[]蔬菜质量安全快速检测技术与应用 无公害蔬菜基地的认证过程

1、蔬菜质量安全快速检测技术与应用蔬菜质量安全快速检测技术与应用 无公害蔬菜基地的认证过程无公害蔬菜基地的认证过程 蔬菜质量安全快速检测技术的检测指标蔬菜质量安全快速检测技术的检测指标 农药残留量农药残留量 ( (有机磷类农药、氨基甲酸酯类农药有机磷类农药、氨基甲酸酯类农药) ) 硝酸盐硝酸盐 亚硝酸盐亚硝酸盐 吊白块：目前主要在我国北方已经发吊白块：目前主要在我国北方已经发 现有一些不法商贩使用漂白粉漂白一现有一些不法商贩使用漂白粉漂白一 些蔬菜，但情况尚不严重，其主要污些蔬菜，但情况尚不严重，其主要污 染物为甲醛。染物为甲醛。 我国现行的主流检测技术体系 检测技术体系的要求： 满足有关标准对检

2、测方法及设备的要求； 操作简便，稳定度高； 检测结果能够与其它分析机构比对。 目前全国最大的检测体系： 由农业部蔬菜品质监督检验测试中心（北京）和农业 部药检所创建，并常年进行检测，具有技术成熟以及结果可 靠等特点。 设备： 电子天平、电热恒温水浴锅、调速多用振荡器、TU18 00/1810紫外可见分光光度计 要求： 同时对蔬菜中的硝酸盐、亚硝酸盐和农药残留量进行 检测，需要时检验吊白块。 农药残留量快速检测方法农药残留量快速检测方法 传统的农药残留量分析技术的一般过程 传统的农药残留量分析技术的优缺点 传统的农药残留量分析技术存在的问题 ?能对农产品的生产、运输、批发、零售环节农药残留量分析

3、 作出快速响应，无法满足农产品生产、流通环节的需要 ?检测费用太高，如果在农产品的生产、运输、批发、零售各 个环节普遍使用，社会可能无法承担 ?检验缺乏针对性，在农产品的生产、运输、批发、零售各个 环节普遍使用传统的农药残留量分析技术，可能会带来一定 程度的浪费 ?检验需要专业的检测机构来完成，现有的社会检测机构及检 验能力无法承担社会各个环节的所有检测任务 ?检验需要配置大量的仪器设备，造成了传统的农药残留量分 析技术无法在商场、农产品生产基地等场所进行推广使用 国内外现行的农药残留量快速检测方法 生化检测法（胆碱酯酶生化检测法（胆碱酯酶/ /酶抑制法）酶抑制法） 免疫分析法免疫分析法 是将

4、抗体抗原反应与现代测试手段相结合的微量分析法。具 有高灵敏度和高效能等优点，仅需要很少的仪器设备和专业 培训，是农药残留量快速检测及测定致癌物的好方法。但该 方法开发费用高，开发时间长约1年，而且只适用于分析一种 农药或一类农药。 活体生测法活体生测法 安达市植保植检站利用敏感家蝇对蔬菜低残毒生产区的蔬菜 进行大面积多点次检测，查出严重超标的蔬菜比率为0.15%。 该法测定时间需3小时，但必须具有专用养虫室并常年饲养昆 虫。 我国现行的农药残留量分析的总体解决方案 检测方法 应用范围 方法精度 检测速度 速测卡法 快速筛选 低 快 酶抑制法 快速筛选并提供总量抑制率指标 中 中 传统法 农药残

5、留量的准确定性、定量 高 很慢 农药残留量快速检测技术的优缺点 缺点 缺点 无法对每一种农药进行准确的定性 检验分析周期短 无法定量或定量准确度不高 检验费用低 能够检验的农药种类范围较窄 无需要消耗大量的有机溶剂，不会造成环境污染 不需要使用 GC、HPLC 等昂贵的大型仪器设备 对检验分析人员的化学分析水平要求较低 检验分析过程简便，容易掌握 我国现行的农药残留量快速检测技术 方法 标准编号 适用范围 速测卡法（纸片法） GB/T 5009.1992002 蔬菜 酶抑制法 NY/T 4482001 蔬菜 GB/T 5009.1992002 蔬菜 GB/T 186252002 茶 GB/T

6、186262002 肉 GB/T 186302002 蔬菜 （最新有关标准）GB/T5009.199-2002，由卫生部制 订，是目前使用最广泛的标准。 农药的分类 农药残留量快速检测技术的检测对象 有机磷类农药 氨基甲酸酯类农药 以上两类农药的有毒代谢产物 蔬菜农药残留量危害程度评估及取样方法 评估原则： 危害性（Hazard）=毒性接触程度（Exposure） 评估方法： 危害性越大，采样频次越高，样本数量越大，监管等级越高 蔬菜中农药残留量样品采集原则： 蔬菜品种数量越大，采样频次越高，样本数量越大。 蔬菜抽样数量在生产基地和流通环节（如：市场）均使用 货物“货批”数来衡量。 产地检验原

7、则：以同一品种、同一田块、同期采收的蔬菜， 以1hm2为一抽样批次，不足1hm2也视为一个货批。 市场检验原则：以同一产区、同一品种、同一销售单位为 一个货批。 产地蔬菜样品采集方法 原则： 对每一货批按5点抽样法取样，将样品缩分后抽取2kg， 取1kg样品作为备样，备样应低温保存。 产地蔬菜样品采集方法 原则： 从每一货批中随机抽取2kg样品，取1kg样品作为备样， 备样应低温保存。 注意： 随机随机随意随意 常见蔬菜农药残留量的采集对象及检测部位 样品名称 检测部位 番茄、茄子 去蒂供测 黄瓜 去果柄供测 萝卜、胡萝卜 叶、根（用水轻轻洗去根泥、稍晾干）分别供测 大白菜、小白菜 去根、去外

8、测腐叶、供测 采集对象： 蔬菜基地：上市前的蔬菜 市场：正在售卖的蔬菜 检测部位 蔬菜农药残留量快速检测结果判定基本原则 农药残留量按简易测定方法进行测定时，从 每一货批中随机抽取3个样品进行现场测定。对 于一次检验出现阳性时允许复测。若复测仍呈阳 性者，应进行色谱测定，以色谱测定法测定的结 果为判定依据。 速测卡法（纸片法，GB/T 5009.1992002） 原理 速测卡法（纸片法，GB/T 5009.1992002） 1、试剂 速测卡：固化有胆碱酯酶和靛酚乙酸酯试剂的纸片。 洗脱液（pH7.5缓冲溶液）：取15.0g磷酸氢二钠Na2HPO412H 2O与1.59g无水磷酸二氢钾KH2PO

9、4，用500mL蒸馏水溶解。 2、仪器 常量天平 372恒温装置（选配） 速测卡法（纸片法，GB/T 5009.1992002） 整体测定法 1、选取有代表性的蔬菜样品，檫去表面泥土，剪成1cm左右见方 碎片，取5g放入带盖瓶中，加入10mL缓冲溶液，振摇50次， 静置2min以上。 2、取一片速测卡，用白色药片沾取提取液，放置10min以上进行 预反应，有条件时在37恒温装置中放置10min。预反应后的 药片表面必须保持湿润。 3、将速测卡对折，用手捏3min或用恒温装置恒温3min，使红色 药片与白色药片迭合发生反应。 4、每批测定应设一个缓冲液的空白对照卡。 速测卡法（纸片法，GB/T

10、5009.1992002） 表面测定法（粗筛法） 1、檫去蔬菜表面泥土，滴23滴缓冲溶液在蔬菜表面，用另一 片蔬菜在滴液处轻轻摩擦。 2、取一片速测卡，将蔬菜上的液滴滴在白色药片上。 3、放置10min以上进行预反应，有条件时在37恒温装置中放置 10min。预反应后的药片表面必须保持湿润。 4、将速测卡对折，用手捏3min或用恒温装置恒温3min，使红色 药片与白色药片迭合发生反应。 5、每批测定应设一个缓冲液的空白对照卡。 速测卡法（纸片法，GB/T 5009.1992002） 结果判定： 检测结果以酶被有机磷或氨基甲酸酯类农药抑制（阳性）、 未抑制（阴性）表示，具体见下表： 判定结论 判

11、定依据 强阳性结果 速测卡白色药片不变色，说明农药残留量较高 弱阳性结果 速测卡白色药片显浅蓝色，说明农药残留量相对较低 阴性结果 速测卡白色药片显天蓝色或与空白对照卡相同 速测卡法测定结果 阳性结果阳性结果 阴性结果阴性结果 速测卡法（纸片法，GB/T 5009.1992002） 部分常见农药的检出限及最大残留限量（单位：mg/kg） 农药名称 检出限 残留限量 农药名称 检出限 残留限量 甲胺磷 1.7 不得检出 敌敌畏 0.3 0.2 对硫磷 1.7 不得检出 敌百虫 0.3 0.1 水胺硫磷 3.1 不得检出 乐果 1.3 1.0 马拉硫磷 2.0 不得检出 西维因 2.5 2.0 久

12、效磷 2.5 不得检出 好年冬 1.0 不得检出 乙酰甲胺磷 3.5 0.2 呋喃丹 0.5 不得检出 速测卡法（纸片法，GB/T 5009.1992002） 速测卡法的使用注意事项 葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中含有对酶 有影响的植物次生物质，容易产生假阳性。处理这类样品时，可采取整 株（体）蔬菜浸提或采用表面测定法。对一些含叶绿素较高的蔬菜，也 可采取整株（体）蔬菜浸提的方法，减少色素的干扰。 当温度条件低于37，酶反应的速度随之放慢，药片加液后放置反应的 时间应相对延长，延长时间的确定，应以空白对照卡用（体温）手指捏 3min时可以变蓝，即可往下操作。注意样品放置

13、的时间应与空白对照卡 放置的时间一致才有可比性。空白对照卡不变色的原因：一是药片表面 缓冲溶液加得过少、预反应后的药片表面不够湿润，二是温度太低。 速测卡对农药非常敏感，测定时如果附近喷洒农药或使用卫生杀虫剂， 以及操作者和器具沾有微量农药，都会造成对照和测定药片不变蓝。 红色药片与白色药片叠合反应时间以3min为准，3min后的蓝色会逐渐加 深，24h后颜色会逐渐褪去。 酶抑制法（GB/T 5009.199-2002、NY/T 448-2001） 原理 1、试剂 pH8.0缓冲溶液：取11.9mg无水磷酸氢二钾与3.2mg磷酸二氢 钾，用1000mL蒸馏水溶解。 显色剂：取160mg二硫代二

14、硝基苯甲酸（DTNB）和15.6mg碳酸 氢钠，用20mL缓冲溶液溶解，在4冰箱中保存。 底物：取25.0mg硫代乙酰胆碱加8.0mL蒸馏水溶解，摇匀后置 于4冰箱中保存，保存期不超过一周。 乙酰胆碱酯酶：根据酶的活性情况，用缓冲溶液溶解，但吸 光度值应控制在0.3以上。 2、仪器 常量天平 372恒温水浴或恒温箱 分光光度计或快速测定仪 酶抑制法（GB/T 5009.199-2002、NY/T 448-2001） 分析步骤 样品处理：选取有代表性的蔬菜样品，檫去表面泥土，剪成1cm 左右见方碎片，取1g放入烧杯或提取瓶中，加入5mL缓冲溶液浸没菜 叶，每3min摇动一下烧杯，于10min后吸

15、取2.5mL提取液于试管，待 测。 测定： 对照溶液测试：于试管中加入2.5mL缓冲溶液，再加入0.1mL酶液、0. 1mL底物摇匀，此时检液开始显色反应，应立即放入仪器比色池中， 于410nm波长下比色，记录反应3min的吸光度变化值或仪器记录值A0。 样品测试：于试管中加入2.5mL样品提取液，其它操作与对照溶液测 试相同，记录反应3 min的吸光度变化值或仪器记录值At。 结果的表述计算： 注意注意：使用速测仪可以直接读出抑制率值，而无须手工计算。 酶抑制法（GB/T 5009.199-2002、NY/T 448-2001） 结果判定结果判定 酶抑制法（GB/T 5009.199-200

16、2、NY/T 448-2001） 判定依据 说明 抑制率50 合格 抑制率50 超标，说明蔬菜中含有有机磷或氨基甲酸酯农药 注意注意： 抑制率与农药残留量正相关，测定值越高，说明农药残留量越高。 CL-1型农药残留速测仪的操作步骤 将阻断光路黑块放入速测仪的比色池内，接通仪器电源，此时仪 器自动进入预热阶段，显示屏显示数值为1200； 仪器显示数值由1200减少为0，并发出“嘀”蜂鸣声时，表示仪 器预热完成（整个过程约需时15min）； 按下“0”按钮，进行调“0”操作，此时仪器显示数值为0或其 左右的数值； 取出阻断光路黑块，按下“100”按钮，进行调满度操作，此时 仪器显示数值为100或其

17、左右的数值； 放入对照溶液，按下“对照”按钮，仪器将自动进行对照样品的 测试，3min后，仪器发出“嘀”蜂鸣声时，表示对照溶液测试完成； 取出对照溶液，放入待测样品，按下“样品”按钮，仪器将自动 进行待测样品的测试，3min后，仪器发出“嘀”蜂鸣声时，表示样 品溶液测试完成，此时按下再次“样品”按钮，仪器即可显示样品 抑制率； 其余样品的测定重复步骤的操作即可。 酶抑制法（GB/T 5009.199-2002、NY/T 448-2001） 部分农药浓度与抑制率对照（实验条件：37，乙酰胆碱酯酶） 酶抑制法（GB/T 5009.199-2002、NY/T 448-2001） 浓度（ug/mL）

18、0.4 0.8 1.6 3.75 甲胺磷 抑制率（%） 35.0 52.0 69.0 90.0 浓度（ug/mL） 0.4 0.6 0.8 1.2 1.6 3.75 氧乐果 抑制率（%） 26.4 29.4 36.7 52.7 59.6 76.3 浓度（ug/mL） 0.1 0.15 0.2 0.25 0.4 0.5 敌百虫 抑制率（%） 13.6 22.9 37.2 50.6 63.9 73.9 浓度（ug/mL） 0.001 0.002 0.003 0.004 0.006 0.008 呋喃丹 抑制率（%） 25.2 50.3 58.8 66.8 73.2 78.9 酶抑制法的使用注意事项

19、葱、蒜、胡萝卜、生姜、韭菜等蔬菜中含有破坏酶活性或使蓝色产 物褪色的物质，处理这类样品时，不要剪得太碎，浸提时间不要太 长，必要时可采取整株（体）蔬菜浸提法。 如室温低于20，建议使用30水浴，即提取液要在水浴中预热， 并且加入酶液后的试管也需要放置于水浴中，同时室温也应控制在2 0以上。 速测试剂对农药非常敏感，测定时如果附近喷洒农药或使用卫生杀 虫剂，以及操作者和器具沾有微量农药，都会对检测结果带来影响。 速测仪长期处于开机等待状态时，应将阻断光路黑块放入速测仪的 比色池内，避免仪器感光元件因过度疲劳而损坏。 标准NY/T 4482001使用的丁酰胆碱酯酶对甲基对硫磷、乐果、毒 死蜱、二嗪

20、磷等农药不太灵敏，检出浓度均在10mg/kg以上。 酶抑制法（GB/T 5009.199-2002、NY/T 448-2001） 方法特点 该方法是与国际接轨的一个农药残留量快速检测方法，它等 同于美国公职分析化学师协会AOAC 12th 29.049-29.055食 品中有机磷农药残留测定胆碱酯酶抑制法方法，在国外 已得到普遍的应用，检测结果更具可比性。 方法检测对象广泛（有机磷农药和氨基甲酸酯类农药），而 且适用于一些基质复杂的样品，例如：蔬菜、水果、茶叶和 肉等。 具有较高的灵敏度。 适用的温度范围广，在1535下可直接测定，无需其它温 控设施。 比色波长为600nm。 样品测定时，无需

21、设置对照。 测定结果表示简单，无需计算抑制率，由吸光度值直接作出 判定。 GB/T 1862002系列标准方法的应用 GB/T 1862002系列标准方法与GB/T 5009.1992002等标 准方法的比较 GB/T 1862002系列标准方法的应用 比较项目 GB/T 1862002 GB/T 5009.1992002 适用样品 蔬菜、 水果、 茶叶和肉等多种类型 蔬菜 检测对象 有机磷农药和氨基甲酸酯类农药 有机磷农药和氨基甲酸酯类农药 可直接测定的温度范围 1535 2035 比色波长 600nm 410nm 是否需要设置对照 否 是 使用的主要设备 分光光度计 分光光度计或速测仪 操

22、作过程 较为复杂 简单 结果的表示 吸光度值 抑制率 原理 GB/T 1862002系列标准方法的应用 1、试剂 缓冲液： pH 7.71磷酸盐缓冲液（适用于蔬菜等的检测）： A液1/15mol/L磷酸氢二钠溶液：取磷酸氢二钠（Na2HPO412H2O）2.3876g，加水定容 至100mL。 B液1/15mol/L磷酸二氢钾溶液：取磷酸二氢钾0.9078g，加水定容至100mL。 取A液90mL、B液10mL混合，即得pH 7.71磷酸盐缓冲液。 pH8的三羟甲基氨基甲烷（Tris）盐酸缓冲液（适用于茶叶、肉等的检测）： 取50mL0.1mol/LTris、29.2mL0.1mol/L盐酸加

23、水定容至100mL即可。 底物溶液（2%碘化硫代乙酰胆碱水溶液）： 1g碘化硫代乙酰胆碱，加缓冲液溶解并定容至50mL即可。 显色剂：0.04%2,6-二氯靛酚水溶液。 氧化剂：0.5%次氯酸钙水溶液。 还原剂：10%亚硝酸钠水溶液。 胆碱酯酶液：0.2g胆碱酯酶酶粉溶于10mL缓冲液中。 脱色剂：活性炭。 丙酮：分析纯。 碳酸钙：分析纯。 2、仪器 常量天平 分光光度计 GB/T 1862002系列标准方法的应用 几 种 代 表 性 农 产 品 的 测 定 步 骤 GB/T 1862002系列标准方法的应用 结果判定 GB/T 1862002系列标准方法的应用 吸光度值 蔬菜 茶叶、肉 说明

24、 0.7 0.9 1.3 检出 注意：吸光度值与农药残留量正相关，测定值越高，说明农药残留量越高。 GB/T 1862002系列标准方法 对部分农药的最低检出浓度（单位：mg/kg） GB/T 1862002系列标准方法的应用 蔬菜 农药 番茄 黄瓜 生菜 茶叶 肉 敌百虫 0.3 0.8 0.4 2.0 2.0 乐果 0.5 0.5 0.4 3.0 3.0 甲基对硫磷 0.5 0.3 0.1 3.0 3.0 呋喃丹 3.0 3.0 2.0 4.0 4.0 甲胺磷 10 15 15 20 20 GB/T 1862002系列标准方法的使用注意事项 如室温低于15，建议使用30水浴，即提取液要在水

25、浴中预热， 并且加入酶液后的试管也需要放置于水浴中，同时室温也应控制在2 0以上。 速测试剂对农药非常敏感，测定时如果附近喷洒农药或使用卫生杀 虫剂，以及操作者和器具沾有微量农药，都会对检测结果带来影响。 分光光度计长期处于开机等待状态时，应将比色室盖打开，避免仪 器感光元件因过度疲劳而损坏。 GB/T 1862002系列标准方法的应用 农药残留量快速检测中比色皿使用的注意事项 使用的比色皿均须用待测液润洗三遍后方可装样，如外部 被浸湿可用擦镜纸擦干。 比色皿的清洗，可将比色皿浸泡在阴离子表面活性剂的碳 酸钠溶液中（2%,W/V )，必要时应在40-50加热约10min,取 出然后在1+5过氧

26、化氢的硝酸溶液中浸泡30min，用水冲洗 后用蒸馏水洗净，倒立在清洁的纱布上控干。放入干燥器保 存。若急用时可在水洗后用乙醇、乙醚洗涤吹干。经常使用 时，洗后将比色皿浸泡在蒸馏水中保存。 GB/T 1862002系列标准方法的应用 酶抑制法试剂质量的鉴别方法 乙酰胆碱系统乙酰胆碱系统：2002年卫生部批准了国家标准GB/T 5009.199-2002蔬菜中 有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量快速检测方法。标准规定蔬菜农残检测 用乙酰胆碱系统而非丁酰胆碱（NY/T 4482001）。对于原来使用丁酰胆碱 系统的仪器是同样可以使用乙酰胆碱的，因为这个试验的基本原理是：酶把 乙酰胆碱或丁酰胆碱切成乙酰和

27、胆碱或丁酰和胆碱，切下的丁酰和乙酰不起 作用，而发生显色作用的是胆碱与显色剂产生的黄色物质，都在410波长处 检测，并且抑制率的计算公式也是相同的。 试剂敏感度高试剂敏感度高：严格的方法是在控制的温度条件下参照国家标准GB/T 5009. 199-2002中农药与抑制率对照表进行检测。比较简单的方法是，以同样的农 药和方法测试不同的抑制率，记录其吸光度值与抑制率，吸光度值与抑制率 都比较高的试剂是敏感度高的试剂。 酶稳定性好酶稳定性好：抑制率是样品值与对照值的比较而得到的，因此酶液在检测中 应始终保持同样的质量，低质量的酶液在稍高的温度下会随时间活性明显下 降，因此在检测中，后检测的蔬菜会由于

28、酶液活性的下降引起抑制率偏高， 导致错误判断。判断酶液稳定性的方法是将酶液分成两部分，其一放置于0 以下，另一放置于30以上，4小时以后按照检测对照的方法测定两个酶 液的吸光度值，吸光度值差别小的酶液为稳定性好的酶液。 底物新鲜度好底物新鲜度好：底物具有自动水解的倾向，过度水解的底物会影响检测的正 确性，并且保存时间也短，是质量差的试剂。判断底物新鲜度的方法是，在 2.5mL提取液内加入0.1mL底物和0.1mL显色剂，然后放入仪器中看透过率， 透过率大的为新鲜度好的试剂。 各种农药残留量快速检测技术在实践中的应用策略各种农药残留量快速检测技术在实践中的应用策略 参考网站参考网站 WWW.AO

29、AC.COM 紫外紫外- -可见分光光度计的基本结构可见分光光度计的基本结构 光源单色器吸收池检测器 氘灯、钨灯 石英棱镜、光栅 石英池 光电倍增管 谢谢！谢谢！ q$u*x-A2D5H8KbNfQiTlXo#s%v(y0B3E6I9LdOgRjVmYp!t&w)z1C4G7JaMePhSkWnZr$u*x+A2D5H8KcNfQiUlXo#s%v)y0B3F6I9LdOgSjVmYq!t&w-z1D4G7JbMePhTkWoZr$u(x+A2E5H8KcNfRiUlXp#s%v)y0C3F6IaLdOgSjVnYq!t*w-z1D4G8JbMeQhTkWoZr%u(x+B2E5H9KcOfR

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