临床微生物检验：嗜血杆菌属

1、广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室 M K H2 M K R1-N = N -R2 + 4 H R1-N H2 + N H2-R2 A D P + Pi H 2 H2 4 H H2a se c y t F d h 2 F o rm a te 2 C O2 + 4 H A R a se A T P A T P a se 4e- 4e- C y to p la sm ic m e m b ra n c e O u t m e m b ra n c e P e rip la sm + + + + 4 H+4 H+ AU 0.00 0.20 0.40 0.60 0.80

2、 Minutes 5.0010.0015.0020.0025.0030.0035.0040.0045.0050.00 14.487 18.924 22.332 嗜血杆菌属嗜血杆菌属 HaemophilusHaemophilus 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室 嗜血杆菌属（嗜血杆菌属（HaemophilusHaemophilus） 与临床有关的与临床有关的9 9个种：个种： n流感嗜血杆菌（流感嗜血杆菌（H.influenzaeH.influenzae） n副流感嗜血杆菌（副流感嗜血杆菌（H .parainfluenzaeH .parainfluenzae）

3、n溶血嗜血杆菌（溶血嗜血杆菌（H .haemolyticusH .haemolyticus） n副溶血嗜血杆菌（副溶血嗜血杆菌（H .parahemolyticusH .parahemolyticus） n杜克嗜血杆菌（杜克嗜血杆菌（H .ducreyiH .ducreyi） n埃及嗜血杆菌（埃及嗜血杆菌（H .aegyptiusH .aegyptius） n嗜沫嗜血杆菌（嗜沫嗜血杆菌（H .aphrophilusH .aphrophilus） n副嗜沫嗜血杆菌（副嗜沫嗜血杆菌（H .paraphrophilusH .paraphrophilus） n迟缓嗜血杆菌（迟缓嗜血杆菌（H .segn

4、isH .segnis） 代表菌：流感嗜血杆菌（代表菌：流感嗜血杆菌（H .influenzaeH .influenzae） 除这两菌外均不溶血除这两菌外均不溶血 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室 流感嗜血杆菌菌名来自流感嗜血杆菌菌名来自1892年流年流 感世界大流行感世界大流行, 由费佛由费佛 （Dr. Pfeiffer) 博士发现。博士发现。 直至直至1933年将流感病毒分离成功年将流感病毒分离成功 才确认流感的真正病原体。才确认流感的真正病原体。 但流感嗜血杆菌这一错名却仍沿但流感嗜血杆菌这一错名却仍沿 用至今。用至今。 嗜血杆菌属（嗜血杆菌属（Haem

5、ophilusHaemophilus） 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室 临床意义临床意义 致病因素：致病因素： 荚膜：荚膜：主要毒力因子主要毒力因子 流感嗜血杆菌根据荚膜的有无分成：流感嗜血杆菌根据荚膜的有无分成： 有荚膜菌株（毒力强，产生有荚膜菌株（毒力强，产生IgA酶）酶） 无荚膜菌株（较少侵略性）无荚膜菌株（较少侵略性） 菌毛：菌毛：黏附作用黏附作用 内毒素：内毒素：发热等发热等 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室 菌种菌种常栖部位及所致疾病常栖部位及所致疾病 流感嗜血杆菌流感嗜血杆菌 原发化脓性感染及继发性呼吸道感染，

6、包括脑膜炎、鼻咽炎、关节炎、原发化脓性感染及继发性呼吸道感染，包括脑膜炎、鼻咽炎、关节炎、 心包炎、鼻窦炎及中耳炎等。心包炎、鼻窦炎及中耳炎等。 副流感嗜血杆菌副流感嗜血杆菌口腔及阴道口腔及阴道正常菌群正常菌群，偶尔可引起心内膜炎、尿道炎。，偶尔可引起心内膜炎、尿道炎。 溶血嗜血杆菌溶血嗜血杆菌鼻咽部鼻咽部正常菌群正常菌群，常引起儿童上呼吸道感染。，常引起儿童上呼吸道感染。 副溶血嗜血杆菌副溶血嗜血杆菌口腔、咽部口腔、咽部正常菌群正常菌群，偶可引起咽炎、化脓性口腔炎和心内膜炎，偶可引起咽炎、化脓性口腔炎和心内膜炎 杜克雷嗜血杆菌杜克雷嗜血杆菌软下疳软下疳，为，为性传播病菌性传播病菌。常引起外阴

7、脓疱、溃疡、淋巴结肿大。常引起外阴脓疱、溃疡、淋巴结肿大。 埃及嗜血杆菌埃及嗜血杆菌急性亚急性结膜炎、儿童巴西紫癜热急性亚急性结膜炎、儿童巴西紫癜热 嗜沫嗜血杆菌嗜沫嗜血杆菌咽部咽部正常菌群正常菌群、牙菌斑中常见菌、偶致心内膜炎和脑脓肿、牙菌斑中常见菌、偶致心内膜炎和脑脓肿 副嗜沫嗜血杆菌副嗜沫嗜血杆菌咽部及阴道咽部及阴道正常菌群正常菌群，偶可引起亚急性细菌性心内膜炎、败血症、甲沟，偶可引起亚急性细菌性心内膜炎、败血症、甲沟 炎、脑脓肿、脑膜炎。炎、脑脓肿、脑膜炎。 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室 形态染色结构形态染色结构 1.G1.G- -小杆菌，球杆状小

8、杆菌，球杆状 2.2.具有多形性（球具有多形性（球 杆、长杆或丝状）杆、长杆或丝状） 3.3.无芽胞，无芽胞，无鞭毛，无鞭毛， 不能运动不能运动 4.4.有荚膜菌株毒力较强有荚膜菌株毒力较强 流感嗜血杆菌流感嗜血杆菌 （H.influenzaeH.influenzae） 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室 流感嗜血杆菌革兰染色流感嗜血杆菌革兰染色 铜绿假单胞菌革兰染色铜绿假单胞菌革兰染色 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室 根据根据荚膜多糖抗原荚膜多糖抗原不同分为不同分为a、b、c、d、e、f 6个个 血清型，血清型，b型型致病性

9、最强致病性最强（Hib疫苗预防）疫苗预防） 能分解葡萄糖、氧化酶（能分解葡萄糖、氧化酶（-）、触酶（）、触酶（+） 根据对吲哚、脲酶、鸟氨酸脱羧酶试验的生化反应根据对吲哚、脲酶、鸟氨酸脱羧酶试验的生化反应 不同分为不同分为8个生物型。个生物型。 抗原性和生化反应抗原性和生化反应 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室 培养特性培养特性 需氧或兼性厌氧，需需氧或兼性厌氧，需5-10%CO2 最适最适T 35-37 （杜克（杜克33） 最适最适pH7.67.8 营养要求高营养要求高 生长需要生长需要X和和V因子（均存在于因子（均存在于 红细胞中）。红细胞中）。 广州医科

10、大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室 培养基：培养基：巧克力平板巧克力平板 血细胞中含有血细胞中含有X、V因子因子，V因子处于抑制因子处于抑制 状态，状态，加热加热80-90 5-15min破坏细胞膜上破坏细胞膜上 抑制物，可使抑制物，可使V因子释放因子释放 巧克力琼脂中巧克力琼脂中加入抗生素加入抗生素可提高检出率可提高检出率 培养特性培养特性 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室 培养特性培养特性 菌落菌落: 无荚膜菌株：灰白色、光滑、半透明小菌落无荚膜菌株：灰白色、光滑、半透明小菌落 有荚膜菌株：有荚膜菌株：灰白色、粘液样、半透明较大菌落

11、灰白色、粘液样、半透明较大菌落 培养培养1824h， 特殊的特殊的“鼠窝味鼠窝味” 不溶血不溶血 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室 流感流感 嗜血嗜血 杆菌杆菌 巧克力平板：灰白色、半透明菌落巧克力平板：灰白色、半透明菌落 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室 流感嗜血杆菌巧克力平板培养流感嗜血杆菌巧克力平板培养24h24h 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室 培养培养48h48h后菌落后菌落 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室 X X因子因子 V V因子因子 溶血溶

12、血 流感嗜血杆菌流感嗜血杆菌 + + + + - - 副流感嗜血杆菌副流感嗜血杆菌 - - + + - - 嗜沫嗜血杆菌嗜沫嗜血杆菌 + + - - - - 副嗜沫嗜血杆菌副嗜沫嗜血杆菌 - - + + - - 溶血嗜血杆菌溶血嗜血杆菌 + + + + + + 副溶血嗜血杆菌副溶血嗜血杆菌 - - + + + + 杜克雷嗜血杆菌杜克雷嗜血杆菌 + + - - - 几种嗜血杆菌对生长因子需求几种嗜血杆菌对生长因子需求 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室 流感嗜血杆菌流感嗜血杆菌“卫星现象卫星现象” MHMH平板上金葡菌周围未见生长平板上金葡菌周围未见生长血平板上金

13、葡萄周围生长（左）血平板上金葡萄周围生长（左） 金黄色葡萄球菌可产生金黄色葡萄球菌可产生V V因子因子 （血平板上出现）（血平板上出现） 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室 卫星现象：金葡菌周围出现生长卫星现象：金葡菌周围出现生长 流感嗜血杆菌流感嗜血杆菌 金葡菌金葡菌 卫星现象卫星现象(satellite phenomenon)(satellite phenomenon) 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室 流感嗜血杆菌流感嗜血杆菌 金葡菌金葡菌 卫星现象卫星现象 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研

14、室 卫星现象卫星现象 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室 “卫星试验卫星试验”是检测对是检测对V因子因子的需求，培养基的需求，培养基加加 血与否血与否是确定细菌对是确定细菌对X因子因子的需求的需求 流感流感仅在血平板上卫星试验（仅在血平板上卫星试验（+），在），在MH上（上（-） 副流感仅需副流感仅需V因子，因子，在血平板和在血平板和MH平板上均可出平板上均可出 现卫星现象。现卫星现象。 卫星试验卫星试验 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室 副流感嗜血杆菌副流感嗜血杆菌V V因子利用试验（因子利用试验（MHMH平板）平板） 广州医

15、科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室 抵抗力弱抵抗力弱 对热敏感：对热敏感：565630min可杀死可杀死 对干燥、消毒剂等敏感对干燥、消毒剂等敏感 自溶酶自溶酶 室温保存，室温保存，4-5天转种一次天转种一次 抵抗力抵抗力 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室 菌落特征菌落特征: 巧克力平板上巧克力平板上灰白色半透明菌落灰白色半透明菌落 卫星试验：卫星试验： 当当流感嗜血杆菌流感嗜血杆菌与与金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌在在血平板血平板上共上共 同培养时，由于同培养时，由于金葡菌能金葡菌能合成释放合成释放V因子因子，并扩散并扩散 到培养基中

16、到培养基中 ，可促进流感嗜血杆菌生长，可促进流感嗜血杆菌生长，在金葡在金葡 菌菌周围生长的菌落较大，越远越小直至没有周围生长的菌落较大，越远越小直至没有。 因子生长试验：因子生长试验： MH平板上贴上平板上贴上X、V、XV因子纸片，在所需因因子纸片，在所需因 子纸片周围生长子纸片周围生长 生化反应生化反应 糖发酵试验糖发酵试验 鉴鉴 定定 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室 流感嗜血杆菌：流感嗜血杆菌： 氧化酶（氧化酶（- -） 触酶试验（触酶试验（+ +） 葡萄糖（葡萄糖（+ +）、蔗糖、乳糖和甘露醇阴性、木糖多）、蔗糖、乳糖和甘露醇阴性、木糖多 （+ +）

17、硝酸盐还原（硝酸盐还原（+ +） 有荚膜菌吲哚（有荚膜菌吲哚（+ +） 无荚膜菌吲哚（无荚膜菌吲哚（- -） 不溶血不溶血 生化反应生化反应 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室 嗜血杆菌嗜血杆菌 因子因子 溶溶 血血 发酵发酵 X XV V葡萄葡萄 糖糖 蔗蔗 糖糖 乳乳 糖糖 甘露甘露 醇醇 木木 糖糖 触触 酶酶 ONPGONPG 流感嗜血杆菌流感嗜血杆菌+ + + +- -+ +- - - -D D+ +- - 副流感嗜血杆菌副流感嗜血杆菌- - + +- -+ + +- -+ +- -D DD D 溶血嗜血杆菌溶血嗜血杆菌+ + + + + +- - -

18、 -D D+ +- - 副溶血嗜血杆菌副溶血嗜血杆菌- - + + + + +- - - -+ +- - 嗜血杆菌属中种的特征嗜血杆菌属中种的特征 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室 微生物学检验微生物学检验 标本采集：标本采集：避免干燥避免干燥 及时送检及时送检 分离培养：巧克力平板生长分离培养：巧克力平板生长 血平板血平板 不生长不生长 微生物学检验微生物学检验 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室 血液血液 脑脊液脑脊液 鼻咽拭子鼻咽拭子 痰痰 脓汁脓汁 增菌培养增菌培养 分离培养分离培养 涂片镜检涂片镜检（G-小杆菌多形性）

19、小杆菌多形性） (巧克力平板巧克力平板 ) 抗原检测抗原检测 35 5-10%CO2 18-24h 菌落形态菌落形态 涂片镜检涂片镜检 卫星试验卫星试验 荚膜肿胀试验荚膜肿胀试验 因子利用试验因子利用试验 (生化反应试验生化反应试验) 报告结果报告结果 检验程序检验程序 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室鉴定依据（流感嗜血杆菌）鉴定依据（流感嗜血杆菌） 革兰阴性小杆菌或球杆菌革兰阴性小杆菌或球杆菌 营养要求高，营养要求高，巧克力平板出现特征性的菌巧克力平板出现特征性的菌 落，血平板不生长落，血平板不生长 卫星现象卫星现象 需需X X、V V两种因子两种因子 触酶

20、试验（触酶试验（+ +） 荚膜肿胀试验（荚膜肿胀试验（+ +） 不溶血不溶血 生化试验鉴定到种生化试验鉴定到种 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室 采用采用KB法，用法，用HTM（Haemophilus Test Medium Base)培养基。培养基。 常规检测常规检测内酰胺酶和氯霉素乙酰转移酶内酰胺酶和氯霉素乙酰转移酶 药敏试验用氨苄西林，阿莫西林，磺胺类，药敏试验用氨苄西林，阿莫西林，磺胺类， 第二、三代头孢，红霉素，氨曲南等抗生素第二、三代头孢，红霉素，氨曲南等抗生素 药敏试验药敏试验 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室C

21、ase studyCase study 原始资料：原始资料： 标本来源：标本来源：痰痰 年龄年龄：58 性别：性别：女女 临床诊断：临床诊断：肺炎肺炎,痰涂片革兰染色见大量脓细胞痰涂片革兰染色见大量脓细胞,及及 大量革兰阴性球杆菌大量革兰阴性球杆菌 试验说明：试验说明：鉴定所有病原菌鉴定所有病原菌/做做内酰酶试验及药内酰酶试验及药 敏试验敏试验 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室 标本直接涂片革兰染色镜下图：效果一般，最后在边缘看到革兰标本直接涂片革兰染色镜下图：效果一般，最后在边缘看到革兰 阴性杆菌，但球杆菌并不多（镜下特征可排除卡他）阴性杆菌，但球杆菌并不多

22、（镜下特征可排除卡他） 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室 血平板：血平板：草绿溶血小菌落，无脐窝状菌落（排草绿溶血小菌落，无脐窝状菌落（排 除除）。）。 麦康凯平板：麦康凯平板：菌落少，无特征性菌落少，无特征性(排除排除.)。 标本在巧克力平板（标本在巧克力平板（CA）上接种后形成中等大小）上接种后形成中等大小 灰白色半透明光滑湿润菌落，分纯、卫星试验、灰白色半透明光滑湿润菌落，分纯、卫星试验、 XV因子生长试验、生化鉴定因子生长试验、生化鉴定 标本培养初步结果标本培养初步结果 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室 巧克力平板巧克

23、力平板48h48h菌落菌落 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室 巧克力平板（巧克力平板（CACA）纯培养革兰染色镜下）纯培养革兰染色镜下 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室 血平板上血平板上“卫星试验卫星试验”阳性阳性 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室 MHMH平板上平板上“卫星试验卫星试验”阴性阴性 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室 MHMH平板上平板上X X、V V因子利用生长试验因子利用生长试验 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教

24、研室 APIAPI生化鉴定条加试剂前生化鉴定条加试剂前 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室 APIAPI生化鉴定条加试剂后（生化鉴定条加试剂后（PENPEN孔黄色提示孔黄色提示B B内酰胺酶阳性）内酰胺酶阳性） API NH API NH鉴定编码：鉴定编码：14241424， 鉴定结果：流感嗜血杆菌。鉴定结果：流感嗜血杆菌。 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室 ATBATB板条药敏实验板条药敏实验 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室 K-BK-B法药敏法药敏 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生

25、物检验教研室生物检验教研室 K-BK-B法药敏法药敏 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室 杜克雷嗜血杆菌杜克雷嗜血杆菌 软下疳软下疳（性传播性疾病）（性传播性疾病）患者病原菌，又称患者病原菌，又称 软下疳杆菌软下疳杆菌 革兰阴性短小杆菌，有两极浓染现象革兰阴性短小杆菌，有两极浓染现象 取病灶标本涂片染色镜检见取病灶标本涂片染色镜检见典型鱼群样排列典型鱼群样排列 可初步诊断可初步诊断 杜克雷嗜血杆菌杜克雷嗜血杆菌 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室 杜克嗜血杆杜克嗜血杆 菌引起的腹菌引起的腹 股沟软下疳股沟软下疳 （已破溃）（已破溃

26、） 杜克雷嗜血杆菌杜克雷嗜血杆菌 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室 分泌物涂片中杜克嗜分泌物涂片中杜克嗜 血杆菌血杆菌鱼群样排列鱼群样排列 杜克雷嗜血杆菌杜克雷嗜血杆菌 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室 微生物学检查微生物学检查 镜检：溃疡取材涂片染色镜检。镜检：溃疡取材涂片染色镜检。 培养：培养：较为困难，国际上软下疳的标准培养基一种较为困难，国际上软下疳的标准培养基一种 是是GCHGS（Hammond gonococcal media），）， 由淋球菌琼脂培养基加牛血红蛋白、胎牛血清、万由淋球菌琼脂培养基加牛血红蛋白、胎牛

27、血清、万 古霉素及纤维素、氨基酸等组成；另外一种是古霉素及纤维素、氨基酸等组成；另外一种是 MHHb（Muller-Hinton琼脂，由琼脂，由Muller-Hinton 琼琼 脂、马血、万古霉素及其他培养成份组成）。脂、马血、万古霉素及其他培养成份组成）。 培养培养7天天形成色灰黄而透亮，直径约形成色灰黄而透亮，直径约1-2mm菌落。菌落。 杜克雷嗜血杆菌杜克雷嗜血杆菌 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室 1. 简述流感嗜血杆菌的生物学特性。简述流感嗜血杆菌的生物学特性。 2.何为卫星现象？何为卫星现象？ 思考题思考题 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生

28、物检验教研室生物检验教研室 军团菌属军团菌属 LegionellaLegionella ,li:d,li:dnelnel 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室分分 类类 属于军团菌科属于军团菌科（Legionellaceae）军团菌属军团菌属(Legionella) 常见的与人类疾病有关的军团菌：常见的与人类疾病有关的军团菌： 嗜肺军团菌（嗜肺军团菌（Legionella pneumophila） 米克戴德军团菌（米克戴德军团菌（L. micdadei） 长滩军团菌（长滩军团菌（L. longbeachae） 杜莫夫军团菌（杜莫夫军团菌（L. dumoffii）

29、波兹曼军团菌（波兹曼军团菌（L. bozemanii） 等等等等 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室临床意义临床意义 军团菌在自然界的军团菌在自然界的水环境中水环境中广泛存在，在广泛存在，在人工管人工管 道的水源道的水源（空调，制冷水塔，淋浴头等供水系统（空调，制冷水塔，淋浴头等供水系统 ）中及辅助）中及辅助呼吸机所产生的气溶胶呼吸机所产生的气溶胶中。中。 空气乳胶微粒传播空气乳胶微粒传播 医院感染逐年增多医院感染逐年增多 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室 致病物质：致病物质： 1. 菌毛菌毛 2. 侵袭性酶类侵袭性酶类 3.

30、内毒素内毒素 临床意义临床意义 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室 引起肺炎型、肺外感染型、非肺炎型感染。引起肺炎型、肺外感染型、非肺炎型感染。 肺炎型：以肺炎症状，起病急，致死率高。肺炎型：以肺炎症状，起病急，致死率高。 肺外感染型：从肺部扩散，导致脑、肾和肝多肺外感染型：从肺部扩散，导致脑、肾和肝多 脏器感染脏器感染 非肺炎型：潜伏期短，似流感症状（发热，头非肺炎型：潜伏期短，似流感症状（发热，头 痛，咳嗽，乏力等），多自限性。痛，咳嗽，乏力等），多自限性。 临床意义临床意义 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室生物学特性生物学

31、特性 1. 1. 革兰阴性杆菌，着色浅，多形性革兰阴性杆菌，着色浅，多形性 2. 2. 专性需氧专性需氧, ,但但5%5% COCO2 2可以促进生长可以促进生长 3. 3. 无芽胞，无荚膜，无芽胞，无荚膜，有端或侧鞭毛有端或侧鞭毛 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室生物学特性生物学特性 4.4. 细胞内寄生细胞内寄生 5.5. 生长营养要求苛刻生长营养要求苛刻 需要需要L-L-半胱胺酸和铁离子半胱胺酸和铁离子 培养基：培养基：活性炭活性炭- -酵母浸出液琼脂培养基（酵母浸出液琼脂培养基（ bu

32、ffered charcoal-yeast extract agar,buffered charcoal-yeast extract agar,BCYEBCYE) )。 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室 培养嗜肺军团菌的培养嗜肺军团菌的BCYEBCYE平板平板 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室 BCYEBCYE不含半胱氨酸不含半胱氨酸 嗜肺军团菌生长需嗜肺军团菌生长需L L半胱氨酸和铁半胱氨酸和铁 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室生物学特性生物学特性 6. 6. 生长缓慢，培养生长缓慢，培养1

33、414天为阴性才可报告。天为阴性才可报告。 7. 7. 在体外的生长温度是在体外的生长温度是15-4315-43，最佳为，最佳为 3535。 8.8.菌落特征：菌落特征： 圆形，凸起，灰白色，有光泽，某些紫外圆形，凸起，灰白色，有光泽，某些紫外 光下可发荧光，可产水溶性色素。光下可发荧光，可产水溶性色素。 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室 血清型血清型 有有H H和和O O抗原抗原 根据根据O O抗原，可分为抗原，可分为1515个个血清型血清型 临床上以血清临床上以血清1 1和和6 6型最常见型最常见 生物学特性生物学特性 广州医科大学临床微广州医科大学临床微

34、 生物检验教研室生物检验教研室 9.9.生化反应（生化反应（不活泼不活泼） 1 1）不分解糖类）不分解糖类 2 2）氧化酶试验）氧化酶试验: :-/+-/+ 3 3）硝酸盐还原：）硝酸盐还原：- - 4 4）脲酶：）脲酶：- - 5 5）触酶试验）触酶试验: :+ + 6 6）明胶液化：）明胶液化：+ + 7 7）马尿酸盐分解试验）马尿酸盐分解试验: : + + ( (嗜嗜肺军团菌）肺军团菌） - - (其它军团菌其它军团菌) 生物学特性生物学特性 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室 抵抗力：抵抗力： 在在 蒸馏水蒸馏水 中可存活中可存活100100天以上天以上

35、 在在 下水道污水下水道污水 中可存活中可存活1 1年年 对热和常用化学消毒剂敏感对热和常用化学消毒剂敏感 1% 1%来苏水几分钟即可杀死来苏水几分钟即可杀死 对氯作用的抵抗力比肠道菌大。对氯作用的抵抗力比肠道菌大。 生物学特性生物学特性 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室温度对军团菌影响温度对军团菌影响 7070军团菌立刻死亡军团菌立刻死亡 60 90%60 90%军团菌在军团菌在2 2分钟内死亡分钟内死亡 50 90%50 90%军团菌在军团菌在80-12480-124分钟内死亡分钟内死亡) ) 48 4850 50 能存活但不能繁殖能存活但不能繁殖 323

36、24242合适生长范围合适生长范围 252545 45 生长范围生长范围 20 L1 L. .pneumophilapneumophila(subgroup 1-6) (subgroup 1-6) 22 L L. .micdadeimicdadei 3 L3 L. .bozemaniibozemanii 44 L L. .dumoffii 5 Ldumoffii 5 L. .gormaniigormanii 抗原制备：抗原制备： 1)1)准备菌悬液挑取菌至含有准备菌悬液挑取菌至含有0.50.5- -1 ml1 ml的生理盐水的生理盐水(0.85 (0.85 ) )的玻璃试管中，充分混匀。的玻璃

37、试管中，充分混匀。 2)2)加热加热121(15min)121(15min)或或100(1h)100(1h) 3)3)浓缩浓缩30003000- -3500 rpm(15min),3500 rpm(15min),去上清去上清 4)4)抗原液准备加生理盐水抗原液准备加生理盐水(0.85(0.85) )溶解溶解 5)5)凝集反应凝集反应在玻片上各滴加在玻片上各滴加1 1滴血清和抗原液，轻摇混滴血清和抗原液，轻摇混 匀反应，匀反应，2min2min内观察结果。阳性可见明显内观察结果。阳性可见明显 的的细颗粒细颗粒。 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室 检测血清抗体（检

38、测血清抗体（IgG 和和 IgM） 1. . 间接免疫荧光法间接免疫荧光法(IFA)(IFA)，如恢复期比急性期血清，如恢复期比急性期血清 标本滴定度标本滴定度上升上升4 4倍并达倍并达1 1：128128或滴定度在或滴定度在1 1： 128128以上；以上； 2. 2. 试管凝集实验和微量凝集实验试管凝集实验和微量凝集实验(TAT)(TAT)，两份血清，两份血清 标本前后抗体滴定度上升标本前后抗体滴定度上升4 4倍并达倍并达1 1：160160或滴或滴 定度在定度在1 1：160160以上；两份标本前后抗体滴定度以上；两份标本前后抗体滴定度 上升上升4 4倍并达倍并达1 1：6464或滴定度

39、在或滴定度在1 1：6464以上，以上，( (微微 量凝集实验量凝集实验) )。 3. ELISA3. ELISA法。法。 免疫学检测免疫学检测 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室 是快速特异的方法，采用是快速特异的方法，采用DNA探针及探针及 PCR扩增扩增16SrRNA的方法均可用于军团的方法均可用于军团 菌的快速诊断菌的快速诊断 核酸检测核酸检测 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室普通普通PCRPCR鉴定鉴定 PCR检测两种基因(16SrRNA和Mip) 1.16SrRNA1.16SrRNA是所有细胞中最保守的基因，用测序或

40、是所有细胞中最保守的基因，用测序或 PCRPCR检测编码的基因可鉴定一种生物学分类。检测编码的基因可鉴定一种生物学分类。 2.Mip(macrophage infectivity potentiator)基因编码基因编码 军团菌一种表面蛋白军团菌一种表面蛋白(24KD)(24KD)的致病因子的致病因子, ,便于菌便于菌 侵入宿主细胞内。侵入宿主细胞内。MipMip基因是军团菌属特有的基因是军团菌属特有的， 且且不同种间序列有明显区别不同种间序列有明显区别。嗜嗜肺军团菌主要寄肺军团菌主要寄 生在水中原生动物和人巨噬细胞内，可用生在水中原生动物和人巨噬细胞内，可用PCRPCR检检 测测Lp mip

41、(Lp mip(L.pneumophilaL.pneumophila mip) mip)来鉴定。来鉴定。 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室药物敏感试验药物敏感试验 一般不做体外药敏试验，目前还没有标一般不做体外药敏试验，目前还没有标 准的方法。准的方法。 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室军团菌感染诊断试验军团菌感染诊断试验 试验试验敏感性敏感性(%) 特异性特异性(%)评注评注 培养鉴定培养鉴定70100参考方法参考方法 直接免疫荧光直接免疫荧光257095不

42、推荐常规应用不推荐常规应用 间接免疫荧光间接免疫荧光709099 只用于嗜肺军团菌血只用于嗜肺军团菌血 清群清群1 酶标记免疫酶标记免疫709099 乳胶凝集乳胶凝集55908599 血清学（间接血清学（间接 免疫荧光）免疫荧光）708095辅助培养辅助培养 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室治治 疗疗 首选首选大环内酯类大环内酯类药物药物 红霉素红霉素1-2g/d,1-2g/d,分分4 4次口服或静脉次口服或静脉 疗程为疗程为2-32-3周周 也可选也可选氟喹诺酮类氟喹诺酮类 其他有效抗生素包括：其他有效抗生素包括： 利福平、利福平、SMZ-TMPSMZ-TM

43、P、四环素、四环素 目前尚未发现对这些药物耐药的菌株。目前尚未发现对这些药物耐药的菌株。 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室思考题思考题 1 1卫星现象是下列哪种细菌形成的卫星现象是下列哪种细菌形成的 A A 百日咳鲍特菌与链球菌百日咳鲍特菌与链球菌 B B 布鲁菌与变形杆菌布鲁菌与变形杆菌 C C 流感嗜血杆菌与金黄色葡萄球菌流感嗜血杆菌与金黄色葡萄球菌 D D 变形杆菌与立克次体变形杆菌与立克次体 E E 金黄色葡萄球菌与大肠埃希菌金黄色葡萄球菌与大肠埃希菌 2.2.生长只需要生长只需要V V因子的是因子的是 A A 流感嗜血杆菌流感嗜血杆菌 B B 副流感嗜血杆菌副流感嗜血杆菌 C C 溶血嗜血杆菌溶血嗜血杆菌 D D 杜克雷嗜血杆菌杜克雷嗜血杆菌 E E 嗜沫嗜血杆菌嗜沫嗜血杆菌 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室 广州医科大学临床微广州医科大学临床微 生物检验教研室生物检验教研室