等用taqman荧光mirna芯片研究缺氧卵巢肿瘤细胞中157个成熟mirna的表达.在持续缺氧刺激的情况下mir一210是最突出的,同时该研究表明,hif信号通路参与mir一210调节.生物信息分析与体外检测证明,e2f转录因子3(e2f3),一个关键的细胞周期蛋白,受mir一210调节.e2f3蛋白水平可以被mir-210降调.重要

6、的是,我们发现卵巢癌患者的mir-210基因高频缺失(64%,n=114),并且这个基因拷贝数与mir-210表达水平的正相关.这个实验结果表明,mir-210作为缺氧反应的一个主要调节机制在肿瘤发病中起着关键作用.park等通过研究207个mirnas在60个细胞株中的表达,发现mir-200mirna家族为表达ecadherin,但不表达vimentin细胞株的特殊标志物.上皮细胞钙黏蛋白e.cadherin和波形蛋白vimentin是上皮向间叶组织过渡(emt)过程中的两个重要蛋白,emt出现在卵巢癌进展过程中,与胚胎发育中发现的过程相似.mir一200的直接靶目标是ecadherin的

7、转录抑制因子zeb1(tcf8/deltaef1)和zeb2(smad交互蛋白1sip1/zfxh1b)的mrna.mir-200的异位表达能上调ecadherin并减少他们的活动力.相反,抑制mir一200减少ecadherin表达,增加vimentin表达,并导致emt,这表明mir一200是功能强大的标记和上皮肿瘤细胞表型的决定因素.2009年,wyman等检测了19例浆液性上皮性卵巢癌(osc),4例透明细胞卵巢癌(occ)和10例子宫内膜样卵巢癌(oec),发现在这3种卵巢癌亚型中,共同过表达的有37个mirna.共同低表达的有21个mirna.merritt等用定量rtpcr检测卵

8、巢癌,肺癌,乳腺癌患者标本中的dicer和drosha的mrna水平,结果发现dicer和drosha的表达与患者的预后密切相关,dicer和(或)drosha的低表达往往提示预后不良.卵巢癌组织中dicer和drosha的表达与正常卵巢组织相比分别下跌60%和51%,同时,多因素分析表明,低dicer的表达(hr2.10;p=0.02)是卵巢癌患者一个不良的独立预后因素.guo等的研究显示,卵巢癌es-2细胞系的mirna-9明显下调,研究者将mir-9前体通过载体导入es一2细胞,使120其在细胞内过表达,结果es一2细胞生长明显受抑制.同时研究证实nf-kappab1是mir-9的重要靶

9、基因,nfkappab1的mrna和蛋白水平直接受mir-9调控,抑制mir.9可导致nfkappab1表达水平增加.kuo等使用高密度250k单核苷酸多态性芯片评估37个卵巢浆液性肿瘤(包括sbt,lg和hg).hg比lg组更常见染色体不稳指数(dna拷贝数变化)升高.lg浆液性癌中常见chlp36纯合缺失,在sbt中这种缺失却很少见.此区域包含mir一34a.研究者将mir.34a导入细胞后,细胞生长明显受抑,同时,mir.34a的靶基因ccdn1,cdk6和bcl2的表达在导入mir一34a24h后就开始明显受抑.这个结果则提示mir一34a功能受限是浆液性卵巢癌发生发展中的一个分子事件

10、.2mirna与卵巢癌的诊断卵巢癌的诊断一直是学术上的难题,67%的卵巢癌患者在诊断时已属进展期,而mirna的研究将带来新的诊断因子.resnick等为确定血清mirna作为卵巢癌的标志价值,在血清和组织库中选择了28个经组织学证实的卵巢癌标本,确定血清收集在治疗之前,并选取了15个正常标本为对照.用实时pcr和荧光阵列人mirna面板检测9个癌样本和4个正常标本中的mirna,发现21个mirnas在正常人和患者的血清之间存在差异表达.在剩下的19个肿瘤标本和11个正常标本中用实时pcr方法检测这21个mirna.结果8个mirna在癌症与正常标本中存在差异表达,mirna一21,92,9

11、3,126,29a在癌症患者血清中显着过表达(p<0.o1).mirna一155,127和99b都显着低表达(p<0.o1).此外,mirna-21,92,93在3个术前正常表达ca125的患者中存在过表达.证明血清mirnas可以鉴别诊断卵巢癌.mirnas-21,92,93是癌基因与潜在的治疗靶基因.由于mirna在血清中表达稳定.lodes等用芯片评价5种癌(前列腺癌,大肠癌,卵巢癌,乳腺癌和肺癌)血清mirna表达.该芯片实验技术既不需荧光也不需电化学信号,可以轻松辨别包括新mirna的所有mirnas表达;1ml血清足够让检测所有表达mirnas而无需任何扩增技术,并且,

12、mirna的表达谱可以正确区分正常和癌症患者的样本.这一研究为卵巢癌的筛查和诊断又提供了新的方法依据.3mirna与卵巢癌的预后mirna能预测卵巢癌患者的预后.flavin等发现,在浆液性卵巢癌中,mir-29b表达改变;mir-29b在浆液性卵巢癌的下调,往往提示患者预后不良.lu等钊分析了211例卵巢癌患者标本中lin-28,lin一28b的表达及其与let-7a的成熟,igf的表达,疾病特征/结局之间的关系.分析显示lin一28和pri-/prelet-7a?3呈正相关;lin-28b(而不是lin-28)和成熟let-7a负相关.lin-28b和igf.i1的表达正相关,没有证据表明

13、lin一28b和igfi或jbengbumedcoll,january2012,vo1.37,no.1胰岛素样生长因子结合蛋白-3(igfbp.3)相关.进一步研究显示lin一28b的表达与疾病进展及死亡相关,高lin一28b表达的患者生存率较低.这些体外结果显示lin-28家族能阻止let-7a成熟的过程.lin一28b是卵巢癌患者预后不良的标志物.lin一28b和igf-ii的关系显示生长因子可以调解lin一28b对肿瘤生长的影响.lu等使用实时甲基特定的聚合酶链反应和实时反转录pcr检验214个上皮性卵巢癌患者标本,分析和评估dna甲基化对let-7a一3基因的影响,以及let-7a一3

14、甲基化和患者生存结果的相关性.结果发现let-7a甲基化让let-7a表达稍受影响,但影响不大.不过let-7a-3甲基化与igf.ii表达呈负相关,并和igfbp-3表达正相关.let-7a一3高甲基化组的患者比低甲基化组的患者生存率高,是独立预后因素.shen等研究了42个家族性乳腺癌患者及82个家族卵巢癌患者标本,发现乳腺癌患者至少有1个mir.146a等位基因变异的人的诊断年龄比无等位基因变异的年龄早(年龄中位数分别为45与56,p=0.029);卵巢癌患者至少有1个mir一146a等位基因变异的人的诊断年龄比没有基因变异的人年轻(年龄中位数分别为45和50,p=0.014).进一步分

15、析表明,变异基因组中成熟mir一146a表达增加,mir一146a能绑定到brca1与bttca2的mrna3非翻译区(utr)并可能调整他们的表达.耐人寻味的是,brca1与mir-146a在变异的c等位基因上的结合比正常的g等位基因增强很多(p=0.046).这个研究表明,有c等位基因的家族性乳腺癌,卵巢癌患者可能伴mir-146a高水平,同时让她们有更早的发病年龄.nam等用基因芯片和rna分析,对比研究20例浆液性卵巢癌患者和8例良性子宫疾病患者的mirna表达.结果发现2组mir一21,mir一125a,mir一125b,mir一100,mir一145,mir一16,mir-99a表

16、达差异.此外,一些mirnas表达水平与浆液性卵巢癌患者生存相关:mir一200,mir一141,mir一18a,mir一93和mir-429高表达,let-7b和mir.199a的低表达提示预后不良(p<0.05).hu等通过对55例晚期卵巢肿瘤的mirna表达谱分析,发现mir-200簇群(mir一200a,mir-200b和mir-429)与癌症的复发和总体生存率密切相关.进一步目标分析表明mir-200簇群的多个靶基因与肿瘤的发展相关.mir-200簇群能抑制卵巢肿瘤细胞迁移,低水平mir一200可能预示预后不良.eitan等_2对57个接受包含铂类的一线化疗的患者进行了mirn

17、a与预后的相关研究.其中,一期19例,三期38例.发现5个mirna与无复发或生存率(p<0.05)相关,其中4个提示预后不良:mir-23a,mir-27a,mir一21和mir-24.2;还有1个能提示较好的预后:mir-449b.而mir?27a的高表达提示极差的预后.蚌埠医学院2012年1月第37卷第1期4mirna与卵巢癌的治疗卵巢癌遵循手术为主的综合治疗方法,化疗是其中一个重要方法,而化疗耐药直接影响治疗效果及患者预后.mirna的深入研究有望对化疗耐药提供新的依据和解决方案.rang等口发现在卵巢癌中mir-214经常异常表达,并且能够诱导细胞生存和顺铂耐受,可能机制是通过

18、抑制靶基因pten,下调pten蛋白激活akt通路.使用akt抑制剂,api.2/triciribine或缺乏3的pten蛋白,能很大程度上抑制mir-214诱导的细胞生存.sorrentino等用高通量mirna芯片检测紫杉醇一(a2780tax,a2780tc1和a2780tc3)和顺铂耐药(a2780cis)细胞的mirna谱,然后用qpcr和northernblot验证结果.结果发现,6个mirnas(1et-te,mir一30c,mir-125b,mir一130a和mir一335)出现在所有的耐药细胞株中.let-7e在a2780tax细胞中上调,但在其他细胞株中下调.mir-125

19、b则完全相反,在a2780tax细胞中下调,但在其他细胞株中上调.mir一30c,mir一130a和mir一335在所有的耐药细胞株中下调.mir一130a的下调能激活化疗耐药基因mcsf.这个结果显示卵巢癌耐药与mirna表达谱相关,mirna芯片技术能作为一个判断预后的工具,可以监视化疗效果.chen等使用从卵巢癌的恶性腹水及实体瘤中分离出来的eoc细胞,发现mir-199a能调节ikkbeta的表达.ikkbeta是tlr?myd88-nfkappab通路重要的功能因子,能使eoc细胞分泌促炎/促肿瘤生长因子,因此促进肿瘤恶化和化疗耐药的一个主要因素.boren等评估了6种常用的化疗药物

20、(顺铂,阿霉素,拓扑替康,紫杉醇,多西他赛和吉西他滨)在16个ovca细胞株中的体外增殖疗效.结果27个mirnas表达与一个或多个化疗药物相关(p<0.05).这些mirnas的预测目标包括52个在以往研究中报道与化疗有关的mrna,涉及影响癌细胞细胞毒性,致癌,细胞有丝分裂,p53信号,生长和浸润.5展望mirna已成为肿瘤研究领域中的热点,但目前人们对mirna自身调控机制的认识仍较肤浅,而其在卵巢癌中的研究也极待深入,mirna靶基因的研究和自身的调控机制更是研究领域的巨大难题,但是,毫无疑问,mirna性质稳定,功能重要,与肿瘤关系密切,一些mirna可以作为诊断的标志分子或成

21、为新的治疗靶点,深入的研究必然对卵巢癌的发病机制有更进一步的了解,有利于对卵巢癌患者进行早期诊断和判断预后,进行个体治疗,为卵巢癌的研究带来新的前景.参考文献1vanmila,doevendanspa,sluijterjp.thepotentialofmodulatingsmallrnaactivityinvivoj.minirevmedchem,2009,9(2):235248.2ngek,wongcl,maes,eta1.micrornasasnewplayersfordiagnosis,prognosis,andtherapeutictargetsinbreastcancer121j.j

22、oncol,2009,2009:305420.zhangb,stellwagej,panx.largescalegenomeanalysislevealsuniquefeaturesofmicrornasj.gene,2009,443(1/2):100109.zhangl,huangj,rangn,eta1.micrornasexhibithighequeneygenomiealterationsinhumancancerj.pmcnatlacadsciusa,2006,103(24):91369141.ioriomv,visoner,dilevag,eta1.mierornasignatur

23、esinhumanovariancancerj.cancerres,2007,67(18):869987o7.dahiyan,shermanbaustca,wangtl,eta1.micrornaexpressionandidentification0fputivemirnatargetsinovariancancerj.plosone,2008,3(6):e2436.giannakakisa,sandahzopoulosr,greshoekj,eta1.mir-210linkshypoxiawithcellcycleregulationandisdeletedinhumanepithelia

24、lovariancancerj.cancerbidther,2008,7(2):255264.parksm,gaurab,lengyele,eta1.themir-200familydeterminestheepithelialphenotypeofcancercellsbytargetingthee-cadhefinrepressomzeb1andzeb2j.genesdev,2008,22(7):894907.wymansk,parkinrk,mitchellps,eta1.repertoireofmicrornasinepithelialovariancancerasdetermined

25、bynextgenerationsequencingofsmallrnaednalibrariesj.plosone,2009,4(4):e5311.merrittwm,linyg,hanly,eta1.dicer,drosha,andoutcomesinpatientswithovariancancerj.n.engljmed,2008,359(25):26412650.guolm,puy,hanz,eta1.micmrna-9inhibitsovariancancercellgrowththroughregulationofnfkappab1j.febsj,2009,276(19):553

26、75546.kuokt,guanb,fengy,eta1.analysisofdnacopynumberalterationsinovarianseroustumorsidentifiesnewmoleculargeneticchangesinlowgradeandhigh-gradecarcinomasj.cancerres,2009,69(9):40364042.resnickke,aiderh,haganjp,eta1.thedetectionofdifferentiallyexpressedmicmrnasfromtheserumofovariancancerpatientsusing

27、anovelreal-timepcrplatformj.gynecoloncol,2009,112(1):5559.lodesmj,caraballom,suciud,eta1.detectionofcancerwithserummirnasonanoligonucleotidemicroarrayj.plosone,2009,4(7):e6229.flavinr,smythp,barrettc,eta1.mir-29bexpressionisassociatedwithdisease-freesurvivalinpatientsthovarianserouscarcinomaj.intjgy

28、necolcancer,2009,19(4):641647.lul,katsarosd,shaverdashvilik,eta1.pluripotentfactorlin-28anditshomologuelin-28binepithelialovariancancerandtheirassociationswithdiseaseoutcomesandexpressionoflet-7aandigfiij.eurjcancer,2009,45(12):22122218.lul,katsarosd,delalongraisia,eta1.hypermethylationoflet-7a-3ine

29、pithelialovariancancerisassociatedwithlowinsulinlike叫=1rlrlrlrlrlrlrlrlrlrlrl11111111122growthfactor-expressionandfavorableprognosisj.cancerres,2007,67(21):1011710122.shenj,ambrosonecb,diciocciora,eta1.afunctionalpolymorphisminthemir一146ageneandageoffamilialbreast/ovariancancerdiagnosisj.carcinogene

30、sis,2008,29(10):19631966.namej,yoonh,kimsw,eta1.mierornaexpressionprofilesinserousovariancarcinomaj.clincancerres,2008,14(9):26902695.hux,macdonalddm,huettnerpc,eta1.amir-200micrornaclusterasprognosticmarkerinadvancedovariancancerj.gynecoloncol,2009,114(3):457464.eitanr,kushnirm,lithwick-yanaig,eta1

31、.tumormicrornaexpressionpatternsassociatedwithresistancetoplatinumbasedchemotherapyandsurvivalinovariancancerpatientsj.gyneeoloncol,2009,114(2):253259.jbengbumedcoil,january2012,vo1.37,no.1yangh,kongw,hel,eta1.micrornaexpressionprofilinginhumanovariancancer:mir-214inducescellsurvivalandcisplatinresi

32、stancebytargetingptenj.cancerres,2008,68(2):425433.sorrentinoa,liucg,addarioa,eta1.roleofmicrornasindrug-resistantovariancancercellsj.gynecoloncol,2008,111(3):478486.chenr,alveroab,silasida,eta1.regulationofikkbetabymir一199aaffectsnfkappabactivityinovariancancercellsj.oncogene,2008,27(34):47124723.b

33、orent,xiongy,hakama,eta1.micrornasandtheirtargetmessengerrnasassociatedwithovariancancerresponsetochemotherapyj.gynecoloncol,2009,113(2):249255.(本文编辑刘畅)文章编号10002200(2012)01-0122-04?综述?产超广谱i3一内酰胺酶细菌耐药性的检测进展石莹,张玉心.夏俊关键词p-内酰胺酶;细菌;耐药性;综述中国图书资料分类法分类号r378文献标识码a自40年代p一内酰胺类抗生素青霉素首次被发现并在临床应用以来,b一内酰胺类抗生素家族不断发展和壮大.b一内酰胺类抗生素在临床上的广泛应用,有效控制了细菌感染性疾病对人类生命的威胁.但随其广泛应用,致病菌不断更新其耐药本领,以求”适者生存”,产生的超广谱b一内酰胺酶(extendedspectrum