高效液相色谱实验汇总

1、化学与材料工程学院环境监测分析实验报告实验名称：高效液相色谱分析苯 -甲苯混合物专业班级：应化 13学号： 150313135姓名：朱建南指导教师：实验地点：翟春敬行楼 a210实验日期： 2016 年 11 月 28 日高效液相色谱实验一、 实验目的1 了解 hplc 仪器的基本构造和工作原理，掌握 hplc 的基本操作；2 学习苯-甲苯混合物的定性分析方法；3 评价色谱柱柱效；4 了解色谱定量操作的主要方法以及各自特点；5 学习未知样品的定量分析方法。二、 实验原理不同组分因在互不相溶的流动相与固定相中的分配比不同，当两相做相对运动时，组分 在两相之间反复进行多次分配，最终实现不同组分的分

2、离。色谱仪器的构成：包括高压输液系统、进样系统、分离系统，检测系统等1色谱定性分析方法a 保留时间定性 2色谱定量分析方法b 峰高增量定性a 归一化法,要求所有组分必须全部出峰。b 标准曲线法（外标法）。简单、方便, 结果受到操作技术因素以及具体色谱条件影响 较大。三、 仪器与试剂lc-1602a 型高效液相色谱仪、甲醇(色谱纯) 、苯、甲苯、苯甲苯四、 高效液相色谱仪操作步骤1. 流动相的预处理甲醇溶液，用 0.45m 有机滤膜过滤，超声波清洗器脱气 1020 min，装入流动相贮液 瓶。2. 准备苯-甲苯混合试样和苯、甲苯标样3. 高效液相色谱仪操作a 依次高压输液泵和检测器电源开关；b

3、打开色谱工作站，在仪器控制面板中，设置波长，并开灯；c 打开三通阀，在仪器控制面板中，设置流速为 5ml/min, 启动高压泵，排除流路中 的气泡。排气结束后，点击停止按钮，停止高压泵。d 关 闭 三 通 阀 ， 设 置 最 小 压 力 (0.1) 和 最 大 压 力 (20) ， 并 设 置 实 验 需 要 的 流 速 (0.5ml/min)，启动高压泵。e 用平头微量注射器洗涤进样口后，取试液 30 l，将进样阀柄置于“load”位置时注入样品，转动阀柄至“inject”位置，此时软件自动进入“采集数据”模式。注意！平头微量注射器用甲醇清洗 3 次后，再用试液清洗 3 次，避免气泡。 f

4、待所有色谱峰流出完毕后，按“停止采集”键，保存数据。g 点击谱图处理中的定量结果，记录组分的保留时间以及峰面积、峰高等色谱信息。 注意！注射器进不同样品前，使用专用清洗注射器在进样阀的“load”和“inject”位置，用流动相清洗几次。注意！注射器进不同样品前，使用专用清洗注射器在进样阀的“load”和“inject” 位置，用流动相清洗几次。4结束工作所有样品分析完毕后，流动相继续流动 1020 min，至基线稳定。关闭检测器，按“stop” 停泵。关闭泵电源。五、 实验内容1. 分别进样苯、甲苯标样和苯-甲苯混合试样，保留时间定性，记录苯-甲苯混合试样色 谱谱，计算分离度。2. a. 分

5、别采集系列甲苯溶液以及未知试样的色谱图，根据保留时间定性，确定甲苯组分 峰的位置，并测定各自的峰面积。b. 根据实验数据，利用外标法绘制标准工作曲线，并计算待测溶液中甲苯的含量。 六、实验图谱与数据处理1、0.001%序号 保留时间（min） 峰面积（mau*s） 峰高（mau） 分离度1 3.438 7.180 2.1322 3.813 1.485 0.6343 3.972 9.435 2.2810.001%1.1293.4971.0472.53.9723.4382.0信号值（mau）1.51.00.53.2883.8133.5930.00 1 2 3 4 5 6 7 8时 间（ min ）

6、图 1：含量 0.001%的液相色谱图2、0.01%序号 保留时间（min） 峰面积（mau*s） 峰高（mau） 分离度1 3.415 73.635 12.4452 3.798 86.339 1.9863 3.948 91.255 10.798143.4155.3711.5740.8720.01%信号值（mau）121086422.3913.9483.7980-20 1 2时3间（min4 5 6）图 2：含量 0.01% 的液相色谱图3、0.1%序号 保留时间（min） 峰面积（mau*s） 峰高（mau） 分离度 1 3.437 639.561 132.655 - 2 3.820 578

7、.256 22.367 1.554 3 3.963 618.367 121.775 0.6420.1%1403.437信号值（mau）120100806040200-203.9683.8200 1 2 3时 间（min）4 5 6图 3：含量 0.1% 的液相色谱图4、苯增 0.1%序号 保留时间（min） 峰面积（mau*s） 峰高（mau） 分离度 1 3.428 721.86 274.169 - 2 3.813 1436.477 26.776 1.587 3 3.962 709.341 122.955 0.652苯 增0.1%信号值（mau）300250200150100503.4283

8、.9623.8132.40200 1 2 3 4 5时 间（ min ）图 4：苯增 0.1%的液相色谱图65、1%序号 保留时间（min） 峰面积（mau*s） 峰高（mau） 分离度1 3.438 14229.737 1685.4642 3.800 13768.573 1386.9013 3.967 17818.787 1690.9341.5461.3370.4571%1800160014003.438 3.967 3.800 信号值（mau）120010008006004002000-2000 1 2 3时 间（min）4 5 6图 5：含量 0.001%的液相色谱图序号 浓度% 苯 峰

9、面积（mau*s） 甲苯 峰面积（mau*s）123450.001 1.485 9.4350.01 86.339 91.2550.1 578.256 618.3671 13768.573 17818.787待测 1436.477 709.34120000 15000 苯甲 苯峰面积（10000 mau*s5000 ）00.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0含量 （ % ）图 6：含量与峰面积的标准曲线图已知待测样中加入了 0.1%的标样，其苯的峰面积为 1436.477 （au*s），甲苯的峰面积为 709.341（au*s）。从图 6 中找出对应的苯含量为 0.123（%），甲苯为 0.0623（%）。七、 思考题：（1）若进样之后，没有样品峰出现，有哪些可能的原因？答：仪器漏液；分析时间过短；进样量少、样品浓度低等（2）与气相色谱柱相比，为何液相色谱柱一般都很短？答：高效液相色谱柱采用的填料粒径很小，常规 5-20um，填料还有涂层、键合物等，这样物质在经过色谱柱的时候分配的次数就相当多了。气相色谱柱的填料粒径较大，或是无填料，与液相色谱柱比较起来的话，气相的色谱柱单位长度的理论塔板数要远远低于液相，为了达到比较理想的分离效果，要求理论塔板数要达到一定的数量，因此气相的色谱柱一般 都比高效液相的色谱柱长得多。