土壤养分及酶活性测试方法剖析

1、硝态氮的测定：双波长分光光度法测定土壤硝态氮，土壤肥料，2006 ( 1): 5052,涂常青，温欣荣。原理：利用硝酸盐和亚硝酸盐在 203nm和230nm波长处有较强紫外吸收峰，利用双波长系数倍数法的公式：.A =A 1 -kA 2选择合适波长时，从而消除亚硝酸盐、有机质的影响。消除干扰后，硝酸盐氮的含量与.尔呈线性关系，线性范围为02.0 mg/L，由此建立了测定土壤硝态氮的新方法。硝酸盐氮标准比色液：称取0.7220 g与105C烘箱中烘干2h干燥冷却后的KNO; 与小烧杯中，加入二次蒸馏水溶解，定量转入 1000ml的容量瓶中，定容、摇匀, 即为10ug/ml的硝酸盐氮标准液。称取该溶

2、液 10.00 ml于100ml容量瓶中，定容、摇匀，即为10ug/ml的硝酸盐氮标准比色溶液。亚硝酸盐氮标准比色液：称取 0.1232 g NaNO2于小烧杯中，加入二次蒸馏水，定量转入250ml容量瓶中，定容、摇匀，即为100ug/ml亚硝酸盐氮标准溶液。称取该溶液10.00 ml于100ml容量瓶中，定容、摇匀，即为10ug/ ml亚硝酸盐 氮标准比色液。实验方法：1、k系数的确定：分别准确移取10ug/ml硝酸盐氮使用液2.00 ml、10ug /ml亚硝酸盐氮标准使用 液2.00 ml、土壤浸提液2.5 ml置于各自的25ml比色管中，用二次蒸馏水定容、 摇匀，用1cm的石英比色皿，

3、以二次蒸馏水作参比，在 UV -紫外可见分光光度 计上在190300 nm范围内扫描，从而确定土壤样品、硝酸盐氮的最大吸收波长 203nm，在230nm处吸收较弱，而亚硝酸盐氮在210 nm处有最大吸收，在230 nm 吸收较弱。选取203nm、230 nm为测量波长和参比波长测定土壤中硝态氮，从 而可消除样品中主要干扰组分亚硝酸盐氮的干扰。据A203 - kA 230 = 0的公式计算，求得k =2.72。2、标准曲线的绘制：分别去 10ug/ml 硝酸盐氮标准比色液 0、0.25、0.50、1.00、1.50、2.00、2.50 ml置于25ml比色管中，各管加入二次蒸馏水至刻度，摇匀，用

4、UV-紫外可见分光 光度计在203nm和230nm处，用1 cm石英比色皿测定吸光度。用A202.72A230 的计算方法求得校正吸光度。标准曲线回归方程为 y =0.5283x -0.0009r =0.9999( n =7)3、样品测定：准确称取10g充分拌匀的鲜土壤，分别置于100 ml具塞三角瓶中，加入0.1 g CaSO4和50.00 ml二次蒸馏水，于振荡器上振荡 10min。放置10min后， 将悬液的上部清夜用于滤纸过滤。吸取滤液1.0020.00 ml置于25ml比色管中， 用水准确稀释至刻度，分别在 203 nm230 nm波长下测量吸光度。按下式计算 土壤中硝态氮含量(ug

5、/kg) : w(NO3 - N) = 25： D/m式中，为回归方程算出的NO3 - N含量，ug/ml ;25为比色测定液总体积，ml ;D为稀释倍数；m为鲜土壤样品质量，g。铵态氮的测定：2mol L4KCl浸提-靛酚蓝比色法1、方法原理：用2mol L4KCl溶液浸提土壤，把吸附在土壤胶体上的NH4及水溶性NH。浸提 出来。土壤浸出液中的铵态氮在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚作用， 生成水溶 性燃染料靛酚蓝，溶液的颜色很稳定。在含氯 0.050.5 ug 范围内，吸光度 与铵态氮含量成正比，可用比色法测定。2、试剂:(1) 2mol L4KCl溶液：称取149.1 g KCl溶于水，稀释

6、至1 L ;(2) 苯酚溶液：称取苯酚(C6H5OH，化学纯)10g和硝基铁氰化钾 (Na2Fe(CNhNO2 0)100 mg稀释至1L ,此试剂不稳定，须贮于棕色瓶中, 在4C冰箱中保存；(3) 次氯酸钠碱性溶液:称取NaOH 10g、磷酸氢二钠(Na2HPO4 7H2O )7.06 g、 磷酸钠(NasPOq I2H2O ) 31.8 g 和 52.5 g LJ 次氯酸钠(NaOCI，即含 5%t效 氯的漂白粉溶液)10ml溶于水，稀释至1 L ,贮于棕色瓶中，在4C冰箱中保存；(4) 掩蔽剂：将400g LJ酒石酸钾钠(KNaC4H4O6 4H2O )与100g丄-1的EDTA二钠盐溶

7、液等体积混合，每100 ml混合液中加入10mol LJ NaOH溶液0.5 ml ；(5) 2.50 ug ml铵态氮(NH4 -N )标准液态:称取干燥的(NH4)2SO40.4717 g 溶于水，洗入容量瓶后定容至1L，制备成铵态氮(N ) 100ug mF1的贮存溶液； 使用前将其加水稀释40倍，即配制成含铵态氮(N ) 2.5 ug ml J的标准溶液备 用。3、分析步骤：(1) 浸提：称取相当于20.00 g干土的新鲜土样(若是风干土，过 10号筛)准 确到0.01 g ,置于200ml三角瓶中，加入KCl溶液100ml，塞紧瓶塞，在振荡 机上振荡1h，取出静置，待土壤-氯化钾悬浊

8、液澄清后，吸取定量上层清液进行 分析。如不能在24h进行分析，用滤纸过滤悬浊液，将滤液储存在冰箱中备用。(2) 比色：吸取土壤浸出液2ml10ml (含NH4 -N2ug2.5 ug )放入50ml 容量瓶中，用KCl溶液补充至10ml，然后加入苯酚溶液5ml和次氯酸钠碱性溶 液5ml，摇匀。在20C左右的室温下放置1 h后，加掩蔽剂1ml以溶解可能产生 的沉淀物，然后加水定容至刻度，用 1cm比色槽在625nm波长处进行比色，读 取吸光度。(3) 工作曲线：分别吸取 0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 ml NH / - N标准液于 50ml容量瓶中，各加10ml氯化钾溶液，同(2

9、)比色。(4) 结果计算：土壤中 NH4 - N 含量(mg kg) = V tsm式中：，一显色液铵态氮的质量浓度(ug ml*)V 显色液的体积（10ml）ts 分取倍数 m 样品质量（g）脲酶测定（比色法）：（土壤微生物生态学及其实验技术）1、方法原理：脲酶广泛存在于土壤中，它能酶促尿素分解成氨、二氧化碳和水。测定脲酶的方 法很多，包括比色法、扩散法、电极法等，其中比色法最为常用，现介绍苯酚 - 次氯酸钠比色法，该方法以尿素为基质，根据酶促产物氨与苯酚 -次氯酸钠作用（在碱性溶液中及在亚硝基铁氰化钠催化作用下）生成蓝色的靛酚，来分析脲酶活性。2、试剂配制：（1）pH 6.7柠檬酸盐溶液：

10、取368g柠檬酸于600ml蒸馏水中，另取295g KOH 溶于水，再将两种溶液合并，用 1 mol / L NaOH将pH调至6.7，并用水稀释至 2L 0（2）苯酚钠溶液：称取62.5 g苯酚溶于少量乙醇中，加 2 ml甲醇和18.5 ml丙 酮后用乙醇稀释至100ml （A液），保存于冰箱中。称取27g NaOH溶于100ml 水中（B液），保存于冰箱中。使用前，取 A、B两液各20ml混合，并用蒸馏 水稀释至100ml备用。（3） 次氯酸钠溶液：用水稀释制剂至活性氯的浓度为0.9 %，溶液稳定。（4）10%尿素溶液：10g尿素溶于100ml水中。（5） N的标准溶液：精确称取 0.47

11、17 g硫酸铵溶于水稀释至1L ,则得1ml含 0.1 mg N的标液，再将此液稀释至10倍制成氨工作液（0.01 ug/L ）.3、操作步骤：取5g风干土置于50ml三角瓶中，加1 ml甲苯。15min后加10ml 10%尿素溶液和20ml pH =6.7柠檬酸盐缓冲液。摇匀，37C恒温箱中培养24h。过滤，取1ml 滤液注入50ml容量瓶中，然后按配制标准曲线显色方法进行测定。标准曲线配制：分别取 0、1、3、5、7、9、11、13ml氮工作液，移至50ml容 量瓶中，然后加蒸馏水至20ml，再加4ml苯酚钠溶液和3ml次氯酸钠溶液，随 加随摇。20min后显色、定容。1h内在分光光度计上

12、于波长578nm处比色，根 据吸光值与氮溶液浓度绘制标准曲线。3、结果计算：以24h后1 g 土壤中NH3 - N的质量（mg ）表示脲酶活性（Ure）:Ure = a V n / m式中：a为由标准曲线求得的NH3-N浓度（mg/ml ）;V为显色液体积（50 ml ）；n为分取倍数；m为烘干土质量（g ）0磷酸酶测定（磷酸苯二钠比色法）：（土壤微生物生态学及其实验技术）1、方法原理：测定磷酸酶主要根据酶促作用生成的有机基团量或无机磷量计算磷酸酶活性。前一种通称为有机基团含量法，是目前较为常用的测定磷酸酶的方法， 后一种称为 无机磷含量法。研究证明，磷酸酶有 3种最适pH值：45、67和81

13、0，因 此测定酸性、中性和碱性反应土壤的磷酸酶，要提供相应的pH缓冲液才能测出该土壤的磷酸酶最大活性。测定磷酸酶常采用的pH缓冲体系有乙酸盐缓冲液（pH值=5.05.4 ）、柠檬酸盐缓冲液（pH值=7.0 ）、三羟甲基氨基甲烷缓冲液（pH值=7.08.5、和硼酸缓冲液（pH值=910） o磷酸酶测定时常用的基质 有磷酸苯二钠、酚酞磷酸钠、甘油磷酸钠、:或1 -萘酚磷酸钠、1 -硝基苯磷酸 钠等。现介绍磷酸苯二钠比色法。2、试剂配制：（1）甲苯（2）磷酸苯二钠：称取6.75 g磷酸苯二钠（CeHsPOqNa? 2H2O ），用缓冲液稀 释至1 L （1 ml含25 mg酚）。（3）pH 9.0硼

14、酸盐缓冲液：A、 0.05 M硼砂溶液：19.07 g硼砂（NazBqO? 10出0）溶于1000ml蒸馏水中；B、 0.2 M硼酸溶液：12.37 g硼酸（H3BO3）溶于1000ml蒸馏水中；硼酸盐缓冲液（pH 9.0）： 80ml A+20ml B混匀即得。（4）缓冲溶液配制：a、酸性磷酸酶：醋酸盐缓冲液（pH 5.0）A、0.2 M醋酸钠溶液：16.4 g无水醋酸钠（C2H3O2Na ）溶于1000ml蒸馏水中或是27.2 g三水醋酸钠（CzHsOzNa 3H2。）溶于1000ml蒸馏水中。B、 0.2 M醋酸溶液：11.55 ml醋酸定容于1000ml。7ml A +3ml B混合即

15、得。b、碱性磷酸酶：硼酸盐缓冲液（pH 10.0）A、硼砂液：19.072 g硼砂溶于1000ml蒸馏水中。B、NaOH溶液：4g NaOH溶于1000ml蒸馏水中。50ml A +43ml B加水稀释至200ml，混合即得。c、中性磷酸酶：柠檬酸盐缓冲液（pH 7.0 ）A、0.1 M柠檬酸溶液：21.01 g柠檬酸H2O （或是19.21 g C6H8O7）溶于1000ml 蒸馏水中。B、 0.2 M磷酸氢二钠：35.61 g磷酸氢二钠 2H2O （或是53.63 g磷酸氢二钠 7H2O或是71.7 g磷酸氢二钠12H2O ）溶于1000ml蒸馏水中。3.63 ml A +16.37 ml

16、 B 混合即得。（5）2.5 %铁氰化钾：12.5 g铁氰化钾溶于500ml水。（6）0.5 %的4-氨基安替吡啉溶液：2.5 g4-氨基安替吡啉溶于500ml水中。（7）酚原液：2g酚用蒸馏水定容至1 L （2mg/ml ），溶液在暗色中稳定（8）酚工作液：取2.5 ml原液稀释至100ml （0.05 mg酚/ml ）。3、操作步骤：称取5g风干土于50ml三角瓶中，加1 ml甲苯，轻摇15min.再加入20ml磷酸苯二钠（酸性磷酸酶用PH5.0的醋酸缓冲液，中性磷酸酶用PH 7.0的柠檬酸盐 缓冲液，碱性磷酸酶用PH 10.0的硼酸盐缓冲液），仔细摇匀后放入恒温箱，在 37C下培养24h

17、。用致密滤纸过滤，取1 ml滤液于100ml容量瓶中，加5ml PH 10.0硼酸盐缓冲液， 再加入3ml 2.5 %的铁氰化钾和3ml 0.5 %的4-氨基安替吡啉溶液，摇匀，这时 溶液呈粉红色，然后加水定容。待颜色稳定时（2030min ），在波长570nm处 测定各样品的吸光度。土壤的磷酸酶活性根据标准曲线求出酚的含量（为了消除土壤引起的误差，每一土壤需做无基质的对照，整个试验需做无土壤对照）。磷酸酶活性以每克土壤的酚毫克数表示（若用P的毫克数表示，结果需乘0.32 ;若用P2O5的毫克数，结果需乘2.29 ）。标准曲线配制：分别向100ml容量瓶中注入0、1、3、5、7、9、11ml工

18、作液并 显色定容（分别相当于 0.05、0.15、0.25、0.35、0.45、0.55 mg酚），待颜色 稳定后，比色绘制标准曲线。4、结果计算：以24h后1 g 土壤中释出的酚的质量（mg ）表示磷酸酶活性Pho。Pho=a V n/m式中：a为由标准曲线求得的酚浓度（mg/ml ）；V为显色液体积（50 ml ）；n为分取倍数；m为烘干土质量（g）。过氧化氢酶的测定（容量法）：1、试剂配制：（1）0.3 % H2O2溶液：按 1:100 将 30% H2O2用水稀释。(2) 3g/L硫酸：168ml浓HSO4定容于2L容量瓶。(3) 0.1 g/L高锰酸钾(1/5 KMnO 4)溶液：称

19、取化学纯高锰酸钾 3.161 g溶于 1L无CO2蒸馏水中，贮于棕色瓶中备用。(4) 草酸钠(标定1/5 KMn。4)：105110C烘至恒重，称取0.2 g (准至0.0001 g ) 溶于100ml (8+92)硫酸溶液中。2、操作步骤：取2g风干土，置于100ml三角瓶中，并注入40ml蒸馏水和5ml 0.3 % H2O2溶 液(同时设置无土对照)。振荡20min后，加入5ml 3g/ L H2SO4，以稳定未分 解的H2O2，用慢速滤纸过滤。吸取25ml滤液，用0.1 g/L高锰酸钾滴定至淡粉 红色终点。3、结果计算：M = M -V2) T/gM :活性值；V :样品消耗的0.1 g

20、/L高锰酸钾溶液的ml数；V :对照消耗的0.1 g/L高锰酸钾溶液的ml数；T : 0.1 g/L高锰酸钾滴定校正值；g :样品重。用于滴定土壤滤液所消耗的高锰酸钾量(毫升数)为 B，用于滴定25ml原始的 过氧化氢混合液所消耗的高锰酸钾量(毫升数)为 A，(A-B) T即为过氧化氢 酶活性，以20min后1g 土壤的0.1 g/L高锰酸钾的毫升数表示。式中T为高锰 酸钾滴定度的校正值(就是最后换算成每克，所以还要测土壤含水量) 。高锰酸钾溶液标定：用配制好的高锰酸钾溶液(c(KMnO4)=0.1 mol/L )滴定基准草酸钠溶液，近终 点时加热至65E，继续滴定至溶液呈粉红色保持 30s，

21、同时做空白试验。高锰酸钾溶液标准浓度计算: c(1/5KMnO4)=m/(VV2) 0.06700式中：c(1 /5KMnO4)高锰酸钾标准液之物质的量浓度，mol /L ；m 草酸钠之质量，g ；y高锰酸钾的用量，ml ；V2 空白试验用高锰酸钾的用量，ml ；0.06700 与1.00 ml高锰酸钾=0.1 mol/L相当的以克表示的草酸 钠的质量。硝酸还原酶活性的测定：生态学常用试验研究方法与技术，土壤酶及其研 究方法1、方法原理：在硝酸还原酶和亚硝酸还原酶的作用下，土壤中硝态氮可还原成氨，测定土壤中 这些酶的活性可了解土壤氮素转化中脱氮作用的强度。 另外，硝酸还原酶还参与 土壤中铁的还

22、原作用。测定土壤硝酸还原酶活性的原理是：硝酸盐在硝酸还原酶、亚硝酸还原酶和羟基 还原酶的催化作用下转化为氨，反应前为硝态氮的变化反映出土壤硝酸还原酶的 活性，硝态氮的变化可用酚二磺酸比色法测定。2、仪器设备：分光光度计、恒温培养箱、100ml三角瓶、50ml容量瓶、瓷蒸发皿、水浴(100C),3、试剂配制：(1) 硝酸钾溶液:(KNO3) 1g/100ml : 10.0 g分析纯KNO3溶于去离子水中 稀释至1 L ;(2) 葡萄糖溶液XC6H12O6)=1g/100ml : 10.0 g分析纯葡萄糖溶于去离子水 中稀释至1 L ;(3) 碳酸钙(CaCO3)准备适量；(4) 铝钾矶(AlK

23、(SO4)饱和溶液，准备适量；(5) 酚二磺酸溶液：取3g重蒸酚与20.1 ml浓硫酸混合在沸水浴上回流加热6h ；(6) NaOH溶液；:(NaOH ) = 10g/100ml : 50g分析纯NaOH溶于去离子水中 并稀释至500 ml ；(7) 硝酸钾标准溶液MKNO3) =0.1mg/ml : 16.3025 g重结晶KNOa溶于去离子水中并定容至1 L，此溶液浓度为10g/100ml，使用前将其稀释至0.1 mg/ml。4、操作步骤：取1.00 g新鲜土壤(2 mm )于100 ml减压三角瓶中，加20mg CaCO3和1ml KNO3溶液，混匀后加1ml葡萄糖溶液，抽气3min，轻

24、摇三角瓶，置于30C 恒温箱中培养24h，培养结束后加50ml去离子水和铝钾矶溶液，混匀后过滤。取20ml滤液于瓷蒸发皿上蒸干，加 1ml酚二磺酸溶液溶解处理10min，再加15ml去离子水，用10% NaOH调至微黄色，最后转移至 50 ml容量瓶中，定容后于400500nm处比色。采用于180C加热3h灭菌的土壤作对照。标准曲线制作：吸取50.00 ml KNO3标准溶液(0.1 mg/ml )于瓷蒸发皿中，同 上在沸水浴上蒸干，加入 2ml酚二磺酸溶解处理 10min，加去离子水定容至50ml，此时溶液中NO3 -N的含量为0.01 mg/ml.吸取此溶液540ml于50ml容量瓶中，用

25、10% NaOH调至微黄色，定容后在分光光度计上于 400500nm处 比色。5、结果计算：土壤硝酸还原酶活性mgNO3f-N/(g 24h) = c V f /dvet式中：c为样品溶液中NO3_-N， mg/ml ;V为待测液体积，取50 ml ;f为分取倍数；dvet为烘干土壤质量，g。土壤速效磷的测定 0.5 molNaHCOs法1、方法原理：石灰性土壤由于大量游离碳酸钙存在， 不能用酸溶液来提取有效磷。一般用碳酸 盐的碱溶液。由于碳酸根的同离子效应，碳酸盐的碱溶液降低碳酸钙的溶解度， 也就降低了溶液中钙的浓度，这样就有利于磷酸钙盐的提取。同时由于碳酸盐的 碱溶液，也降低了铝和铁离子的

26、活性，有利于磷酸铝和磷酸铁的提取。此外，碳 酸氢钠碱溶液中存在着0H 一、HCO3 一、C03?一等阴离子，有利于吸附态磷的置换， 因此NaHCO3不仅适用石灰性土壤，也适应于中性和酸性土壤中速效磷的提取。待测液中的磷用钼锑抗试剂显色，进行比色测定。2、主要仪器：往复振荡机、分光光度计或比色计。3、试剂：（1）0.5 mol L浸提液溶解 NaHCO3 42.0 g 于 800ml 水中，以 0.5 mol LJ NaOH溶液调节浸提液的pH至8.5。此溶液曝于空气中可因失去 CO2而使pH增高，可 于液面加一层矿物油保存之。此溶液贮存于塑料瓶中比在玻璃瓶中容易保存， 若 贮存超过1个月，应检

27、查pH是否改变。（2）无磷活性炭：活性炭常含有磷，应做空白试验，检验有无磷存在。如含磷较多，须先用2 mol L4 HCl浸泡过夜，用蒸馏水冲洗多次后，在用 0.5 mol LJNaHCO3浸泡过夜，在平瓷漏斗上抽气过滤，每次用少量蒸馏水淋洗 多次，并检查到无磷为止。如含磷较少，则直接用NaHCOs处理即可。（3）钼锑抗试剂：A、5g L4酒石酸氧锑钾溶液：取酒石酸氧锑钾K（SbO）C4H4O60.5 g,溶解于 100ml水中。B、钼酸铵-硫酸溶液：称取钼酸铵（NH4）6MO7O24 4H2O10g，溶于450ml水 中，缓慢地加入153ml浓硫酸，边加边搅。再将上述A溶液加入到B溶液中，最

28、后加水至1L。充分摇匀，贮于棕色瓶中， 此为钼锑混合液。临用前（当天），称取左旋抗坏血酸（。6出。5，化学纯）1.5 g，溶于100ml钼锑混合液中，混匀，此即为钼锑抗试剂。有效期24小时，如藏于冰箱中则有效期较长。此试剂中H2SO4为5.5 mol（H ,钼酸铵为10g，酒石酸氧锑钾为0.5 g LJ，抗坏血酸为15g LJ。（4）磷标准溶液：准确称取在105C烘箱中烘干的磷酸二氢钾（KH2PO4，分析 纯）0.2195g，溶解在400ml水中，加浓硫酸5ml （加H 2SO4防长霉菌，可使溶 于长期保存），转入1 L容量瓶中，加水至刻度。此溶液为50ug ml J P标准溶液。 吸取上述磷

29、标准溶液25 ml，稀释至250ml，即为5ug mlJ P标准溶液（此溶液 不宜久存）。4、操作步骤：称取通过20目筛子的风干土样2.5 g （精确到0.001 g ）于150ml三角瓶（或大 试管）中，加入0.5 mol LJ NaHCOs溶液50ml，再加一勺无磷活性炭，塞紧瓶 塞，在振荡机上振荡30min，立即用无磷滤纸过滤，滤液承接于100ml三角瓶中，吸取滤液10 ml （含磷量高时吸取2.55.0 ml，同时应补加 0.5 molNaHCOs溶液至10ml ）于150ml三角瓶中，再用滴定管准确加入蒸馏水35ml，然后移液管加入钼锑抗试剂 5ml，摇匀，放置30min后，用880

30、nm 或700nm波长进行比色。以空白液的吸收值为 0,读出待测液的吸收值（A ）。 标准曲线绘制：分别准确吸取5ug ml4 P磷标准溶液1、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ml于150ml 三角瓶中，再加入 0.5 mol LJ NaHCO3 10ml，准确加水使各瓶的总体积达到 45ml，摇匀；最后加入钼锑抗试剂 5ml，混匀显色。同待测液一样进行比色， 绘制标准曲线。最后溶液中磷的浓度分别为0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 ug ml P。5、结果计算：土壤中有效磷（P）含量（mg kg） = ： V 3 ts 1000m 103 k式中：一从工作曲线上查得P的质量浓

31、度，ugml，；V 显色时定容体积，ml ;ts 为分取倍数（即浸提液总体积与显色对吸取浸提液体积之比） m 风干土质量，mg ;k将风干土换算成烘干土质量的系数;103 将ug换算成mg ； 1000换算成每kg含P量土壤速效磷mg kg P 等级10咼土壤速效钾的测定 一一NH4OAC浸提，火焰光度法1、方法原理：以NH4OAC作为浸提剂与土壤胶体上阳离子起交换作用如下:H土壤土壤+(n-6) NH4OAc+HOAc +Ca丿NH4KNH4Ca(OAc)2 + Mg (OAc)2 + KOAcMgNH4+n NH4OAc =NH4OAC浸出液常采用火焰光度计直接测定。为了抵消NH4OAC的

32、干扰影响，标准钾溶液也需要用1 mol L4 NH4OAc配制。火焰光度法的基本原理。当样品溶液喷成雾状以气 -液溶胶形式进入火焰后，溶 剂蒸发掉而留下气-固溶胶中的固体颗粒在火焰中被熔化、蒸发为气体分子，继 续加热即又分解为中性原子（基态），更进一步供给处于基态原子以足够能量， 即可使基态原子的一个外层电子移至更高的能级（激发态），当这种电子回到低能级时，即有特定波长的光发射出来，成为该元素的特征之一。例如，钾原子线 波长是766.4 nm、769.8 nm ;钠原子线波长是589 nm。用单色器或干涉型滤光 片把元素所发射的特定波长的光从其余辐射谱线中分离出来，直接照射到光电池或光电管上，

33、把光能变为光电流，再由检流计量出电流的强度。用火焰光度法进 行定量分析时，若激发的条件（可燃气体和压缩气体的供给速度，样品溶液的流速，溶液中其他物质的含量等）保持一定，则光电流的强度与被测元素的浓度成 正比。即可用下式表示之，即I二acb，由于用火焰作为激发光源时较为稳定，式 中a是个常数，当浓度很低时，自吸收现象可忽略不计，此时b=1，于是谱线强度与试样中欲测元素的浓度成正比关系：I二ac。把测得的强度与一种标准或一 系列标准的强度比较，即可直接确定待测元素的浓度而计算出未知溶液含钾量。2、主要仪器：火焰光度计、往返式振荡机3、试剂：（1）1 mol L中性 NH4OAC（ pH 7.0 ）

34、溶液。称取化学纯 CH3COONH477.09 g 加水稀释，定容至近1 L。用HOAc或NH4OH调至pH 7.0，然后稀释至1 L。具 体方法如下：取出1mol LJ NH4OAC溶液50ml，用溴百里酚蓝作指示剂，以 1:1 NH4OH或稀HOAc调至绿色即为pH 7.0 （也可以在酸度计上调节）。根据50 ml所有NH4OH或HOAc的毫升数，算出所配溶液大概需要量，最后调至pH 7.0。（2） 钾的标准溶液的配制。称取 KCI （二级，110C烘干2h ） 0.1907 g溶于1mol LNHqOAc溶液中，定容至1L，即为含100ug mlK的NH4OAC溶液。 同时分别准确吸取此

35、 100ug ml JK 标准液 0、2.5、5.0、10.0、15.0、20.0、40.0 ml 放入100 ml容量瓶中，用1mol L4 NH4OAc溶液定容，即得0、2.5、5、10、 15、20、40ug ml 4K标准系列溶液。4、操作步骤：称取通过1 mm筛孔的风干土 5.00 g于100 ml三角瓶或大试管中，加入1 mol L 中性NH4OAc溶液50ml，塞紧橡皮塞，振荡30min ，用干的普通定性滤纸过滤。 滤液盛于小三角瓶中，同钾标准系列溶液一起在火焰光度计上测定。记录其检流 计上的读数，然后从标准曲线上求得其浓度。标准曲线的绘制：将配制的钾标准系列溶液，以浓度最大的一

36、个定到火焰光度计 上检流计为满度（100）然后从稀到浓依序进行测定，记录检流计的读数。以检 流计读数为纵坐标，钾（K ）的浓度ugmlJ为横坐标，绘制标准曲线。5、结果计算：土壤速效钾（mg kg J,K）=待测液（ug ml，K） Vm式中：V 加入浸提剂ml数；m 烘干土样品的质量，g。1 .温度是影响缓控释肥料养分释放的主要因素。对于热塑性树 脂包膜尿素、热塑性树脂包膜复合肥、热固性树脂包膜复合肥、硫包 衣尿素、异丁叉二脲来说，温度越高，养分释放速率就越快，释放期 就相对越短。聚合物包膜控释肥在水中的释放曲线多为“ S”型，SCU为“破裂式释放”，IBDU的释放曲线呈倒“ L”型。在不同

37、培养温度 条件下氮素释放率与时间的关系可用一级动力学方程Nt二No(1-e-kt)、Elovich方程Nt二a+blnt和抛物线方程Nt二a+bt0.5表征，在25C和40C 时，以一级动力学方程拟合效果最好。 定量描述氮素养分释放的动力 学方程中以一级动力学方程更具有实效性。聚合物包膜复合肥的养分 释放规律为氮素释放速率最快，其次是钾、磷素释放速率较慢。2. 包膜控释肥料的养分释放是由包膜内外水蒸汽压差引起的，其释放速率常数k随着水蒸汽压差的增大而增大。蒸汽压差越大，养 分释放率越大，反之越小。在同一水蒸汽压下，包膜肥料的养分释放 率随着培养时间的延长而增大；相同的培养时间，养分累积释放率表 现为H2OKH2PO4饱和溶液KCl饱和溶液。包膜控释肥料膜内外水 蒸汽压差是控制养分释放速率快慢的根本因素。3. 土壤含水量对缓控释肥料养分释放速率有较大的影响。当土壤含水量在田间持水量之内，随着土壤含水量的增加，养分释放加快。 包膜尿素在不同土壤含水量下拟合曲线的相关系数在0.97400.9772之间，标准误在0.00150.0022之间，达极显著水平(p =0.0001)。对 于包膜复合肥来说，供试样品CRF1和CRF2在各培养时期内氮素释 放率均随着土壤含水量的增大而增大。对于硫包衣尿素来说，SCU在土壤培养中的