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文档简介
1、实验四 猪肝细胞DNA提取 9ml肝匀浆(用离心管量取)肝匀浆(用离心管量取) 离心(离心(3000rpm,5min) 上清液上清液 沉淀沉淀 (细胞质)(细胞质) 加加SSCSSC至至10ml10ml 离心(离心(3000rpm,5min) 沉淀(灰白色纯净肝细胞核)沉淀(灰白色纯净肝细胞核) 上清液(弃去)上清液(弃去) 沉淀(肝细胞核)沉淀(肝细胞核) Tris-HCl-NaCl 缓冲液至缓冲液至6ml 搅拌,混匀,转入三角瓶搅拌,混匀,转入三角瓶 25SDS(终浓度(终浓度1.6) 0.4ml 固体固体NaCl(终浓度(终浓度1mol/L) 0.4g 加塞、摇动加塞、摇动15min 氯
2、仿氯仿- -异戊醇异戊醇6.4ml 加塞、摇动加塞、摇动10min10min 离心(离心(3000rpm,10min) 上层上层 中层中层 下层下层 变性蛋白质变性蛋白质氯仿氯仿DNA提取液提取液 滴管转移至大试管滴管转移至大试管 二倍体积二倍体积9595乙醇乙醇 吸打几次吸打几次,观察观察DNA析出析出 三 实验结果与讨论 1 1 实验结果实验结果 (1)(1)画图,描述画图,描述DNADNA提取过程中的实验现象提取过程中的实验现象 (2) (2)成分鉴定成分鉴定 2 2 结论结论 3 3 实验分析实验分析 4 4 思考题思考题:(:(1 1)共几次离心?每次要上清共几次离心?每次要上清/ /沉淀?沉淀? WhyWhy? (2 2)提取过程加入各种试剂(如)提取过程加入各种试剂(如NaClNaCl、氯仿、乙、氯仿、乙 醇等等)的作用?醇等等)的作用? 离心机使用注意事项:离心机使用注意事项: 1.1.记住离心管编号;记住离心管编号; 2.2.离心管必须离心管必须先平衡后才对称先平衡后才对称放入离心放入离心 机;机; 3.3.避免液体洒在离心机上面或钻头中;避免液体洒在离心机上面或钻头中; 4.4.启动后,如有不正常噪音或震动,立启动后,如有
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