大鼠和小鼠辨证论治标准的建立和用途解析

1、编辑：studa20作者：方肇勤，潘志强,大鼠和小鼠辨证论治标准的建立和用途09-12-14 09:55:00 卢文丽，刘小美，管冬元，梁超【摘要】大鼠和小鼠辨证论治方法和标准是具有中医药行业特色的方法和标准，其建立有助于满足中医药辨证论治研发的需要。本文介绍了建立大鼠和小 鼠辨证论治标准所开展的系列研发工作，发现：（1）大鼠和小鼠可以用于模拟 中医临床的诊法和辨证，可以采集到大量的四诊信息，满足辨证论治的需要；（2）禾U用大鼠和小鼠可以实现诊法和辨证的标准化、计量化，所建立的方法便 于实验操作与普及；（3）正常大鼠和小鼠存在体质和证候的差异，常见疾病大 鼠和小鼠会自发形成证候，发生证候的兼夹

2、和演变，与人类近似；（4）证候存在复杂的物质基础，涉及神经内分泌免疫网络各组织基因表达与剪接的差异；（5）利用大鼠和小鼠可以开展个体化辨证论治及计量化疗效比较与评价。该方 法和标准的主要用途包括：（1）证候模型动物的证候属性鉴定；（2）中医基 础学科的研究，如藏象理论、证候的物质基础、辨证论治方法和作用机制、中 医诊断学等研究；（3）中医临床学科的研究，如辨证论治疗效的比较与评价、 辨证论治方案的优化、防治未病的研究；（4）中药学科的研究，如中药药性的 研究、中药和方剂的药理研究等。【关键词】大鼠；小鼠；疾病；证候；四诊客观化；辨证；辨证论治；药性Abstract: Methodology o

3、f syn drome differe ntiati on and syn drome based treatme nt in rats and mice has professi onal characteristics and caters to the research and developme nt of traditi onal Chin ese medici ne (TCM). I n this paper, the authors in troduced their systematic research in five aspects. 1) Rats and mice ca

4、n be used to simulate TCM cli nical practice. Diag no sis and syn drome differentiation can be done to the rats and mice, and information collected by the four diag no stic methods from the experime ntal ani mals meets the requireme nts of treatme nt based on syn drome differe ntiati on. 2) Stan dar

5、dized and qua ntified four diag no stic methods and syn drome differe ntiati on for rats and mice can be established, and are operati onal and applicable for gen eral use. 3) There exists con stituti on and syn drome diversity in no rmal rats and mice. A spontaneous syndrome can develop in diseased

6、rats and mice, and it can be accompa nied by or eve n cha nge to ano ther syn drome, similar to that in human beings. 4) There is a complicated material base for syn dromes in ferred from the differe nt gene expressi ons and splices in n euroe ndocri neimmune n etwork. 5) In dividualizedtreatme nt b

7、ased on syn drome differe ntiati on, as well as qua ntified evaluati on and comparis on of the treatme nt efficacy can be done inthe rat and mouse models of syn dromes. The established methodology and criteria for syn drome differe ntiati on and syn dromebasedtreatme nt in rats and mice can be used

8、in the followi ng four research fields: 1) syn drome ide ntificati on on rat or mouse models; 2) research on the basic theories of TCM, such as the research on the viscera man ifestatio n theory, the material base of syn dromes, fun cti on mecha ni sms of the treatme nt based on syn drome differe nt

9、iatio n, and the diag no stics of TCM; 3) study in cli nical subject of TCM, such as evaluatio n and comparis on of the efficacy of treatme nt based on syn drome differe ntiatio n, protocol optimizati on of syn drome differe ntiati on and treatme nt, and preve ntive treatme nt of diseases; 4) study

10、in traditi onal Chin ese drugs, such as the research on properties of Chin ese herbal drugs, and pharmacological research on Chin ese herbal medic ines and formulas.Keywords: rats; mice; disease; symptom complex; objective four diag no stic methods; syn drome differe ntiati on; syn drome differe nti

11、ati on treatme nt; drug property中医药及辨证论治的研究和发展，需要开展大量的动物实验，其中大鼠和 小鼠是最为常用的实验动物。因此，建立大鼠和小鼠辨证论治的方法和标准， 成为中医药行业的关键学术问题、基本方法学问题。1 大鼠和小鼠辨证论治标准的建立大鼠和小鼠辨证论治标准的建立，涉及到一系列相互关联的学术问题。（1）能否模拟中医临床，用于开展大鼠和小鼠的诊法和辨证研究？大鼠、小鼠 能够采集到多少四诊信息，与人类异同如何？能否满足辨证论治需要？ （2）能否实现其四诊和辨证的标准化、计量化，如何便于操作与普及？ （3）正常大鼠和小鼠是否存在体质的差异和证候表现；疾病大鼠

12、和小鼠是否会自发形成证 候，是否会发生证候的演变和兼夹？是否与人类近似？ （4）证候形成的物质基础是什么？如何观察？ （ 5）能否开展大鼠、小鼠个体化的辨证论治？能否计量 化地比较与评价其疗效？为回答以上系列学术问题，我们开展了长达十年的研 究，建立了系列标准。有关研究仍在继续，部分进展介绍如下。1.1 大鼠和小鼠可以用来模拟中医临床实施四诊和辨证基于在长期动物实验中观察到的动物个体差异，以及中医辨证论治理论，我们提出了大鼠和 小鼠基于四诊的辨证论治假说。研究证明，大鼠和小鼠是可以开展“四诊”及 辨证论治的14。比较大鼠和小鼠与人类所能采集到的所有四诊信息的异同后发现，所采集到的大鼠和小鼠四诊

13、信息，是可以满足辨证论治需要的，具 体内容可参见大鼠和小鼠辨证论治实验方法学（科学出版社）。1.2 禾U用大鼠、小鼠可以实现四诊和辨证的标准化、计量化，所建立的 方法便于实验操作与普及 我们提出大鼠和小鼠四诊工作站的假说及设计原 则，创建了四诊工作站，并不断有所调整和发展。同步开展了大量正常及荷瘤小鼠证候研究和常见不同虚证造模方法的比较研究。期间不断检验、发展和完 善四诊工作站及其标准，实现了基于大鼠和小鼠四诊的辨证。发现常见虚证模 型动物间存在复杂的证候差异或表现为复合证，证明其证候属性有待再辨证、 再评价。在早期建立小鼠四诊采集项目标准、小鼠四诊工作站及其操作标准、 小鼠常见证候辨证标准等

14、的基础上，进而发展出大鼠、小鼠系列诊法和辨证标 准。大量的实验证明，所建立的四诊工作站，有助于大鼠或小鼠的四诊检测， 可以开展大样本的动物实验514;有助于发展和建立标准化、计量化的四诊检测与辨证方法，实现计量化的辨证及疗效评价。以上研究，被授权专利 一项，我们出版了方法学专著辨证论治实验方法学一一实验小鼠诊法与辨 证（上海科学技术出版社），获得 1项部级成果三等奖。1.3 正常大鼠和小鼠存在体质和证候的差异，常见疾病大鼠或小鼠会自发形成证候，发生证候的演变和兼夹，与人类近似为了进一步观察常见疾病动物是否存在“同病异证”和“异病同证”的现象，我们开展了大量的疾病动 物实验15 21，涉及肝癌、

15、肺癌、胃癌等荷瘤小鼠（包括裸鼠、C57近交系小鼠、昆明种小鼠），糖耐量异常、2型和1型糖尿病及自发性糖尿病大鼠，肥胖模型大鼠，高血脂模型大鼠，不同方法造模的高血压大鼠和自发性高 血压大鼠，以及不同方法造模的胃溃疡大鼠、小鼠等疾病模型。发现与人类近 似，正常大鼠或小鼠普遍存在体质和证候的差异；不同常见疾病大鼠和小鼠普 遍存在证候的自然发生、演变和兼夹，没有必要叠加证候造模；不同疾病大 鼠、小鼠既普遍存在“有是病便有是证”及程度差异，又普遍存在同病异证和 异病同证。充分证明，疾病模型大鼠、小鼠的证候是可以标准化、计量化采集 的，并可准确地评价其证候及其严重程度。荷瘤小鼠早期的邪毒壅盛证预后 差，这

16、对于治未病是有意义的。1.4 证候存在复杂的物质基础，涉及神经内分泌免疫网络各组织基因表 达与剪接的差异 为准确和客观揭示证候复杂的物质基础，我们采用了多病 种、多证候同步研究的方法。1.4.1 疾病和证候的选择第一阶段实验，观察了 H22荷瘤小鼠早期邪毒壅盛证、气虚证，中期阳气虚证和中晚期气阴阳虚证等4个常见证候（淘汰不典型或复杂兼证小鼠），与正常无证候小鼠对照。其中邪毒壅盛证、气虚证 是典型的同病异证。第二阶段实验，观察正常、气虚大鼠，气盛、气虚证自发 性高血压大鼠和自发性糖尿病大鼠（非典型证候大鼠留作它用），以及早期邪 毒壅盛证、气虚证，中期阳气虚证、气虚证，中晚期气阴阳虚证、气虚证荷瘤

17、 小鼠等（淘汰非典型证候小鼠）多病种、多阶段的同病异证和异病同证。1.4.2 检测的目标组织检测下丘脑、垂体、肾上腺、甲状腺和睾丸组织，其中荷瘤小鼠增检胸腺、脾脏、肿瘤，高血压大鼠增检肾脏，糖尿病大鼠 增检胰腺。1.4.3 主要检测技术主要采用 Affymetrix Gen eChip Mouse Exon1.0 ST Array 和Rat Exon 1.0 ST Array 。初步研究发现，以上不同疾病或证 候在神经内分泌免疫系统及相关组织普遍存在基因表达和外显子剪接的差异， 表明同病异证和异病同证有其复杂的物质基础，而外显子表达谱芯片提供了高效可靠的检测技术2227。这在多层次组织分子层面

18、证明了证候是客观存在的，该研究仍在进行之中。1.5 实现了大鼠和小鼠个体化辨证论治，以及计量化比较、评价辨证论治的疗效1.5.1 荷瘤小鼠我们新近的实验发现28, 29,对早期邪毒壅盛证荷瘤小鼠，辨证论治较非辨证论治，对荷瘤小鼠证候加重及向兼证发展具有一 定的纠正和延缓作用，辨证论治具有一定的优势。该研究在技术上，实现了疾 病小鼠个体化的辨证论治与计量化的疗效评价。1.5.2 高血压大鼠对自发性高血压大鼠的实验发现，西药（培哚普利加氨氯地平）与西药结合中药辨证论治比较，后者在证候和血压改善方面趋势 偏好，但差异无统计学意义。1.5.3 糖尿病大鼠 对自发性糖尿病大鼠的实验发现，西药（二甲双 胍

19、）与西药结合中药辨证论治比较，后者在气虚、胃热等方面具有较显著的改 善作用。以上实验表明：（1）大鼠和小鼠是可以开展个体化辨证论治的，其辨证论 治的疗效是可以计量化地比较与评价的；（2）辨证论治确实对证候的改善有一 定的疗效；（3）对于不同疾病，辨证论治的优势可能有所差别；（4）辨证论 治具有优化的空间。总之，通过长期不懈的探索、研究和发展，常用实验动物 大鼠和小鼠诊法与辨证论治的方法和标准趋于成熟和实用。具体内容可参见将 于2009年底前出版的大鼠和小鼠辨证论治实验方法学。2 大鼠和小鼠辨证论治标准的用途该标准在中医药研发中具有广泛的用途。举例如下。2.1 证候模型动物的证候属性鉴定证候模型

20、已被中医界所普遍接受，应用广泛，推动了辨证论治的学术发展。但是，以往的研究发现，一些模型的 证候属性与造模的预期不符，有待通过诊法和辨证界定。2.2 中医基础学科的研究2.2.1 藏象理论研究中医藏象理论的特点是生理、病理、复方治疗密切结合而不可分割，因此，研究藏象的生理，务必结合其病理、复方干预研究。作为当代藏象学说的研究，还要求结合我国常见病、多发病和重大疾病研 究。“有诸内必形诸外”，藏象研究务必观察其气血阴阳诸证的盛衰。2.2.2 证候的物质基础研究 辨证论治的基础是证候，是普遍存在的同 病异证和异病同证。因此，证候、疾病 证候、疾病 证候 治疗干预及取效 等复杂物质基础的研究，成为了

21、中医基础理论研究的热点和重点。该研究的前提，是要求准确地对模型动物的证候进行计量化辨证，唯有如此，才有可能进 行重复实验和验证。223 辨证论治方法和作用机制的研究辨证论治作用机制的揭示，是辨证论治的国际化和普及，以及深入优化发展的基本要求。该研究必须回答辨证论治对于疾病、证候、主要症状或体征的疗效及其程度。224 中医诊断学中医诊断学研究的难点在于，难以明确四诊信息在常见疾病中的辨证意义和价值。该领域的突破，势将广泛借助于大鼠和小鼠实验，在标准采集四诊信息的基础上，开展大量的病理及其机制的研究。2.3 中医临床学科的研究2.3.1 辨证论治疗效的比较与评价当代中医临床诊疗水平的提高，将愈来愈

22、依赖中医基础学科的研发工作。通过大量的实验研究，可筛选和评价不 同治法的疗效及是否有毒副反应。例如，我们曾比较过全国一些著名专家公开 报道治疗肝癌、骨质疏松等病证的处方，小鼠药理实验表明，其疗效存在优劣。那些疗效确切者，为进一步开发和优化奠定了基础30。2.3.2 辨证论治方案的优化近年来，一些学者采用正交实验对一些临床有效大复方开展药味精简的研究。须注意的是，同步观察这些处方对证候的 影响十分重要。单纯中药或中西医结合方法，对于一些疾病、疾病证候确有一定的疗效，如何进一步优化其治疗方案，是一项长期而应用前景广阔的工作。2.3.3 防治未病的研究“治未病”的前提之一，是要通过个体早期证候的表现

23、，准确预测其疾病发展的趋势和预后。例如，我们一再观察到荷瘤小 鼠带瘤生存时间差别很大，早期哪些证候与预后差相关呢？我们曾假设可能与 虚证体质有关。但研究发现，早期的邪毒壅盛证才是预后差的主要原因，与常 见虚证关系不大30。因此提出荷瘤小鼠药效学实验，应在接种肿瘤出瘤 后，依据肿瘤的大小（邪毒壅盛的程度），分层随机分组研究。2.4 中药学科的研究2.4.1 中药药性的研究中药药性研究是中药学研究的基础工作。新中药的确定，中药有效成分和中药复方的研究，甚至西药的中药化，均有赖于明 确其药性。历史上，中药药性的判断主要依据受试者服药后产生的寒热温凉反 应。我们采用所建立的大鼠、小鼠四诊和辨证标准，比

24、较了附子、干姜、知 母、黄柏、大青叶等中药水煎剂对正常小鼠证候的影响31，知母、黄柏、大青叶较干姜、附子可明显降低小鼠阳热程度，聚为同类，提示小鼠对这些寒 热不同药物的反应与人类近似。再如，我们曾观察到地方草药广防风，用药后 实验小鼠阳热程度增加，据此，我们指出该药的药性偏温，得到了有关专家的 认可。242中药和方剂的药理研究中药和方剂药理研究的特色之一，在于观察其对证候的影响。有关中药药性、方剂配伍理论的研究，更是涉及到证候 及其对证候的影响。2.5 中医药行业标准以往学术界一再呼吁应建立中医药行业的特色标准。因缺少有关标准，限制了中医药、中药产业的发展，限制了中医药的国际 化。大鼠和小鼠辨

25、证论治标准的建立，将丰富中医药行业标准。总之，大鼠和 小鼠辨证论治标准在中医药研发中具有十分广泛的用途，其普及将有利于推动 中医药学术和产业的发展。09-12-14 09:55:00 编辑：studa20【参考文献】1 Fang ZQ, Pan ZQ, Lu WL, Liu ZM, Gua n DY, Lia ng C. Research and developme nt on syn dromes and methodology of syn dromes differentiation and treatment in rats and mice. Shanghai Zhong Yi Ya

26、o Da Xue Xue Bao. 2008; 22(4): 1216. Chi nese with abstract inEn glish.方肇勤，潘志强，卢文丽，刘小美，管冬元，梁超.大鼠/小鼠证候及辨证 论治方法学的探索与发展.上海中医药大学学报.2008; 22(4): 1216.2 Fang ZQ, Pan ZQ, Che n X, Lu WL, Fu XL, Hou L. Co nstruction and sig nifica nee of four diag no stic methodology about experime nt mice.Sha nghai Zho ng

27、Yi Yao Za Zhi. 2006; 40(7): 14, Cover 3. Chi nesewith abstract in En glish.方肇勤，潘志强，陈晓，卢文丽，付晓伶，侯俐.实验小鼠四诊方法学的 创建和意义.上海中医药杂志.2006; 40(7): 14,封三.方肇勤，潘志强，卢文丽, 计量化辨证方法的建立及其评价3 Fa ng ZQ, Pan ZQ, Lu WL, Liu XM, Hou L, Liao MJ. Establishme nt and evaluati on of metrological methods of syn drome differe ntiat

28、i on about com mon syn drome in rats and mice. Zhon gguo Zhong Yi Ji Chu Yi Xue Za Zhi. 2007; 13(7): 502505. Chi nese with abstract in En glish.刘小美，侯俐，廖明娟.大鼠、小鼠常见证候.中国中医基础医学杂志.2007; 13(7): 502505.4 Fang ZQ. Discussi on on some basic academic problems in research and developme nt of treatme nt based

29、on syn drome differe ntiatio n.Zho ngguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 2008; 28(7): 652655. Chi nesewith abstract in En glish.方肇勤.辨证论治研发的一些基本学术问题.中国中西医结合杂志.2008;28(7): 652655.5 Chen X, Chen DS, Fang ZQ. Con trol study of nontraumaticparameters of syn drome differe ntiati on in tumorbeari ng mice. Zhong

30、Yi Za Zhi. 2003; 44(1): 5859. Chi nese.陈晓，陈德溯，方肇勤.荷瘤小鼠非创伤性辨证指标的对照研究.中医杂 志.2003; 44(1): 5859.6 Pan ZQ, Fang ZQ, Kan WB, Che n X, Fu XL, Wu ZH, Wang SM, Xu JT. Hind paw atlas and RGB an alysis of no rmal Kunming mice. Shan ghai Zho ng Yi Yao Da Xue Xue Bao. 2003; 17(3): 4648. Chi nese withabstract in

31、En glish.潘志强，方肇勤，阚卫兵，陈晓，付晓伶，吴中华，王少墨，许家佗.正 常昆明种小鼠后爪图谱及 RGB分析.上海中医药大学学报.2003; 17(3): 46 4&7 Pan ZQ, Fang ZQ, Kan WB, Che n X, Fu XL, Wu ZH, Wang SM, Xu JT.SignJngof Zheng on hind 0-恥 ir tumor b已c.ring mice,Zhongguo Zhong Yi Ji Cliu Yi Xue Za Zhi. 2004; 10 : 27 29. Chinese with abstract in En glish.潘志强

32、，方肇勤，阚卫兵, 瘤小鼠后爪部分证的标志图谱.陈晓，付晓伶，吴中华，王少墨，许家佗.荷 中国中医基础医学杂志：8 Pan ZQ, Fa ng ZQ, Fu XL, Kan WB. Evoluti on of typical syn dromesand th已 chaacteristjcs of r nd pti.w images in tumor bey.ring ti ce, Shanghai Zhong Yi Yao Za Zhi. 2004； 10 ：疋 64, F003. Ciilncsc-abstract in En glish.潘志强，方肇勤，付晓伶，阚卫兵.荷瘤小鼠若干典型证的

33、演变及其后爪 图像特征.上海中医药杂志9 Pan ZQ, Lu WL, Fang ZQ. Shoot ing picture of the ton gue about mice in microscope. Zhon gguo Zhong Yi Ji Chu Yi Xue Za Zhi. 2007;13 (3): 189 19L Chino sc vd Hi abstract in English.潘志强，卢文丽，方肇勤.小鼠舌象的显微拍摄.中国中医基础医学杂志. 2007; 13(3): 1S9 I9U10 Lu WL, Fang ZQ, Pan ZQ, Fu XL. Comparison

34、and evaluation of mouse models for four methods of exam in ati on in differe ntiati on of eight syn dromes such as qi, blood, yin or yang deficie ncy. Zhon gguoZhong Yi Ji Chu Yi Xue Za Zhi. 2006; 12(6): 433 438. Cliincsc.卢文丽，方肇勤，潘志强，付晓玲小鼠气、血、阴、阳、虚等八种模型 四诊的比较和评价.中国中医基础医学杂志：11 Lu WL, Fang ZQ, Pan ZQ,

35、 Hou L. Comparis on and an alysis of qi and blood deficie ncy syn drome models in four species of mice.Liaoning Zhong Yi Za Zhi+ 2007; 34(4): 519 522. Chinese with abstract in En glish.卢文丽，方肇勤，潘志强，侯俐四种不同品系小鼠气虚血虚证候的比较 与评价辽宁中医杂志12 Fa ng ZQ, Pan ZQ, Fu XL, Lu WL, Che n X, Ta ng WC, Kan WB, Xu M. The pr

36、oposal of criterion on mice four diagno 09-12-1409:55:00 编辑：studa20【参考文献】1 Fang ZQ, Pan ZQ, Lu WL, Liu ZM, Gua n DY, Lia ng C. Research and developme nt on syn dromes and methodology of syn dromes differentiation and treatment in rats and mice. Shanghai Zhong Yi YaoJci Xue Xuo Bao. 2008: 22(4) : 12

37、16. Chinese with absiraci in English.大鼠/小鼠证候及辨证22 U): 126方肇勤，潘志强，卢文丽，刘小美，管冬元，梁超. 论治方法学的探索与发展.上海中医药大学学报；2 Fang ZQ, Pan ZQ, Che n X, Lu WL, Fu XL, Hou L. Co nstruction and sig nifica nee of four diag no stic methodology about experime nt mice.Shanghai Zhong Yi Yao Za Zlii+ 2006; 40(.7): 1 4, Cover 2 C

38、liinese with abstract in En glish.方肇勤，潘志强，陈晓，卢文丽，付晓伶，侯俐.实验小鼠四诊方法学的 创建和意义.上海中医药杂志封三.3 Fa ng ZQ, Pan ZQ, Lu WL, Liu XM, Hou L, Liao MJ. Establishme nt and evaluati on of metrological methods of syn drome differe ntiati on about com mon syn drome in rats and mice. Zhon gguo Zhong Yi Ji Chu Yi Xue Za Zh

39、i. 2007;13(7) : 502 505. Chinese willi abstract in方肇勤，潘志强，卢文丽，刘小美，侯俐，廖明娟.大鼠、小鼠常见证候 计量化辨证方法的建立及其评价.中国中医基础医学杂志.2007; 13(7): 502 505.4 Fang ZQ. Discussi on on some basic academic problems in researchand developme nt of treatme nt based on syn drome differe ntiatio n.Zhongguo Zhong Xi Yi Jio He Za Zhi.

40、200S;囲：652 655- Chinese with abstract in En glish.方肇勤.辨证论治研发的一些基本学术问题.中国中西医结合杂志.2008; 閱:652655.5 Chen X, Chen DS, F臼门g ZQ+ Control study of non T.rci.iiwT-i c parameters of syndrome di ffcdti JTon ii tuiidt jourirg nrce. Zhong Yi Za Zhi, 2003; 1(1；: 58 59+ Chincso,陈晓，陈德溯，方肇勤.荷瘤小鼠非创伤性辨证指标的对照研究.中医杂 志6

41、 Pan ZQ, Fang ZQ, Kan WB, Che n X, Fu XL, Wu ZH, Wang SM, Xu JT. Hind paw atlas and RGB an alysis of no rmal Kunming mice. Shan ghai Zhong Yi Yao Ih Xue Xue Bao. 2003: 17(3): 46 4& Chinoso 心 th abstract in En glish.潘志强，方肇勤，阚卫兵，陈晓，付晓伶，吴中华，王少墨，许家佗.正 常昆明种小鼠后爪图谱及 RGB分析.上海中医药大学学报.2003; 17(3): 46眦7 Pan ZQ, F