现代仪器分析论文

1、高效液相色谱法研究摘要：高效液相色谱法 （high performance liquid chromatography，HPLC） 也称高压液 相色谱法。 它是在经典的液相柱色谱的基础上发展而成的一种高效、 快速、高灵 敏的色谱分离方法。根据柱内填料的不同及不同的分离机制，可分为吸附色谱、 分配色谱、 离子交换色谱及凝胶色谱。 由于采用了高效填充剂， 并配以高压输液 泵、高灵敏检测器、 自动记录装置及自动收集装置， 使高效液相色谱法的分离速 度及效率均大大提高，更趋于仪器化、自动化，且使用范围广。制备型的 HPLC 能大量分离制备较纯的样品。随着计算机技术的不断发展， HPLC 与质谱、核磁

2、共振谱、红外光谱等波谱技术的联用进展加快。关键字 ：液相色谱；分类；应用高效液相色谱法是以液体作为流动相， 并彩用颗粒极细的高效固定相的柱色 谱分离技术。 高效液相色谱对样品的适用性广， 不受分析对象挥发性和热稳定性 的限制， 因而弥补了气相色谱法的不足。 在目前已知的有机化合物中， 可用气相 色谱分析的约占 20%，而 80%则需用高效液相色谱来分析。一、高效液相色谱法分类根据分离机理可分为： 吸附色谱、键合相色谱、离子交换色谱、 大小排阻（凝 胶）色谱、液 - 液分配色谱法 。1、吸附色谱分离 吸附色谱法是当组分分子流经固定相（吸附剂，如硅胶或氧化铝）时，不同 组分分子、 流动相分子就要对

3、吸附剂表面的活性中心展开竞争。 这种竞争能力的 大小，决定了保留值大小，即被活性中心吸附得越牢的分子，保留值越大。2、键合相色谱分离 键合相色谱法是将类似于气相色谱中的固定液的液体， 通过化学反应键合到 硅胶表面， 从而形成固定相。 采用化学键合固定相的色谱法称为键合相色谱。 若 采用极性键合相、非极性流动相，则称为正相色谱；采用非极性键合相、极性流 动相，则称为反相色谱。 这种分离的保留值大小， 主要决定于组分分子与键合固 定液分子间作用力的大小。3、离子交换色谱分离离子交换色谱法是流动相中的被分离离子，与作为固定相的离子交换剂上的平衡离子进行可逆交换时，它们对交换剂的基体离子亲和力大小的不

4、同而达到分 离的。组分离子对交换剂基体离子亲和力越大，保留时间就越长。4、大小排阻色谱分离大小排阻色谱法的固定相是一类孔径大小有一定范围的多孔材料。被分离的分子大小不同，它们扩散渗入多孔材料的容易程度不同。小分子最易扩散进入细 孔中，保留时间最长；大分子完全排斥在孔外，随流动相很快流出，保留时间最 短。5、液-液分配色谱法分离液-液分配色谱的固定相和流动相是互不相溶的两种溶剂，分离时,组分溶入两相，不同的组分因分配系数（K）的不同而被分离.目前广泛使用的化学键合固定 相是将固定液的官能团键合在载体上而制成的，使用化学键合固定相的色谱方法 （简称键合相色谱法）可以用分配色谱的原理加以解释键合相色

5、谱法在HPLC中 占有极其重要的地位，是应用最广的色谱法按照固定相和流动相极性的不同，分 配色谱法又可分为正相色谱法和反相色谱法两类 .二、高效液相色谱仪简介高效液相色谱仪主要由：输液系统、进样系统、色谱柱系统、检测系统、数据记录处理系统等组成。色谱转柱1r卡己隶仅Y1检测磐1、输液泵：高效液相色谱的流动相采用高压泵输送，有不同类型的输液泵按输液性质可分为恒压泵和恒流泵.目前使用较多的是柱塞式往复泵2、进样器 ：进样器是将试样送入色谱柱的装置 .一般要求进样装置的密封性好,死体积小,重复性好,保证中心进样 ,进样时对色谱系统的压力 ,流量影响小。3、色谱柱 ： 色谱柱是色谱分离的核心 .为了保

6、证色谱柱的柱效高 ,使用寿 命长 ,一般使用由专业化工厂生产的商品柱.色谱柱管多由不锈钢制成 ,内装一定的固定相色谱往长一般1030cm,内径25mm.化学键合相是广泛使用的固定 相 , 其中又以十八烷基硅烷键合硅胶的应用最为广泛。4、检测器 ：样品经色谱柱分离后进入检侧器进行检测 .按其适用范围检测 器可分为通用型和专属型两大类 ,专属型检测器只能检测某些组分的某一性质,紫外检测器（UVD）,荧光检测器（ED）属于这一类，它们只对有紫外吸收或荧光发射的 组分有响应 ;通用型检测器检测的是一般物质均具有的性质,示差折光检测器（RID）,蒸发光散射检测器（ELSD）等.液相色谱-质谱联用（LC-

7、MS）则是用质谱作为 高效液相色谱的检测器。5、数据记录处理和计算机控制系统 : 现代 HPLC 的特征是用微机控制仪 器.HPLC仪器的中心计算机控制系统，即能做数据采集和分析工作，又能程序控制 仪器的各个部件 ,还能在分析一个试样之后自动改变条件而进行下一个试样的分 析,许多色谱仪的软件系统具有方法认证功能 ,使分析工作更加规范化 .三、高效液相色谱的特点高压 压力可达150300 kg/cm2。色谱柱每米降压为 75 kg/cm2以上。 高速流速为0.110.0 mL/min。高效塔板数可达 5000/米。在一根柱中 同时分离成份可达100种。高灵敏度一一紫外检测器灵敏度可达 0.01

8、ng。同时消 耗样品少。四、高效液相色谱法的应用1. 在鉴别中的应用 在HPLC法中,保留时间与组分的结构和性质有关，是定性的参数,可用于药物的鉴 别.如中国药典收载的药物头孢羟氨苄的鉴别项下规定:在含量测定项下记录的色谱图中,供试品主峰的保留时间应与对照品主峰的保留时间一致.头抱拉定,头孢噻酚钠等头孢类药物以及地西泮注射液,曲安奈德注射液等多种药物均采用HPLC 法进行鉴别。2. 在杂质检查中的应用HPLC 分离效能高 ,灵敏 ,在药物的杂质检查中应用广泛 .主要用于药物中有关物质 的检查。“有关物质”是指药物中存在的合成原料 ,中间体 ,副产物 ,降解产物等物 质 ,这些物质的结构和性质与

9、药物相似 ,含量很低 ,只有采用色谱的方法才能将其 分离并检测 .若杂质是已知的 ,又有杂质的对照品 ,可用杂质对照品做对照进行检 查 .若杂质是未知的 ,可以采用主成分自身对照法或峰面积归一化法进行检查。3. 在含量测定中的应用 用高效液相色谱法侧定含量可以消除药物中的杂质 ,制剂中的附加剂及共存的药 物对测定的干扰 .中药材及其制剂组成复杂 ,基中不少有效成分的含量测定也越来 越多地采用了高效液相色谱法。参考文献1、周蓉，齐莉，王雅芬，朱一川 .药物分析杂志， 2008， 18（增刊）：3233242、刘颖华，何开泽，张军峰 .高压液相色谱分析法 .应用与环境生物学报 .2003（. 9）： 1411453、何伟，韩笑，谭天伟 .北京化工大学学报， 2002，29（ 4）：88894、于村，俞沙，丁钢