显微镜的基本知识

1、2021/3/10讲解：XX 1 显微镜的基本知识 核工业417医院检 验科 王军锋王军锋 2021/3/10 讲解：XX 2 一、显微镜的基本结构一、显微镜的基本结构 l光学系统 主要包括：物镜、目镜、聚光镜和光源系主要包括：物镜、目镜、聚光镜和光源系 统四个主要部件。其次还包括滤光片、载玻片统四个主要部件。其次还包括滤光片、载玻片 和盖玻片和盖玻片。 l机械装置 主要包括：镜座与镜臂、镜筒、物镜转换主要包括：镜座与镜臂、镜筒、物镜转换 器、载物台与移动器、粗动调焦机构、微动调器、载物台与移动器、粗动调焦机构、微动调 焦机构。焦机构。 2021/3/10 讲解：XX 3 物物 镜镜 l 物镜

2、一般都是在物镜转换器上旋着。它是显 微镜的最主要部件。显微镜的放大及分辩作用主 要由它来担当。其优劣直接决定了显微镜的主要 光学性能。 l 物镜都由多块透镜组成，而且放大倍数越高， 结构越复杂。在有的高倍物镜和油镜内还装有弹 簧，在物镜前端受压时，镜头可以退缩回来。这 样一方面可以保护镜头，另一方面也不会把载玻 片和盖玻片压碎。这种物镜称为弹簧物镜。 2021/3/10 讲解：XX 4 物镜的分类物镜的分类 l根据象差校正情况可分三类： 消色差物镜、复 消色差的物镜、平场物镜。 l根据物镜的放大倍率不同可分为：低倍、中倍和 高倍物镜 。 l根据使用方法的差异可分：干燥系、浸液系物镜 （据浸液的

3、种类可分为油浸系和水浸系两类 ） 两大类 2021/3/10 讲解：XX 5 物镜上的数字和符号物镜上的数字和符号 物镜通常都标有表示物镜光学性能和使用条 件的一些数字和符号.如 “40/0.65”“160/0.17”。此处的40表示它的 放大倍数（有的写成40或40：1）；0.65表示 它的数值孔径（有的写成N.A.1.65或A.0.65）； 160表示使用该物镜时，显微镜的机械筒长应为 160mm；0.17表示使用该物镜时，盖玻片的厚度 应为0.17mm。有些低倍物镜，在有、无盖玻片的 情况下都可以使用，所以不标0.17而代之以横线 -。有些油镜上标有油（oil）字 2021/3/10 讲

4、解：XX 6 目目 镜镜 l 目镜通常插在镜筒上。其作用是把物镜放大 后的像作进一步的放大，使人眼睛能够清楚地观 察标本。它有单目和双目两种工作方式。 l 现代目镜均用复合透镜，这样便于将倍率色 差、慧差和象差等缺点加以纠正。目镜有两个透 镜，近物的称为场镜 ，近目的称为目镜。 2021/3/10 讲解：XX 7 聚聚 光光 器器 l聚光器大都通过手旋螺丝固定在镜台下面。 l由聚光镜和可变光阑两个部件组成。聚光镜的作 用是将光源来的光线会聚到标本上，以便观察。 可变光阑又叫光圈或虹彩光阑，装在聚光镜的下 方，由十几块金属薄片组成。中央通光孔为圆形， 移动可变光阑的把手，可以任意调节通光孔的大

5、小。 2021/3/10 讲解：XX 8 光源系统光源系统 l 光源系统用来供给照明标本用的光线。显微 镜所用的光源有自然光和电光源两种。 l 使用电光源的显微镜，其光源系统由光源灯 电路、光源灯、透镜、反射镜的等组成,系统通 常安装在灯座内。 2021/3/10 讲解：XX 9 其其 它它 l滤光片：使用滤光片后可以有选择地滤除某些光 线，使观察效果更佳。 l 载玻片和盖玻片 ：载玻片是用来承载样本的， 盖玻片是用来覆盖样本的。通常观察标本时，标 本夹在两块玻璃之间。下面的一块叫载玻片，上 面的叫盖玻片。二者一般是用透明玻璃片制成， 只是大小、薄厚有所区别。标准盖玻片的厚度为 0.17mm;

6、载玻片的厚度则为1.1mm。 2021/3/10 讲解：XX 10 镜座与镜臂镜座与镜臂 l镜座：是显微镜的基座，用以支撑整个镜体。电 光源显微镜的镜座为多方形，其内部装有电光源 系统。 l镜臂：呈弓形，立于镜座的上端。主要用它来支 撑镜筒和与镜筒相连接的光学元件。现在的显微 镜都和主体并在一起。 2021/3/10 讲解：XX 11 镜镜 筒筒 l镜筒上端可插目镜，下端连接物镜，可分为单目、 双目和三目三种。 l单目镜筒：现在已经很少用。 l双目镜筒：为了适应两眼距离不同的人使用，调 节瞳距范围通常是在55-75mm。之间；伸缩调节 方式，其目的是为了适应视力不同的人使用，调 节范围通常在5

7、00度近视和远视之间。 l三目镜筒：三目镜筒是为显微摄影需要配置的。 2021/3/10 讲解：XX 12 物镜转换器物镜转换器 l物镜转换器装于镜筒下端，用来安装和转 换物镜。按安装物镜的孔数不同，可分为 四孔式、五孔式、六孔式、七孔式等几种。 以五、六孔居多。 2021/3/10 讲解：XX 13 载物台与移动器载物台与移动器 l载物台用于承放标本。它与显微镜的光轴 垂直，台面中央有一个圆形的通光孔 。 l为了便于操作，常在固定式的载物台上增 加一个移动器。当 标本被夹入移动器后， 使用移动器的横向和纵向调节旋钮，以便 上下左右移动标本。 2021/3/10 讲解：XX 14 粗动粗动调焦

8、机构和调焦机构和微动微动调焦机构调焦机构 l粗动调焦机构简称粗调，是用来快速调焦的装置。 由粗动手轮控制。旋转手轮，可以使物、目镜与 载物台快速相对移动。 l微动调焦机构简称微调，是显微镜作精细调焦用 的一种慢动装置。它的总调节距离一般为 1.83mm，由微动手轮控制。旋转微动手轮时， 光学系统的移动非常慢。 2021/3/10 讲解：XX 15 二、显微镜的使用二、显微镜的使用 l使用环境与工作习惯 l使用前的准备 l反射镜、聚光器的用法和对光方法 2021/3/10 讲解：XX 16 1 1、使用环境与工作习惯、使用环境与工作习惯 l显微镜的工作场所应当清洁、干燥、 无震动、无腐蚀性气体存

9、在。 l台面和凳子的高度要适当。 l调节瞳距瞳距和伸缩调节伸缩调节使双眼均可以清 楚观察到影像。 2021/3/10 讲解：XX 17 2 2、使用前的准备、使用前的准备 ( (光学系统的安装光学系统的安装) ) l对新购或已经卸掉光学系统的显微镜，使 用前必须安装光学系统。安装时，为了防 止向下掉灰尘，应按照先上后下的顺序， 即按照目镜、物镜、聚光镜、反射镜的顺 序来安装。 2021/3/10 讲解：XX 18 2 2、使用前的准备、使用前的准备( (光学系统的安装光学系统的安装) ) l安装物镜:先将镜筒升高，使转换器与载物台之 间保持一定的距离。然后，握住物镜，把它放入 转换器的螺丝口处

10、，先略向反时针方向旋转，待 物镜配上丝纹后，在按顺时针方向旋入，旋至中 等程度松紧即可。安装三个以上的物镜时，应根 据物镜的放大倍数，从小到大顺时针安装，转换 物镜时，不要用手推着物镜旋转，那样会使物镜 的光轴歪斜。最好用手捏着转换器的转动盘旋转， 或用手扶着与物镜转换器衔接处的滚花外圆旋转。 2021/3/10 讲解：XX 19 2 2、使用前的准备、使用前的准备( (光学系统的安装光学系统的安装) ) l安装聚光器:目镜和物镜装好后，再将聚光器插 入载物台的下面的聚光器支架内。插入的高度应 使聚光器生至最高时，聚光镜上透镜的端面稍低 于载物台的平面，以免载玻片与聚光器的镜头相 碰。然后，将

11、聚光器的固定螺丝旋紧。 2021/3/10 讲解：XX 20 2 2、使用前的准备、使用前的准备 ( (校正光轴校正光轴) ) l校正光轴的意义在于使物镜、目镜、聚光镜的主 光轴和可变光栏的中心点重合在一条直线上。所 以又叫做合轴调节或中心调节。如果光轴歪斜， 会使象差增大，分辨率和清晰度都要下降。 l一般由专业工程师来完成。 l显微镜的光轴校正好后，如果没有拆下聚光器或 其它特殊原因，不必经常校正。 2021/3/10 讲解：XX 21 3 3、反射镜、聚光器的用法和对光方法反射镜、聚光器的用法和对光方法 1）反射镜的用法 一般都使用平面反射镜，反射太阳的散射 光。只有在光线不足或窗外有干扰

12、时，才使用凹 面反射镜。 2021/3/10 讲解：XX 22 3 3、反射镜、聚光器的用法和对光方法反射镜、聚光器的用法和对光方法 2）聚光器高度的调节 l一般的聚光镜，在平行光照射的情况下，其焦点 落在它上端透镜平面中心上方约1.25mm处。当使 用高倍或油镜时，由于放大率大，镜像亮度小， 需要较强的照明。因此，应把聚光器升至最高， 以便使聚光镜的焦点正好落在标本平面上。但在 使用低倍镜时，可将聚光器适当下降。 2021/3/10 讲解：XX 23 3 3、反射镜、聚光器的用法和对光方法反射镜、聚光器的用法和对光方法 3）可变光栏的用法 l可变光栏起两个作用。一是控制射向标本的光通 量；二

13、是改变聚 光器的数值孔径。在这两个作 用中，后者是主要的。为了使物镜的分辨率得到 充分的利用，从原则上说，聚光器的数值孔径应 与物镜的相同。否则，分辨率或清晰度就要下 降。 2021/3/10 讲解：XX 24 4 4、物镜的正确调焦、物镜的正确调焦 l无论作何种检查，均应从低倍镜开始。调焦时， 先用粗动手轮将镜筒下降，使低倍镜的前透镜与 盖玻片之间的距离略缩小于该物镜的工作距离 （5mm以下）。为了避免物镜压在标本玻片上， 可从侧面窥视。然后，一边从目镜中观察视野， 一边利用粗动手轮将镜筒徐徐上升，待初见物像 后，改用微动手轮作精细调焦，直至物像最清晰 为止。 2021/3/10 讲解：XX

14、 25 4 4、物镜的正确调焦、物镜的正确调焦 l低倍物镜的视场大，有利于观察标本的全貌。也 可利用移动器寻觅观察的目标，如有必要，可将 寻得的目标移至视场的中心，为高倍镜观察作好 准备。 l从低倍镜转换为高倍镜时，如果物镜是显微镜的 原配物镜，所用的载玻片、盖玻片有符合标准， 一般都可以进行等高转换。即转换后，只要稍 微调节一下微调旋钮，即可看到清晰的图象。 2021/3/10 讲解：XX 26 4 4、物镜的正确调焦、物镜的正确调焦 l使用油镜的方法：先将镜筒升高，取下标本玻片，稍稍 降低聚光器，并在聚光器的镜头上滴两滴香柏油（油中 不应有气泡），再将标本盖玻片放回原处，把聚光器升 高，使

15、载玻片的底面与香柏油接触。这样，就完成了聚 光镜的油浸。接着，在盖玻片上滴上一滴香柏油。然后 从侧面窥视，利用粗调使镜筒尽量下降，直至油镜的前 透镜浸没在香柏油中（但尚未接触玻片），这样，又完 成了物镜的油浸。然后，一边从目镜中观察，一边利用 微动手轮将镜筒缓缓上升（注意不要拧错了方向，压碎 盖玻片） ，直至视野中出现最清晰的物像为止。 2021/3/10 讲解：XX 27 4 4、物镜的正确调焦、物镜的正确调焦 l注意：在使用油镜时，允许在聚光镜与标本之间 不加香柏油，即聚光镜上仍以空气为介质，但这 会牺牲物镜的分辨率。 l注意：如果油镜观察后，有需要转回高倍物镜观 察，应将盖玻片上的油擦去

16、，以免沾污高倍物镜。 但聚光器上的油可以不擦，只要把光栏适当缩小 一点即可。 2021/3/10 讲解：XX 28 4 4、物镜的正确调焦、物镜的正确调焦 l注意：油镜使用完毕后，要及时将香柏油擦拭干 净。镜头上可先用干净的擦镜纸擦干净即行。聚 光镜的擦拭方法与此相同。如标本需要保存，玻 片上的香柏油可用拉纸法擦拭干净。即将擦镜 纸覆盖在玻片上，在纸上滴上一滴二甲苯，趁湿 将纸条平拖着往外拉，连续几次即可擦干净。 l注意：最后指出：在整个调焦过程中（尤其是高 倍物镜和油镜的调焦），每个动作都要缓慢进行。 否则，物像会一闪而过，找不到观察目标。 2021/3/10 讲解：XX 29 三、三、显微

17、镜的维护显微镜的维护 l经常性的维护 l使用中的维护 l光学系统的擦拭 l机械部分的擦拭 2021/3/10 讲解：XX 30 1 1、经常性的维护、经常性的维护 l防潮：如果室内潮湿，光学镜片容易生霉，生雾。 一旦生霉，很难除去。内部的镜片由于不便擦拭， 潮湿对其危害性更大。机械零件受潮，容易生锈。 为了防潮，除了选择干燥的房间外，存放地点也 应离墙、离地、远离潮湿。 l防尘：光学元件表面落入灰尘，不仅影响光线通 过，而且经光学系统放大后，会生成很大的污斑， 影响观察。灰尘、砂粒落入机械部分，还会增加 磨损，引起运动受阻，危害同样很大。因此，必 须经常保持显微镜的清洁。 2021/3/10

18、讲解：XX 31 1 1、经常性的维护、经常性的维护 l防腐蚀：显微镜不能和具有腐蚀性的化学试剂放 在一起，如硫酸、盐酸、强碱等。 l防热：防热的目的主要是为了避免热胀冷缩引起 的开胶与脱落。 2021/3/10 讲解：XX 32 2 2、使用中的维护、使用中的维护 l微调是显微镜机械装置中较精细而又容易损坏的 元件，拧到了限位以后，就拧不动了。此时决不 能强拧。否则，必然损坏。调焦时，遇到这样情 况，应将微调退回35圈，重用粗调调焦，待初 见物像后，在改用微调。 l使用高倍镜观察液体标本时，一定要加盖玻片。 否则，不仅清晰度下降，而且试液容易浸入高倍 镜的镜头内，使镜片遭受污染和腐蚀。 20

19、21/3/10 讲解：XX 33 2 2、使用中的维护、使用中的维护 l油镜使用后，一定要擦拭干净。香柏油在空气中 暴露时间过长，就会变稠和干涸，到这时再去擦 拭就比较困难了。镜片上留有油渍，清晰度必然 下降。 l仪器出了故障，不要勉强使用。否则，可能引起 更大的故障和不良后果。例如，在粗动手轮不灵 活时，如果强行旋动，会使齿轮、赤条变形或损 坏。 2021/3/10 讲解：XX 34 3 3、光学系统的擦拭、光学系统的擦拭 l平时对显微镜的各光学部分的表面，用干净的毛 笔清扫或用擦镜纸擦拭干净即行。在镜片上有摸 不掉的污物、油渍或手印；镜片生霉、生雾；长 期挺用后复用时，需要进行比较认真的擦

20、拭。 l擦拭范围：目镜和聚光镜允许拆开。物镜因结构 复杂，装配时又要专门的仪器来校正才能恢复原 有的精度，故严禁拆开。 2021/3/10 讲解：XX 35 3 3、光学系统的擦拭、光学系统的擦拭 l拆卸目镜和聚光镜时，要注意以下几点： （1）小心谨慎 （2）拆卸时要标记各元件的相对位置（可在外壳 上划线作标记）、相对顺序和镜片的正反面，以 防重装时弄错。 （3） 操作环境保持清洁、干燥。拆卸目镜时，只 要从两端旋出上下两块透镜即可。目镜内的视场 光栏不能移动，否则会使视场界线模糊。 2021/3/10 讲解：XX 36 3 3、光学系统的擦拭、光学系统的擦拭 l擦拭方法：先用干净的毛笔或吹风

21、球除去镜片表 面的灰尘。然后用干净的绒布在 镜片中心开始 向边缘作螺旋形单向运动。擦完一次把绒布换个 地方，直至擦干净为止。如果镜片上有油渍、污 物或指印等擦不掉时，可用柳枝条裹上脱脂棉， 蘸少量酒精和乙醚 合液（酒精80%，乙醚20%） 擦拭。如果有较重的霉点或霉斑无法除去，可用 棉签 湿后粘上碳酸钙粉（含量为99%以上）进 行擦拭。擦拭后，应将粉末清除干净。 2021/3/10 讲解：XX 37 3 3、光学系统的擦拭、光学系统的擦拭 l镜片是否干净可用可用镜片上的反射光线进行检 查。要注意的是，擦拭前一定要将灰尘除净，否 则灰尘中的砂粒会将镜面划起沟纹。不准用毛巾、 手帕、衣服等去擦拭。酒精乙醚混合不可用的太 多，以免脱胶。镜片表面有一层紫蓝色的透光膜， 不要误作污物来擦拭。 2021/3/10 讲解：XX 38 2021/3/