分子免疫学-细胞因子及其受体-GAOBO 2014

1、F细胞因子( Cytokine, ck) 是由多种细胞，特别 是免疫细胞所产生、具有广泛生物学活性的小分子 量蛋白（分子量约880kDa） 。 细胞因子概念细胞因子概念 细胞因子的分类细胞因子的分类 按产生按产生CK的的 细胞类型分类细胞类型分类 其他细胞其他细胞 EPO等等 淋巴细胞淋巴细胞 IL-26、 IL- 914、 IFN-、TNF-等等 淋巴因子（淋巴因子（lymphokine） Mj 单核巨噬细胞单核巨噬细胞 IL-1、IL-8、TNF-等等 单核因子（单核因子（monokine） 细胞因子的分类细胞因子的分类 按产生按产生CK的功能分类的功能分类 1.白细胞介素(interle

2、ukin, IL) 2.集落刺激因子（colony stimulating factor, CSF). 3.干扰素（interferon, IFN) 4.肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor, TNF) 5.趋化因子（chemokine) 6.生长因子(growth factor, GF) 白细胞介素 白细胞介素，简称白介素，是指白细胞介素，简称白介素，是指 介导白细胞介导白细胞 或其他细胞间相互作用的细胞因子。或其他细胞间相互作用的细胞因子。 白细胞介素白细胞介素(interleukin, IL) F主要由单核巨噬细胞、主要由单核巨噬细胞、T淋巴细胞等所分泌；淋巴细胞等所

3、分泌； F介导并调节固有免疫、适应性免疫，在炎症反应中起介导并调节固有免疫、适应性免疫，在炎症反应中起 重要作用。重要作用。 F目前已发现目前已发现35种以上。种以上。 重要的细胞因子介绍重要的细胞因子介绍 (IL-1,IL-2) F1972年年Gery等发现人白细胞培养的上清中含有一等发现人白细胞培养的上清中含有一 种可溶性物质，这种物质可促进小鼠胸腺细胞对植种可溶性物质，这种物质可促进小鼠胸腺细胞对植 物血凝素物血凝素(PHA)的有丝分裂反应。的有丝分裂反应。 起初命名为起初命名为淋巴淋巴 细胞激活因子细胞激活因子(lymphocyte-activating factor, LAF) 或或

4、内源性热原质内源性热原质(endogenous pyrogen) 等，等，1979 年国际统一命名为年国际统一命名为IL-1。 白细胞介素白细胞介素(interleukin, IL) IL-1 Mj 巨噬细胞巨噬细胞 IL-1 诱导吞噬细胞活化诱导吞噬细胞活化 引起炎症及发热引起炎症及发热 刺激刺激T细胞活化细胞活化 刺激刺激B细胞增殖与抗体分泌细胞增殖与抗体分泌 诱导肝脏急性期应答诱导肝脏急性期应答 刺激造血细胞再生刺激造血细胞再生 白细胞介素白细胞介素(interleukin, IL) IL-1 F1976年年Morgan等，发现小鼠脾细胞培养上清中等，发现小鼠脾细胞培养上清中 含有一种刺

5、激胸腺细胞生长的因子，由于这种因含有一种刺激胸腺细胞生长的因子，由于这种因 子能促进和维持子能促进和维持T细胞长期培养，称为细胞长期培养，称为T细胞生长细胞生长 因子因子（T cell growth factor,TCGF)， 1979年统年统 一命名为白细胞介素一命名为白细胞介素2 （interleukin 2,IL-2)。 白细胞介素白细胞介素(interleukin, IL) IL-2 活化活化 Th1细胞细胞NK 细胞细胞 IL-2 促进细胞增促进细胞增 殖，分化，殖，分化， 与与Ig Ig 合成合成 促进增殖、促进增殖、 产生细胞因产生细胞因 子子 促进促进NKNK细胞细胞 的增殖，

6、增的增殖，增 强强NKNK细胞活细胞活 性性 活化活化T T细胞细胞 B B 细胞细胞 巨噬巨噬细胞细胞 NK NK 细胞细胞 活化巨噬细胞，活化巨噬细胞， 促进促进IL-1IL-1的分泌的分泌 白细胞介素白细胞介素(interleukin, IL) IL-2 集落刺激因子 F是一组在体内外均可选择性刺激造血祖细胞增殖、分是一组在体内外均可选择性刺激造血祖细胞增殖、分 化并在半固体培养基上形成细胞集落（化并在半固体培养基上形成细胞集落（colony）的细胞）的细胞 因子因子。 集落刺激因子集落刺激因子(Colony stimulating factor, CSF) 巨噬细胞巨噬细胞-粒细胞集落

7、刺激因子（粒细胞集落刺激因子（GM-CSF） 巨噬细胞集落刺激因子（巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF） 粒细胞集落刺激因子（粒细胞集落刺激因子（G-CSF） 另外，红细胞生成素（另外，红细胞生成素（EPO），干细胞生长因子（），干细胞生长因子（SCF ）和血小板生成素（）和血小板生成素（TPO）也视为）也视为CSF家族成员。家族成员。 集落刺激因子集落刺激因子(Colony stimulating factor, CSF) 干扰素 F干扰素是一组具有干扰病毒感染和复制能力的细胞因子。干扰素是一组具有干扰病毒感染和复制能力的细胞因子。 主要包括主要包括I型型(IFN , IFN 等等)和和 II

8、型型(IFN ) 干扰素干扰素(Interferon， IFN) I 型干扰素型干扰素： II型干扰素型干扰素: CD8+T细胞、 CD4 + T细胞、NK细胞 受病毒感染的细胞 抗病毒作用抗病毒作用 免疫调节作用免疫调节作用 IFN- 的抗病毒作用的抗病毒作用 病毒病毒 病毒复制病毒复制 IFN- 诱导刺激诱导刺激 胞核胞核 信号转导信号转导 胞核胞核 IFN-诱导蛋白诱导蛋白 抑制病抑制病 毒复制毒复制 干扰素干扰素(Interferon， IFN) 活化活化 Th1细胞细胞NK 细胞细胞 促进促进： MHC-IIMHC-II表达，表达， 抗微生物活性，抗微生物活性， 抗肿瘤活性抗肿瘤活性

9、 TNF-TNF- 合成合成 巨噬巨噬细胞细胞 B B 细胞细胞 病毒感染细胞病毒感染细胞 T T 细胞细胞 促进：促进： IL-2IL-2产生产生 IL-2RIL-2R表达表达 增强增强 IVIV型超敏反应型超敏反应 移植物排斥反应移植物排斥反应 细胞毒性细胞毒性 IFN- 促进促进： IgG3和和IgG2a的的 产生产生 抑制抑制 CD23表达表达 IgE产生产生 促进促进： 活化活化 杀伤杀伤 NKNK细胞细胞 抑制抑制 病毒复制、扩增病毒复制、扩增 干扰素干扰素(Interferon， IFN) IFN- 的生物学效应的生物学效应 肿瘤坏死因子 F此因子由于其在体内外均可直接杀伤肿瘤细

10、胞而得名。此因子由于其在体内外均可直接杀伤肿瘤细胞而得名。 肿瘤坏死因子肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor，TNF) F肿瘤坏死因子是一类直接导致肿瘤发生出血坏死，并具有免疫调节活性肿瘤坏死因子是一类直接导致肿瘤发生出血坏死，并具有免疫调节活性 的蛋白质。的蛋白质。 TNF- 157 157 aa 活化的活化的T T细胞细胞 分为分为: : TNF- TNFTNF- 淋巴毒素淋巴毒素( (lymphotoxin- , LT- ) TNFTNF- （LT ）171 171 aa 活化的巨噬细胞活化的巨噬细胞 同源性同源性28% 相同的受体相同的受体 相同的生物学效应相同的生

11、物学效应 上调细胞因子上调细胞因子 产生水平（产生水平（IL- 2，IL-4， - IFN，CSF），）， 上调上调 IL-2 受体受体 的表达的表达 TNF- 骨 髓 诱导分化诱导分化 上调抗体上调抗体 产生细胞数产生细胞数 量量 上调前列腺素产上调前列腺素产 生水平，上生水平，上 调细胞因子产生调细胞因子产生 水平（水平（IL-1，IL- 6，IL-8，GM- CSF） 趋化并活化中趋化并活化中 性粒细胞性粒细胞 体内刺激产生体内刺激产生CSF 上调造血功能上调造血功能 B 细胞 中性粒细胞 Mj 巨噬细胞 T 细胞 肿瘤坏死因子肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor，T

12、NF) TNF-a 的生物学效应 生长因子 F生长因子是一类可介导不同类型细胞生长和分化的细胞因子。生长因子是一类可介导不同类型细胞生长和分化的细胞因子。 根据其功能和作用的靶细胞不同，分别命名为：根据其功能和作用的靶细胞不同，分别命名为： 生长因子生长因子(Growth factor，GF) 1、转化生长因子、转化生长因子（transforming growth factor- TGF- ）；）； 2、神经生长因子、神经生长因子(nerve growth factor,NGF) ; 3、表皮生长因子、表皮生长因子(epithelial growth factor,EGF); 4、成纤维细胞生

13、长因子、成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor,FGF); 5、血小板生长因子（、血小板生长因子（platelet-derived growth factor,PDGF） 6、血管内皮细胞生长因子（、血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial cell growth factor,VEGF) 趋化因子 F趋化因子是一类对不同靶细胞具有趋化效应的细胞因子趋化因子是一类对不同靶细胞具有趋化效应的细胞因子 家族。该家族成员依据其分子氨基端半胱氨酸（家族。该家族成员依据其分子氨基端半胱氨酸（Cys） 的数目及其间隔，可分为不同的亚家族：的数目及其间隔，

14、可分为不同的亚家族： 趋化因子（趋化因子（Chemokine） 亚家族亚家族 ：Cys-X-Cys （X代表任意氨基酸残基），如代表任意氨基酸残基），如IL-8趋化中性粒趋化中性粒 细胞；细胞； 亚家族：亚家族： Cys-Cys，如单核细胞趋化蛋白，趋化单核细胞；，如单核细胞趋化蛋白，趋化单核细胞； 亚家族：亚家族： Cys，如淋巴细胞趋化蛋白，趋化淋巴细胞。，如淋巴细胞趋化蛋白，趋化淋巴细胞。 亚家族：亚家族： Cys-X3-Cys， Fractalkine，可趋化单核细胞、，可趋化单核细胞、NK细胞细胞 趋化因子的结构趋化因子的结构 趋化因子的结构趋化因子的结构 自分泌自分泌 autocr

15、ine 内分泌内分泌 endocrine 血液循环 远距离作用 旁分泌旁分泌 paracrine 作用于分泌 细胞自身 作用于比 邻细胞 1、作用方式（、作用方式（ action manners ）：）： 细胞因子作用的共同特点细胞因子作用的共同特点 IL-4 BActivation proliferation Mast cell proliferation Thymus cell differentiation 2、多效性、多效性 （Pleiotropy） ： 5.拮抗性（拮抗性（Antagonism）：）： 3.重叠性（重叠性（Redundancy）：）： 4. 协同性（协同性（syner

16、gy）：）： IL-2、 IL-4、 IL-5 Stimulating the proliferation of the B cells B IL-4 + IL-5 More effectively inducing the production of IgE B IL-4 IFN- IL-4 interdicts the action that IFN- induces Ig exchanges B _ + 细胞因子的合成和分泌过程是一种自我调控的过程，细胞因子的合成和分泌过程是一种自我调控的过程， 正常条件下，细胞因子极少储存，适当刺激后正常条件下，细胞因子极少储存，适当刺激后迅速合成、迅

17、速合成、 迅速释放、迅速发挥作用、迅速降解。迅速释放、迅速发挥作用、迅速降解。 6、迅速（、迅速（Rapidity ） 7、高效性（、高效性（ high potency） 极微量的细胞因子（极微量的细胞因子（pM,10-12 M)就可发挥显著的生就可发挥显著的生 物学效应。物学效应。细胞因子与其受体高亲和力结合，使细胞因子的生物学作细胞因子与其受体高亲和力结合，使细胞因子的生物学作 用具有高效性。在体内用具有高效性。在体内pM水平即可显示明显的生物学效应。例如：水平即可显示明显的生物学效应。例如：1pg 的干扰素能保护的干扰素能保护100万个细胞抵御万个细胞抵御1000万病毒颗粒的感染万病毒颗

18、粒的感染 细胞因子以非特异性方式发挥作用，且不受细胞因子以非特异性方式发挥作用，且不受MHC限制。限制。 8、非特异性（、非特异性（Non-specificity） 细胞因子受细胞因子受 体体 F细胞因子作用的发挥依赖于细胞表面的受体。细胞因细胞因子作用的发挥依赖于细胞表面的受体。细胞因 子和相应受体结合可以传导细胞信号，使细胞活化、子和相应受体结合可以传导细胞信号，使细胞活化、 增殖。增殖。 F细胞因子受体主要表达于细胞表面，但某些情况下细胞因子受体主要表达于细胞表面，但某些情况下 ，如强免疫原性物质刺激，许多种类的细胞因子受体，如强免疫原性物质刺激，许多种类的细胞因子受体 可以从膜表面脱落

19、，成为可溶性分子。可与膜型受体可以从膜表面脱落，成为可溶性分子。可与膜型受体 竞争，从而负向调节相应细胞因子的生物学作用竞争，从而负向调节相应细胞因子的生物学作用。 -S-S-S-S-S-S-S-S-S-S-S-S- C C C C C1 C3 C2 C1 C3 C2 C1 C3 C2 C1 C3 C2 G 蛋白蛋白 免疫球蛋白免疫球蛋白 超家族受体超家族受体 I I类细胞类细胞 因子受体因子受体 IIII类细胞类细胞 因子受体因子受体 TNF-RTNF-R 趋化因子受体趋化因子受体 IL-1 M-CSF C-kit IL-2 IL-3 IL-4 IL-5 IL-6 IL-7 IL-9 IL-

20、11 IL-12 IL-13 IL-15 OSM GM-CSF G-CSF LIF CNTF 生长激素生长激素 催乳素催乳素 IFN- IFN- IFN- TNF- TNF- CD40 神经生长因神经生长因 子（子（NGF） FAS IL-8 RANTES MIP-1 PF4 MCAF NAP-2 F细胞因子受体根据其胞外结构及氨基酸序列的相似性分为细胞因子受体根据其胞外结构及氨基酸序列的相似性分为5个家族。个家族。 细胞因子受细胞因子受 体体 细胞因子的主要生物学效应细胞因子的主要生物学效应 F介导天然免疫和炎症反应介导天然免疫和炎症反应 F介导和调节特异性免疫应答介导和调节特异性免疫应答

21、F决定免疫应答的类型决定免疫应答的类型 F参与造血参与造血 介导天然免疫和炎症反应 F多种细胞因子参与天然免疫和炎症反应的启 动及其效应。其中，IL-6、IL-1、IFN、TNF 和趋化因子家族是启动抗菌性炎症反应的关 键因子，被称为促炎因子。 细胞因子的主要生物学效应细胞因子的主要生物学效应 介导介导天然免疫和炎症天然免疫和炎症反应反应 IL-8 趋化中性粒细胞和趋化中性粒细胞和T细胞进入感染部位细胞进入感染部位 趋化因子（趋化因子（IL-8) 细胞因子的主要生物学效应细胞因子的主要生物学效应 介导介导天然免疫和炎症天然免疫和炎症反应反应 IL-1、6 活化淋巴细胞、活化淋巴细胞、NK细胞细

22、胞 TNF- a 增加血管通透性增加血管通透性 F 在炎症早期在炎症早期IL-6、IL-1、TNF还可促进肝脏产生还可促进肝脏产生急性期蛋白急性期蛋白，增强机体抵，增强机体抵 御致病微生物的侵袭。御致病微生物的侵袭。 肝脏肝脏 TNF-a, IL-1, IL-6 血清淀粉样蛋白血清淀粉样蛋白 C反应蛋白反应蛋白 纤维蛋白原纤维蛋白原 甘露聚糖结甘露聚糖结 合凝集素合凝集素 细胞因子诱导急性期蛋白合成细胞因子诱导急性期蛋白合成 细胞因子的主要生物学效应细胞因子的主要生物学效应 介导介导天然免疫和炎症天然免疫和炎症反应反应 F干扰素可抑制病毒在体内复制并抗病毒感染； FIL-14、IL-12等可分

23、别促进NK细胞增殖及其胞 毒作用； FIFN-、TNF等可激活巨噬细胞，并促进其吞 噬和杀伤作用。 细胞因子的主要生物学效应细胞因子的主要生物学效应 介导介导天然免疫和炎症天然免疫和炎症反应反应 细胞因子在机体抗感染的天然免疫机制中 发挥重要的作用。 介导和调节特异性免疫应答 F趋化因子可诱导不同免疫细胞的定向运动，并参与其 激活等。 细胞因子的主要生物学效应细胞因子的主要生物学效应 介导和调节介导和调节特异性免疫特异性免疫应答应答 在免疫应答的全过程，不同类型细胞因子在不同环节分在免疫应答的全过程，不同类型细胞因子在不同环节分 别发挥重要作用。别发挥重要作用。 FIFN可诱导抗原递呈细胞表达

24、MHC分子，促进抗原递呈； FIL-2、IL-4、IL-5、IL-6等可促进T（B）细胞的增殖、 分化； 决定免疫应答的类型 F 近年来发现同一类免疫细胞可按其分泌的细近年来发现同一类免疫细胞可按其分泌的细 胞因子而分为不同亚群，其意义在于机体免疫胞因子而分为不同亚群，其意义在于机体免疫 应答类型在相当程度上取决于免疫细胞产生的应答类型在相当程度上取决于免疫细胞产生的 细胞因子谱。细胞因子谱。 细胞因子的主要生物学效应细胞因子的主要生物学效应 决定决定免疫应答的类型免疫应答的类型 F Th1细胞产生IL-2、IFN- 、TNF- 等参与细胞介导的炎症反应； 细胞因子的主要生物学效应细胞因子的主

25、要生物学效应 决定决定免疫应答的类型免疫应答的类型 FTh2细胞主要产生IL-4、IL-5、IL-6、 IL-9、IL-10、IL-13等主要介导体液免 疫应答和I型超敏反应。 参与造血 细胞因子的主要生物学效应细胞因子的主要生物学效应 参与造血参与造血 细胞因子与临床细胞因子与临床 细胞因子与疾病的发生细胞因子与疾病的发生 F细菌内毒素性休克细菌内毒素性休克 ：TNF-、IL-1等细胞因子过度表达等细胞因子过度表达 F免疫缺陷病：细胞因子及其受体的缺陷，如免疫缺陷病：细胞因子及其受体的缺陷，如IL-2或或IL-2受受 体缺陷或突变可导致重症联合免疫缺陷病体缺陷或突变可导致重症联合免疫缺陷病

26、F自身免疫病：自身免疫病：IFN-可诱导某些自身组织细胞表达可诱导某些自身组织细胞表达MHC-II 类抗原，从而使这些细胞将自身抗原递呈给自身反应性类抗原，从而使这些细胞将自身抗原递呈给自身反应性T细细 胞，导致自身免疫性疾病胞，导致自身免疫性疾病 F超敏反应：超敏反应：IL-4、 IL-5可正向调控可正向调控IgE的合成，从而的合成，从而 在在I型超敏反应的发生密切相关型超敏反应的发生密切相关 细胞因子补充和添加疗法细胞因子补充和添加疗法 : 通过各种途径使患者通过各种途径使患者 体内细胞因子水平增加，充分发挥细胞因子的生体内细胞因子水平增加，充分发挥细胞因子的生 物学作用，从而抗御和治疗疾

27、病物学作用，从而抗御和治疗疾病。 细胞因子与临床细胞因子与临床 细胞因子与治疗细胞因子与治疗 F细胞因子阻断和拮抗疗法：细胞因子阻断和拮抗疗法：其基本原理是抑制细胞其基本原理是抑制细胞 因子的产生和阻断细胞因子与其相应受体的结合及受因子的产生和阻断细胞因子与其相应受体的结合及受 体后信号传导过程，使细胞因子的病理性作用难以发体后信号传导过程，使细胞因子的病理性作用难以发 挥。感染性休克等的治疗。例如挥。感染性休克等的治疗。例如抗抗TNF单克隆抗体单克隆抗体可可 以减轻甚至阻断感染性休克的发生，以减轻甚至阻断感染性休克的发生，IL-1受体拮抗剂受体拮抗剂 对于炎症、自身免疫性疾病等具有较好的治疗

28、效果。对于炎症、自身免疫性疾病等具有较好的治疗效果。 该疗法适用于自身免疫性病、移植排序反应该疗法适用于自身免疫性病、移植排序反应. 细胞因子与临床细胞因子与临床 细胞因子与治疗细胞因子与治疗 可溶性细胞因子受体作为拮抗剂可溶性细胞因子受体作为拮抗剂 effects N C -S-S-S-S-S-S- N -S-S-S-S- NC 5 3 DNA Protein 细胞因子受体的克隆 N C -S-S-S-S-S-S- 5 3 DNA PCR N -S-S-S-S- 可溶性细胞因子受体可溶性细胞因子受体 细胞因子受体的突变 C N 5 3 5 3 TAA Site-directed mutage

29、nesis Soluble cytokine receptor C N Receptor blocker (as a receptor antagonist) N C -S-S-S-S-S-S- N -S-S-S-S- N -S-S-S-S- N -S-S-S-S- N -S-S-S-S- 可溶性细胞因子受体可溶性细胞因子受体 已批准上市的细胞因子基因工程药物已批准上市的细胞因子基因工程药物 名称适应症 IFN白血病、Kaposi肉瘤、肝炎、癌症、AIDS IFN慢性肉芽肿、生殖器疣、过敏性皮炎、感染性疾病、类风湿关节炎 G-CSF自身骨髓移植、化疗导致的粒细胞减少症、 AIDS、白血病、再生

30、障碍 性贫血 GM-CSF自身骨髓移植、化疗导致的血细胞减少症、 AIDS、再生障碍性贫血、 Epo慢性肾衰导致的贫血、癌症或癌症化疗导致的贫血、失血后贫血 IL-2癌症、免疫缺陷、疫苗佐剂 IFN多发性硬化症 IL-11放化疗所致血小板减少症 干细胞因子 (SCF) 与G-CSF联合应用于外周血干细胞移植 EGF外用药治疗烧伤、溃疡 bFGF外用药治疗烧伤、外周神经炎 正进行临床试验的细胞因子基因工程药物正进行临床试验的细胞因子基因工程药物 细胞因子名称适应症公司 IL-10炎症,银屑病,Crohns 病,类风湿关节炎Immunex， Schering-Plough IL-12肿瘤，HIV感

31、染，I型变态反应 GI Tpo血小板减少症GI，沈阳三生 TNF变异体肿瘤国内多家企业 Flt3/flk3 Ligand(FL)肿瘤Immunex Myeloid Progenitor Inhibitory Factor-1 (MPIF-1) 肿瘤大剂量化疗 HGS TGF-慢性皮肤溃疡，多发性硬化症Genzyme Keratinocyte Growth Factor-2 (KGF-2) 促进烧伤、慢性溃疡的伤口愈合；抗癌药 物引起的粘膜损伤；炎症性肠道疾病 HGS MIP-1 变异体肿瘤化疗的骨髓保护作用British Biotech OPG（osteoprotegerin） 骨质疏 松Am

32、gen 骨质疏松Amgen Mulitkine（白细胞产生的细胞 因子混合制剂） 转移性肿瘤CEL-SCI B细胞刺激因子（BlyS）免疫缺陷HGS F体内效果远不如在体外理想 F体内应用毒性反应相当严重 F细胞因子的半衰期过短（以分钟计） 细胞因子与临床细胞因子与临床 细胞因子临床治疗中存在的问题细胞因子临床治疗中存在的问题 F细胞因子的局部应用 F诱导机体持续产生内源性细胞因子 F细胞因子导向疗法 F改进细胞因子在体内的应用方案 F联合应用优于单独用 F细胞因子基因疗法 细胞因子与临床细胞因子与临床 细胞因子疗法，需加以改进细胞因子疗法，需加以改进 新细胞因子的基因克隆化新细胞因子的基因克

33、隆化 从人类基因组发现从人类基因组发现新细胞因子 后基因组时代后基因组时代 的的“捞鱼捞鱼” (1). 传统的传统的细胞因子细胞因子克隆化策略克隆化策略 活性筛选活性筛选 发现免疫分子的活性线索 免疫分子表达细胞 提取mRNA 逆转录成为cDNA 克隆化至真核表达载体 转化宿主细胞 免疫分子活性筛选 鉴定 例例1 1：IL-3IL-3的发现的发现（Cell 1986， 47：3，） 猴T细胞系 UCD-144MLA CML细胞 刺激增殖 提取mRNA cDNA libraries 构建的cDNA 表达文库 含30000个克隆 cDNA libraries 提取质粒DNA 分成100份， 每份2

34、00个克隆 分别转染 COS-7细胞 测定上清刺激活性 8份具有活性 抗GM-CSF抗体 抑制实验 只有1份 不被抑制 进一步有限 稀释法筛选 获得猴IL-3 cDNA 杂交筛选人的基因文库 获得人获得人IL-3 IL-3 序列序列 cDNA libraries 根据根据N端序列筛选端序列筛选 发现免疫分子的活性线索发现免疫分子的活性线索 免疫分子表达细胞免疫分子表达细胞 大批量提取活性蛋白大批量提取活性蛋白 N端氨基酸序列分析端氨基酸序列分析 推断核苷酸序列推断核苷酸序列 合成寡核苷酸探针或引物合成寡核苷酸探针或引物 RT-PCR或杂交筛选免疫分子或杂交筛选免疫分子cDNA文库文库 鉴定鉴定

35、 例：例：IL-15 （Science 1994，264：965） 猴肾上皮细 胞系CV- 1/EBNA 培养上清 刺激 不被IL-2抗体所抑制 纯化 测定N端33个氨基酸序列 合成引物 推测两端DNA序列 N C 53 扩增92bp cDNA做为探针 筛选原始文库 获猴IL-15阳性克隆筛选人cDNA文库 获得人IL-15 （PCR） 53 细胞因子和受体相互关系的研究细胞因子和受体相互关系的研究 利用利用酵母双杂交系统酵母双杂交系统研究蛋白与蛋白相互关系研究蛋白与蛋白相互关系 酵母酵母 A B C 酵母双杂交系统的建立基于“真核生物调控转录起始调控转录起始”。 酵母双杂交系统的建立与发展酵母双杂交系统的建立与发展 酵母双杂交系统的建立基于“真核生物调控转录起始调控转录起