2019年高考生物考前回归课本——动物细胞工程

1、人教版高考三轮复习教材回扣系列专题专题 2一、动物细胞工程知识要点细胞工程（二）动物细胞工程知识点原理 细胞的增殖背诵内容能力要求牢记原理特别提醒是动物细胞工程的基础制备细胞悬液原代培养传代培 养牢记动物细胞培养的 过程通常选用幼小动物的原因是幼小 动物的细胞分裂旺盛制备细胞悬液的方法:动物组织块 掌握制备细胞悬液的成块的组织中的细胞靠在一起，彼剪碎用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处方法/理解制备细胞悬此限制了细胞的生长和增殖理培养液稀释/原因)液的原因原代培养：将动物组织块消化后的初次培养 / 贴壁生长 : 悬液中分散的细 理解原代培养的概念 /胞很快就贴附在瓶壁上。贴附瓶壁上 理解贴壁生长和接触癌细

2、胞没有接触抑制，在瓶壁上可以生长多层/接触抑制体现细胞膜的进行细胞间信息传递功能动物细胞培养过程 的细胞才能生长增殖 /接触抑制 : 当 抑制的现象 /区分原代贴壁 细胞分裂生长到表面相互接触 培养和传代培养/ 时，细胞就会停止分裂增殖传代培养 :贴满瓶壁的细胞用胰蛋白酶处理后分瓶继续培养 /(10 代以内牢记不同阶段的细胞的细胞特点是保持细胞正常的二倍特点 / 理解并牢记 50体核型/1050/50 代内细胞特点是克代以后的细胞的特点服细胞寿命的自然极限，获得不死性，细胞发生了突变)无菌、无毒环境:三措施（培养液和牢记保证无菌无毒的所有培养用具要高压蒸汽灭菌、培养三种措施及其意义条件 基中添

3、加抗生素、定期更换培养基）营养 :糖、氨基酸、促生长因子、无 理解理解细胞体外培机盐、微量元素、动物血清血浆等 / 养所需营养与体内相添加抗生素是防止培养过程中的污染/定期更换培养液是防止细胞代谢产物积累对细胞细胞自身造 成危害加入血清的原因:血清中含有许多 未知成分合成培养基:根据细胞所需的营养物 同/理解合成培养基 质，按种类和所需数量严格配制而成的培养基温度和 ph:与动物的体温相似，哺乳 理解培养温度和 ph 与温度和 ph 主要是影响细胞内酶的动物 36.50.5，多数动物的适宜 体内环境相似 /记住哺ph 为 7.2 7.4气体环境 :co 培养箱(95%的空气+5%2的 co )

4、/用培养皿或松盖培养瓶 2目的 得到细胞株和细胞系乳动物的温度条件理解 co 的作用 2理解过程中没有分化活性o 是细胞代谢所必须的，co 维持 2 2培养液中的 ph保存在液氮或超低温环境中生物制品：病毒疫苗、干扰素、单克 了解细胞培养得到的以上都可以借助动物细胞的大规动物细隆抗体等基因工程的受体细胞:10 代以内 应用检测物质毒性用于细胞的生理/病理/药理等研究原理 动物细胞核的全能性种类 胚胎细胞核和体细胞核移植供体细胞培养卵母细胞的收集培养和处理核移植早期胚胎培养 胚胎移植流程生物制品理解选用 10 代以内细 胞的原因知道检测物质毒性知道在研究上的应用理解原理理解恢复分生能力掌握流程图

5、及其形变 /掌握该流程涉及到的 技术手段模培养来生产保持细胞正常的二倍体核型根据细胞的成活率判断为治疗和预防癌症及其他疾病提供理论依据属于无性生殖胚胎细胞核移植更容易转基因切入位置/ 代孕母牛要同期 发情/ 卵母细胞去核保证克隆动物 遗传特性来自供体 /激活受体细胞 的目的和方法胞核移植a 表示优良供体的正常细胞核1 显微操作去除细胞核2 胚胎移植供体 培养: 选优良供体的组织块进行细胞 理解选择 10 代以内的 可以在此将含有目的基因的表达细胞 培养到 10 代以内的细胞原因载体导入 10 代以内的细胞内卵母 收集及培养： 可以从屠宰场收集卵 掌握卵母细胞的收集选卵母细胞 : 细胞质中含有激

6、发细胞 巢，培养到减数第二次分裂中期 / 处 培养原理、处理方法及 细胞核全能性表达的物质卵黄理及目的 : 用显微操作法去除细胞核 目的 / 选择卵母细胞 多，营养物质丰富体积大，便于和第一极体，目的是保证克隆动物的 的原因核遗传物质全部来自供体 / 选择卵母细胞的原因方法 : 显微注射法 / 激活受体细胞的 牢记核移植的方法、激 方法及目的 : 物理方法如电脉冲，化 活受体细胞的方法和操作核移核移植后的重组细胞发育成重组学方法如钙离子载体、乙醇、蛋白酶 目的 /理解核移植后要植的早期胚胎进行胚胎移植合成抑制剂；目的使受体细胞完成细 激活受体细胞，使其完胞分裂和发育进程成细胞分裂和发育主要性状

7、来自供体细胞核 / 细胞质基 会分析犊牛的遗传性表现型=基因型+环境/ 生物的性状犊牛因来自卵母细胞 / 基因表达还受代孕 状/ 明确犊牛的遗传性 是由细胞核基因和细胞质基因共动物细胞性状母牛的影响/转基因克隆动物目的 培育与供体基本相同的个体加速家畜遗传改良进程，促进优良畜 群繁育保护濒危动物，增加其存活数量 应用作为生物反应器生产医用蛋白提供异种移植的器官和组织 了解胚胎发育及衰老过程原理 细胞膜的流动性和细胞增殖两个或多个动物细胞结合成一个细 概念胞的过程细胞培养诱导融合有丝分裂 杂交细胞状主要来自供体理解卵母细胞去核理解其无性繁殖理解保护生物多样性理解生物反应器理解免疫排斥反应了解胚胎

8、发育过程记住融合原理记住概念理解杂交细胞是单核 细胞同控制的还受环境影响线粒体含有 dna/发育中存在变异问题 : 成功率低 / 技术不成熟 / 健康 问题/严禁生殖性克隆人提倡医药及研究性克隆 /胚胎干细 胞的诱导分化研究克隆动物对胚胎发育的影响 区别植物体细胞杂交标准是形成一个单核细胞而不是 多核杂交细胞的染色体、基因和倍性等 于亲本细胞的相加灭活是使病毒失去感染能力，但不融过程 诱导方法 : 电激、聚乙二醇、灭活的 掌握诱导方法和成功会破坏病毒的抗原结构，在病毒表合病毒 / 成功标志是完成一次有丝分裂 标志 / 病毒诱导融合原 面糖蛋白和一些酶的作用下使细/融合目标是得到细胞株、细胞系理

9、胞膜上的蛋白质和脂质分子重排， 细胞膜打开发生融合意义应用突破有性杂交的局限，使远缘杂交成记住细胞融合的意义为可能研究细胞遗传/免疫/肿瘤、单克隆抗 主要是用来制备单克 体制备隆抗体融合实质是细胞核融合传统 方法：从动物血清中分离所需抗体制备 缺陷：产量低、纯度低、特异性差原理 细胞膜的流动性和细胞增殖免疫小鼠 : 注射特定的抗原蛋白，从 脾脏中提取 b 淋巴细胞培养骨髓瘤细胞：诱导融合 : 方法 用灭活的病毒 / 原理 是细胞膜的流动性/融合形式知道传统制备方法知道传统制备的缺陷了解制备原理理解 b 细胞种类理解其是细胞培养明确动物特有方法向动物体内反复注射某种抗原，使 动物产生抗体然后提取

10、细胞培养是基础从脾脏中提取的 b 细胞种类非常 多保存的骨髓瘤细胞细胞系考虑两两融合有三种融合形式， bb 融合、瘤瘤融合、b 瘤融合筛选杂交瘤细胞 : 杂交瘤细胞的种类 理解杂交瘤细胞的特单克操作很多和特点 : 既能无限增殖又能产生 点/ 掌握筛选原理和方 抗体 / 筛选方法及原理 : 用特定的选 法/ 理解筛选出来的杂在特定选择培养基上 , 未融合的细 胞、融合的同种核的细胞死亡 , 融 合的杂种细胞存活隆抗体制备流程流程图择性培养基专一抗体阳性检测 : 检测目的 是将产 生特定抗体的杂交瘤细胞筛选出来 / 方法 是用被标记的特定抗原 / 克隆化 培养工具:多孔培养板扩大培养 : 方式在小

11、鼠的腹腔或体外 培养基中提取分离 : 单抗优点 是特异性强、灵 敏度高、能大量制备交瘤细胞种类很多理解“单 ( 单个杂交瘤克隆化培养是在多孔培养板中进细胞)克隆抗体”含义/行，不会出现接触抑制/标记抗原理解检测原理理解细胞培养的基础多次筛选牢记单抗优点关注流程图及其形变制备哪种单抗就注射哪种抗原第一次筛选用特定的选择性培养基第二次筛选用专一抗体阳性检测多孔培养板的每一个孔只能容纳一个杂交瘤细胞作为诊断试剂 : 优点是准确、高效、 简易、快速/标记物是抗体应用治疗疾病:单独治疗疾病运载药物:生物导弹附表 1：植物组织培养与动物细胞培养的比较区别单抗优点理解单抗的特异性单抗制备涉及到的技术 : 细

12、胞培了解其高效、副作用小 养、细胞融合比较项目理论基础前处理取材培养基性质培养基成分结果植物组织培养 植物细胞的全能性无菌、离体植物较幼嫩的部位或花药等固体水、矿质元素、蔗糖、维生 素、植物激素、琼脂等 最终产生新个体，体现了细 胞的全能性动物细胞培养细胞增殖无菌；用胰蛋白酶处理，使组织 细胞相互分散开动物胚胎或出生不久的幼龄动 物的器官或组织液体糖、氨基酸、无机盐、促生长因 子、微量元素、动物血清等 细胞培养产生大量细胞，不形成 新个体，不能体现细胞的全能性相同点都需人工条件下的无菌操作；都需要适宜的温度、ph 等条 件；都进行有丝分裂，都不涉及减数分裂附表 2：植物体细胞杂交与动物细胞融合

13、的比较项目培养条件细胞融合原理植物体细胞杂交营养物质(水、无机盐、蔗糖、氨 基酸和有机酸等)、激素(细胞分裂 素、生长素等)及其他条件(无菌、 适宜的温度和 ph 等)细胞膜的流动性、细胞的全能性动物细胞融合葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无 机盐、微量元素、血清或血浆等天 然成分细胞膜的流动性、细胞增殖细胞融用纤维素酶、果胶酶去除细胞壁后 用胰蛋白酶或胶原蛋白酶使细胞合方法诱导手段结果用途诱导原生质体融合物理法：离心、振动、电激等； 化学法：聚乙二醇(peg)获得杂种植株克服不同生物远缘杂交不亲和的分散成单个细胞后，诱导细胞融合 物理、化学法：与植物体细胞杂 交的相同；生物法：灭活的病毒获得杂种

14、细胞，以生产细胞产品 制备单克隆抗体、病毒疫苗、干扰2障碍素等二、考向诊断1有关动物细胞培养的判断(1) 制备肝细胞悬液时先用剪刀剪碎肝组织，再用胃蛋白酶处理( )(2) 肝细胞培养过程中通常在培养液中通入 5%的 co 刺激细胞呼吸( )(3) 在 25 的实验条件下可顺利完成大鼠神经细胞的培养( )(4) 培养保留接触抑制的细胞在培养瓶壁上可形成多层细胞( )(5) 克隆培养法培养过程中多数细胞的基因型会发生改变( )(6) 二倍体细胞的传代培养次数通常是无限的( )2有关动物细胞核移植的判断(1) 动物细胞核移植的受体细胞必须是卵细胞( )(2) 克隆动物的性状与供体动物完全相同( )(3) 与“多利”羊等克隆哺乳动物相关的技术有胚胎移植、细胞培养和核移植( )(4) 用于核移植的供体细胞一般都选用 10 代以内的培养细胞( )3.判断有关动物细胞融合和单克隆抗体制备的叙述(1) 植物原生质体融合与动物细胞融合原理是相同的( )(2) 体细胞杂交技术可用于克隆动物和制备单克隆抗体( )(3) 小鼠骨髓瘤细胞的染色体数为 40，b 淋巴